叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及AFLP遗传多样性分析(共10页)

1、园艺学报，（）： 2014411223732382 http: / www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: 收稿日期(rq)：20140805；修回日期：20141017 基金项目：国家(guji)科技支撑计划项目（2012BAD21B04）；山东省农业良种工程重大课题（鲁农良字20117号）；国家植物种质资源共享平台(pngti)项目（2013-39） 叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及AFLP遗传多样性分析 吴岐奎，邢世岩*，王 萱，孙立民 （山东农业大学林学院，山东泰安 271018） 摘 要：对叶用银杏种质资源进行黄酮和萜

2、内酯类含量及AFLP遗传关系分析。结果表明，叶用银杏种质资源在黄酮和萜内酯类含量水平和DNA分子水平上都存在较高的遗传多样性。68份叶用银杏种质叶片提取物成分中银杏苦内酯A、B、C、J和白果内酯B，银杏总内酯，黄酮的平均含量分别为0.0371%、0.0185%、0.0280%、0.0133%、0.0243%、0.1216%、1.7103%。8对AFLP引物组合共扩增出1 408条谱带，其中多态带为99.28%，Neis基因多样性和Shannons指数分别为0.1939和0.3142；种质间的遗传相似系数在0.2924 0.7413之间，平均值为0.4888。种质间基于黄酮和萜内酯类含量分析的聚

3、类分析结果与基于遗传相似系数的UPGMA聚类分析结果基本一致。利用黄酮和萜内酯类含量和AFLP分析相结合的方法，筛选出高黄酮和萜内酯类特异种质，对叶用银杏种质资源的评价与保护有一定的积极意义。 关键词：银杏；种质资源；叶用；黄酮；萜内酯类；含量；AFLP；遗传多样性 中图分类号：S 792.95 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）12-2373-10 Genetic Diversity of Leaf-used Ginkgo biloba Germplasms Based on Flavonoids and Ginkgolides Contents and AFLP Ma

4、rkers WU Qi-kui，XING Shi-yan*，WANG Xuan，and SUN Li-min （College of Forestry，Shandong Agricultural University，Taian，Shandong 271018，China） Abstract：The genetic relationship of leaf-used Ginkgo biloba L. germplasms were evaluated by flavonoids and ginkgolides contents and AFLP markers. The results sho

5、wed that rich genetic diversity existed in both flavonoids and ginkgolides contents and AFLP markers. The average content of leaf extracts（Ga，Gb，Gc，Gj，Bb，Te，GF）in 68 leaf-used G. biloba L. germplasms are 0.0371%，0.0185%，0.0280%，0.0133%，0.0243%，0.1216% and 1.7103% respectively. Among the 1 408 bands

6、obtained from 8 selective primer pairs，99.28% of them were polymorphic. Neis genetic diversity was 0.1939，and Shannons index was 0.3142. The molecular genetic similarity coefficients range from 0.2924 to 0.7413，with an average of 0.4888. The results of hierarchical cluster analysis based the flavono

7、ids and ginkgolides contents of different populations and UPGMA exhibited a good consistency. By the hybrid method of flavonoids and ginkgolides contents and AFLP markers analysis，screen out the distinctive G. biloba germplasms of high-flavonoids and ginkgolides，would be valuable for germplasm manag

8、ement and * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：xingsy） 2374 园 艺 学 报 41卷 utilization of leaf-used G. biloba L. germplasm. Key words：Ginkgo biloba；germplasm；leaf-used；flavonoids；ginkgolides；content；AFLP；genetic diversity 银杏(ynxng)（Ginkgo biloba L.）是银杏科单属种植物(zhw)，是第四纪冰川之后唯一保存下来的孑遗植物。银杏果、叶、材等用途广泛，具有(

9、jyu)较高的经济效益、生态效益和社会效益（邢世岩，2013）。自1965年德国的Schwabe首次将银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，EGb）引入医学实践后，叶用银杏的栽培、生理活性物质的提取和加工等一系列的研究逐步开展，目前法国、德国、新西兰、美国等对叶用银杏药物成分的研究处于领先水平（Dipak et al.，2014）。叶用银杏以叶大、高产、优质为主要选种目标，优先选择叶内有效成分含量高的种质。中国是银杏资源的起源、进化及分布中心，拥有大量的银杏资源，积极开展叶用银杏种质资源研究具有重要意义（邢世岩，1997）。 近年银杏成为药用研究开发的热点植物之一，其生理活

10、性物质的含量水平是评价银杏药物制剂最常用的指标（Del Tredici，1991）。目前从银杏叶片中分离出来的成分较为复杂，主要有黄酮类、萜内酯类、聚戊烯醇等化合物，此外还有酚类、生物碱、有机酸、碳水化合物和矿质元素等药用成分（史清文 等，1995）。有关银杏叶提取物的研究大多集中在其主要成分的生理生化水平（陈佳 等，2010；Chen et al.，2012）及药用效果（Sandra et al.，2010；Zhou et al.，2011）方面。黄酮类和萜内酯类化合物（银杏苦内酯A、银杏苦内酯B、银杏苦内酯C、银杏苦内酯J、白果内酯B）是其中最主要的两大类生理活性物质，具有改善血液循环抑制

11、血栓形成、拮抗支气管收缩、改善脑细胞代谢水平及清除自由基等多种作用（Wang et al.，2006a；Giedre et al.，2010）。 分子标记技术在银杏种质遗传多样性（Tsumura & Ohaba，1997；王利 等，2009；Singh et al.，2010）、遗传图谱的构建（刘叔倩 等，2001）、银杏雌雄性别鉴定（Liao et al.，2009）、银杏遗传变异和特异种质分析（Fan et al.，2004；Shen et al.，2005）等方面有较多的研究报道。AFLP标记是目前较为常用的分子标记方法，综合了RFLP和RAPD技术的优点，已用于观赏银杏（Wang et

12、 al.，2006b）、雄株银杏（郭彦彦，2006）、雌株银杏（王利 等，2008）等研究，但针对于叶用银杏种质资源遗传多样性和特异种质分析的研究报道较少。 本研究中采用银杏叶黄酮和萜内酯类含量分析与AFLP遗传多样性分析相结合的方法，筛选出黄酮和萜内酯类含量较高、遗传特异性较强的叶用银杏种质，为叶用银杏种质资源的开发、利用及特异种质的鉴定、保护提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 68份叶用银杏种质资源材料（表1）来自山东农业大学银杏种质资源苗圃。于2013年4月，每份材料采集幼嫩叶片3 4片，硅胶干燥保存备用，用于DNA的提取。于2013年8月，每份材料采集成熟叶片10片，用于

13、叶片黄酮和萜内酯类含量测定。 1.2 叶片黄酮和萜内酯类含量测定 银杏叶片提取物中的主要测定成分包括：银杏苦内酯A（Ga）、银杏苦内酯B（Gb）、银杏苦内酯C（Gc）、银杏苦内酯J（Gj）、白果内酯B（Bb）、银杏萜内酯（Te）和黄酮（GF）。 黄酮含量采用Rutin分光光度法（邢世岩 等，1998）测定。按GF（%，干样）= Rutin（g L-1）/样品质量（g） 稀释倍数 10-3 100计算。 12期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量(hnling)及AFLP遗传多样性分析 2375 萜内酯类含量采用HPLC国际标准（van Beek et al.，1990）测定(cdng

14、)。色谱条件：仪器岛津（Shimadzu）LC-10AD HPLC，视差折光(zhgung)检测器（RP-HPLC RI），色谱柱C18（Shimadzu），柱箱CTO-10A，柱温36 ，流动相为甲醇（CH3OH）水（H2O）= 13，流速0.8 1.0 mL min-1。银杏叶萜内酯类组分含量及总量按下式计算：银杏萜内酯（%）= A酯/A标 100/R 1.045/M。其中，R为内酯的响应因子（RGa = 1.12，RGb =1.16，RGc =1.26，RGj =1.21，RBb = 1.11）；M为叶片样品质量（mg）；A酯为萜内酯类组分的峰面积，A标为内标峰面积。 根据银杏叶各萜内酯

15、含量计算内酯总量，银杏叶内酯总量（Te，%）= Ga（%）+ Gb（%）+ Gc（%）+ Gj（%）+ Bb（%）= Gi（%）+ Bb（%）。 表1 叶用银杏种质来源、代号及性别 Table 1 Plant geographical origin，coed and sexuality of leaf-used G. biloba germplasm 来源 Origin 代号 Accession 性别 Sexuality 来源 Origin 代号 Accession 性别 Sexuality 安徽宁国Ningguo，Anhui Y1 雌Female 山东泰安Taian，Shandong Y35

16、 雌Female Y2 雄Male Y36 雌Female Y3 雌Female Y37 雌Female 福建芦山Lushan，Fujian Y4 雄Male Y38 雌Female 福建尤溪Youxi，Fujian Y5 雌Female Y39 雌Female 广西桂林Guilin，Guangxi Y6 雄Male Y40 雌Female 贵州印江Yinjiang，Guizhou Y7 雄Male 山东郯城Tancheng，Shandong Y41 雄Male Y8 雌Female Y42 雄Male Y9 雌Female Y43 雄Male 湖北安陆Anlu，Hubei Y10 雄Male

17、 Y44 雄Male 湖南东安Dongan，Hunan Y11 雄Male Y45 雄Male Y12 雌Female Y46 雄Male 江苏泰兴Taixing，Jiangsu Y13 雌Female Y47 雌Female 江西信丰Xinfeng，Jiangxi Y14 雌Female Y48 雌Female 山东海阳Haiyang，Shandong Y15 雄Male Y49 雌Female Y16 雌Female Y50 雌Female Y17 雌Female 山东枣庄Zaozhuang，Shandong Y51 雌Female Y18 雌Female 陕西延安Yanan，Shaanx

18、i Y52 雌Female 山东济宁Jining，Shandong Y19 雌Female 陕西杨陵Yangling，Shaanxi Y53 雌Female 山东蒙阴Mengyin，Shandong Y20 雄Male 陕西长安Changan，Shaanxi Y54 雄Male Y21 雌Female 陕西周至Zhouzhi，Shaanxi Y55 雄Male 山东青岛Qingdao，Shandong Y22 雌Female 四川万源Wanyuan，Sichuan Y56 雌Female 山东日照Rizhao，Shandong Y23 雄Male Y57 雌Female Y24 雄Male 云

19、南腾冲Tengchong，Yunnan Y58 雄Male Y25 雌Female Y59 雌Female Y26 雌Female Y60 雌Female 山东荣城Rongcheng，ShandongY27 雄Male 浙江富阳Fuyang，Zhejiang Y61 雌Female Y28 雌Female 浙江丽水Lishui，Zheijiang Y62 雄Male Y29 雌Female Y63 雄Male 山东泰安Taian，Shandong Y30 雄Male 浙江诸暨Zhuji，Zhejiang Y64 雌Female Y31 雄Male Y65 雌Female Y32 雄Male Y

20、66 雌Female Y33 雄Male Y67 雌Female Y34 雌Female Y68 雌Female 1.3 AFLP分析 用改良CTAB法（Doyle & Doule，1987）提取叶用银杏种质基因组总DNA，在CTAB提取缓冲液中加入巯基乙醇和PVP以除去酚和多糖物质，用紫外分光光度计测定提取的总DNA。AFLP分析参照Vos等（1995）的方法修改后进行，用Pst+ Mse内切酶组合对基因组DNA进行限制性酶切，并筛选出8对多态性高且稳定的引物组合进行扩增分析，扩增产物采用ABI 3730XL自动测序仪进行荧光检测，检测结果用GeneScan3.1软件进行分析，并将结果转化为

21、0/1数据矩阵用于统计分析。 2376 园 艺 学 报 41卷 表2 用于AFLP分析(fnx)的接头与引物 Table 2 Adaptors and primers used for AFLP analysis 引物Primer 序列(xli)Sequence 接头(ji tu)引物 Adaptor Pst 5-CTC GTA GAC TGC GTA CAT GCA-3；3-CA TCT GAC GCA-5 Mse 5- GA CGA TGA GTC CTG A G -3；3-TA CTC AGG ACT CAT-5 预扩引物 Primer for the pre-PCR amplifica

22、tion P0 5-GAC TGC GTA CAT GCA G-3 M0 5-GAT GAG TCC TGA GTA AC-3 选择性扩增引物 Primer for AFLP amplification P1 5-GAC TGC GTA CAT GCA GAA-3 P2 5-GAC TGC GTA CAT GCA GAC-3 P3 5-GAC TGC GTA CAT GCA GAG-3 P4 5-GAC TGC GTA CAT GCA GAT-3 P5 5-GAC TGC GTA CAT GCA GTA-3 P6 5-GAC TGC GTA CAT GCA GTC-3 P7 5-GAC TGC

23、 GTA CAT GCA GTG-3 P8 5-GAC TGC GTA CAT GCA GTT-3 M1 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACA A-3 M2 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACA C-3 M3 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACA G-3 M4 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACA T-3 M5 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACT A-3 M6 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACT C-3 M7 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACT G-3 M8 5-GAT GAG TCC TG

24、A GTA ACT T-3 1.4 数据统计与分析 利用Excel 2007对叶片黄酮和萜内酯类含量进行整理分析及相关计算，并采用SAS9.0软件对叶用银杏种质资源进行系统聚类分析。利用Excel 2007对AFLP扩增结果0/1数据矩阵进行分析，依据每对引物扩增出来的总条带及多态性条带数，计算多态带百分率。利用POPGENE version 1.31软件计算遗传多样性指标：等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）、Neis基因多样性（H）、Shannons信息指数（I）。采用NTSYSpc version2.10e软件计算各种质间的遗传相似性矩阵，并进行UPGMA聚类分析以了解叶用银杏种质

25、资源间的遗传关系。 2 结果与分析 2.1 黄酮和萜内酯类含量分析 根据色谱图计算68份叶用银杏的黄酮和萜内酯类含量，图1为Y52种质的色谱图。统计分析68份叶用银杏种质资源叶片银杏的黄酮和萜内酯类含量，记录其最大值和最小值，并计算各种成分的平均含量（表3），68份叶用银杏种质中Ga平均含量为0.0371%，其中Y16含量最多（0.1348%）；Gb平均含量为0.0185%，其中Y64含量最多（0.0472%）；Gc平均含量为0.0280%，其中Y16含量最多（0.0690%）；Gj平均含量为0.0133%，其中Y64含量最多（0.0372%）；Bb平均含量为0.0243%，其中Y52含量最多

26、（0.0582%）；Te平均含量为0.1216%，其中Y64含量最多（0.2813%）；GF平均 含量为1.7103%，其中Y64含量最多（2.4779%）。雌雄银杏之间的黄酮和萜内酯类含量虽有所不同，但其含量差别不大，差异并不显著。 图1 Y52种质的黄酮和萜内酯类（A）和标准EGb（B）的HPLC色谱图 Fig. 1 HPLC chromatogram of flavonoids and ginkgolides（A）and EGb（B）in the Y52 germplasm 12期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及AFLP遗传(ychun)多样性分析 2377 表3 叶用银

27、杏(ynxng)68份种质资源的黄酮和萜内酯类含量 Table 3 The analysis of flavonoids and ginkgolides contents for 68 leaf-used G. biloba germplasms % 代号(diho) Code 黄酮和萜内酯类 Flavonoids and ginkgolides 最大值 Maximum 最小值 Minimum 平均值 Average 雌株平均值 Average of female 雄株平均值 Average of maleGa 银杏苦内酯A Ginkgolide A 0.1348（Y16）0.0083（Y3）

28、0.0371 0.02330.0389 0.0280 0.0343 0.0127Gb 银杏苦内酯B Ginkgolide B 0.0472（Y64）0.0060（Y3）0.0185 0.00880.0181 0.0093 0.0190 0.0080 Gc 银杏苦内酯C Ginkgolide C 0.0690（Y16）0.0119（Y3）0.0280 0.01180.0284 0.0116 0.0276 0.0123Gj 银杏苦内酯J Ginkgolide J 0.0372（Y64）0.0028（Y46）0.0133 0.00780.0135 0.0078 0.0131 0.0078Bb 白果内

29、酯B Bilobalide B 0.0582（Y52）0.0057（Y54）0.0243 0.01210.0248 0.0126 0.0236 0.0114Te 银杏萜内酯 Ginkgolides 0.2813（Y64）0.0028（Y6）0.1216 0.05020.1247 0.0569 0.1166 0.0373GF 黄酮Flavonoids 2.4779（Y64）1.2697（Y4）1.7103 0.25131.7195 0.2467 1.6954 0.2629注：括号内为材料代号。Note：Plant coed is in bracket. 根据叶片黄酮和萜内酯类含量对68份种质资源

30、进行系统聚类分析（图2），在欧式距离为0.9 图2 叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量系统聚类图 Fig. 2 Dendrogram of leaf-used of G. biloba L. germplasms based on flavonoids and ginkgolides contents 2378 园 艺 学 报 41卷 处，将其划分(hu fn)为6大类。第类包含(bohn)48份种质，第类包含(bohn)12份种质，第类包含两份种质，第类包含3份种质，第类包含2份种质，第类包含1份种质。 2.2 遗传多样性分析 从64对引物中筛选出8对多态性高且表现稳定的引物组合对68份叶用

31、银杏种质材料进行扩增（部分结果见图3），每对引物的鉴别效率为100%。8对引物组合共扩增出1 408条谱带，扩增片段大小范围在70 500 bp之间，其中多态性条带为1 398条，平均每对引物组合扩增多态性条带174条，每对引物组合多态性条带百分率（PPB）为99.28%。8对引物组合共产生181条特异性条带（包括3条缺失带），不同引物组合产生的特异性条带数量有所不同，P-GAC/M-CTC产生的特异性条带最多，为30条，包括两条特异性条带，P-GAG/M-CTG产生的特异性条带最少（11条）。不同种质产生的特异性条带也有所不同，其中Y64产生的特异性条带最多（11条），Y33、Y44、Y46

32、未产生特异性条带。 图3 引物组合P-GAC/M-CTG对68份叶用银杏种质资源的AFLP扩增图谱 Fig. 3 AFLP patterns of 68 leaf-used G. biloba L. germplasms by P-GAC/M-CTG 运用POPGENE version 1.31软件对各位点观测的Na、Ne、H、I进行统计分析，68份叶用银杏种质观测等位基因数（Na）平均值为1.9928，有效等位基因数（Ne）平均值为1.1608，Neis基因多样性（H）平均值为0.1939，Shannons信息指数（I）平均值为0.3142（表4）。由此可见8对引物组合在所分析的68份叶用银

33、杏种质材料中多态性好，表明其遗传多样性处于一个较高的水平。 表4 基于不同引物组合的叶用银杏种质遗传多样性水平 Table 4 Genetic diversity level of leaf-used G. biloba L. germplasm based on different primer combination 引物组合 Primer 多态性条带 Polymorphic bands 多态带比例/% Parentage of polymorphic band Na Ne H I P-GAA/M-CAG 160 98.77 1.9877 0.1108 1.3243 0.3598 0.19

34、54 0.1852 0.3088 0.2498 P-GAA/M-CTG 183 98.92 1.9892 0.1037 1.2912 0.3099 0.1873 0.1626 0.3062 0.2195 P-GAC/M-CAC 180 100.00 2.0000 0.0000 1.2775 0.3080 0.1791 0.1614 0.2844 0.2189 P-GAC/M-CTA 172 98.85 1.9885 0.1069 1.3122 0.3458 0.1923 0.1759 0.3095 0.2341 P-GAC/M-CTC 165 99.40 1.9940 0.0776 1.313

35、5 0.3284 0.1967 0.1714 0.6158 0.2321 P-GAC/M-CTG 188 100.00 2.0000 0.0000 1.3166 0.2908 0.2071 0.1542 0.3372 0.2067 P-GAG/M-CTG 171 99.42 1.9942 0.0762 1.2903 0.2650 0.1962 0.1431 0.3251 0.1940 P-GAT/M-CAG 179 98.90 1.9890 0.1048 1.3105 0.3061 0.1971 0.1687 0.3168 0.2300 平均Mean 174 99.28 1.9928 0.07

36、25 1.1608 0.3155 0.1939 0.1653 0.3142 0.2231 12期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及AFLP遗传(ychun)多样性分析 2379 2.3 遗传关系(gun x)分析 不同种质间的遗传相似系数在0.2924 0.7413之间，平均0.4888，表明(biomng)各叶用银杏种质间遗传变异大，遗传关系复杂。其中Y19与Y37之间的遗传相似系数最大（0.7413），说明二者的亲缘关系最近，遗传差异性最小；Y55和Y63之间的遗传相似系数最小（0.2924），说明二者的亲缘关系最远，遗传差异性最大。Y39与其他叶用银杏种质间的平均相似系数最

37、大（0.5450）；Y36与其他叶用银杏种质间的平均相似系数最小（0.4133），说明Y36与其他叶用银杏资源相似性低，亲缘关系较远。 基于AFLP遗传相似系数对68份叶用银杏种质资源进行UPGMA聚类分析（图4），在相似系数0.50处可将其划分为4大类：A大类包含24份种质，B大类包含25份种质，C大类包含8份种质，D大类包含11份种质。地理距离较近的种质并没有聚在一起，这说明种质的聚类与地理距离并没有明确的关系。 图4 叶用银杏种质资源基于AFLP的UPGMA聚类图 Fig. 4 UPGMA dendrogram of leaf-used of G. biloba L. germplasm

38、 based on AFLP markers 2380 园 艺 学 报 41卷 2.4 黄酮和萜内酯类含量(hnling)与UPGMA聚类的比较分析 通过对68份叶用银杏(ynxng)种质资源分别进行黄酮和萜内酯类含量聚类分析及UPGMA聚类分析，含量(hnling)聚类结果中大类与UPGMA聚类中A、B大类对应，大类与D大类对应，、大类与D大类对应，结果表明两种聚类结果具有较高的一致性。 3 讨论 3.1 叶用银杏黄酮和萜内酯类含量分析 本研究中依据邢世岩等（2002）的叶子药物成分检测方法，采用高效液相色谱（HPLC），对国际通用的欧洲van Beek等（1990）测定方法进行了修改。 6

39、8份叶用银杏种质资源在叶片6种成分含量上都表现出差异性，通过系统聚类分析，将其划分为6大类。其中有10份种质（Y16、Y17、Y33、Y40、Y45、Y46、Y52、Y53、Y62和Y64）的黄酮和萜内酯类含量较高，达到良种选育标准（邢世岩，2013）。其中Y64的GB、GJ、Te、GF含量最高，Y16的GA、GC含量最高，Y52的BB含量最高。这10份种质可以作为叶用银杏生产的主要种植资源。其他类型的种质资源黄酮和萜内酯类含量普遍较低，因此在生产实践中如何通过人工选择、杂交育种或基因工程等方式培育出高黄酮和萜内酯类的叶用银杏新品种，有待于进一步研究。 本研究中银杏黄酮和萜内酯类含量在雌雄株中

40、并没有明显的差异表现。因此，在叶用银杏品种选择过程中雌雄性别可不作为重点指标考虑。 3.2 叶用银杏遗传多样性和遗传关系 银杏以中国为中心，广泛种植于世界各地，不同种植区的气候变化和地区间较多的引种杂交使银杏表现出较丰富的多样性。Singh等（2010）采用AFLP技术对印度西南地区的20株银杏进行分析，其多态带比例为80.47%，聚类关系较为复杂，地理来源与遗传距离之间没有确定的关系，本研究中UPGMA聚类结果与之一致，可能与银杏在不同区间内的广泛引种有关。王利等（2008）研究了49个银杏雌株种质的遗传关系，其AFLP多态带比例为98.44%，各品种间的相似系数为0.39 0.83，表明它

41、们存在不同程度的遗传差异。本研究中8对多态性较好的AFLP引物组合对68份叶用银杏种质资源进行扩增，条带清晰，且多态性较高（99.28%）。通过对各项遗传多样性指标（Na、Ne、H、I）表明，叶用银杏种质具有较强的遗传多样性，这可能与银杏为雌雄异株的特性有关。 UPGMA聚类分析结果与银杏黄酮和萜内酯类含量聚类分析结果具有较高的一致性。含量聚类分析将68份种质分为6大类，UPGMA聚类将68份种质分为4大类，各大类黄酮和萜内酯类含量呈递增趋势。因此，AFLP分子标记可以在一定程度上反映叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类的含量情况，在叶用银杏种质资源的开发、利用的过程中，应该结合黄酮和萜内酯类含量分

42、析和AFLP分析数据进行综合分析和评价。 3.3 叶用银杏特异种质的筛选 王利等（2008）研究了观赏银杏、雌株银杏的特异种质。郭彦彦（2006）研究了雄株银杏的特异种质。本研究中通过对68份叶用银杏种质的黄酮和萜内酯类含量进行分析，其中10份种质表现出一定的特殊性，黄酮和萜内酯类含量水平较高。10份特异种质中来源相同的Y16与Y17、Y33与Y40、Y45与Y46、Y52与Y53之间的亲缘关系较近，在UPGMA聚类分析中较为聚集，其中Y17、Y40、Y46、Y52多态性较好、特异性较高。 12期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量(hnling)及AFLP遗传多样性分析 2381

43、本研究首次针对(zhndu)中国主要68份叶用银杏种质资源，采用植物生理学及遗传学两方面相结合的试验方法进行研究和分析(fnx)验证，在叶片黄酮和萜内酯类含量及AFLP分子层面上对叶用银杏种质资源的分析得到统一。结合黄酮和萜内酯类含量、多态性、相似性、特异位点、聚类结果对所试材料进行分析，山东海阳的Y17（内酯T-5号）、山东泰安的Y40（内酯T-6号）、山东郯城的Y46（黄酮F-1号）、陕西延安的Y52、浙江丽水的Y62、浙江诸暨的Y64（黄酮F-2号）在系统聚类分析和UPGMA聚类分析中分别属于不同的大类，具有较强的代表性，是极其重要的特异种质，应加以保护和利用。 References C

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