几丁质培养基制备

1、、几丁质分解菌的分离几丁质也称壳多糖或称甲壳素，广泛地分布于海沙、海泥、海水、 淡水和土壤，以及吃几丁质的头足类动物的胃肠，虾、蟹体表中.如 几丁色色杆菌、嗜几丁杆菌、呈色几丁杆菌和蚀几丁芽泡杆菌等。它 们将几丁质分解成中间产物醋酸与还原糖，最终产物为二氧化碳与 氨.1 .几丁质培养基制备几丁质的制取：洗净蟹壳或将大海虾壳浸泡在l%HCl中7 天，(2天换盐酸溶液1次)脱去壳的钙质，使壳变得柔软而有韧 性。然后用水洗净外壳，剪成1X3厘米壳条。用2 %氢氧化钾溶液浸泡壳条10天，每2天加热一次，加热的 温度低于沸点为宜，借以除去几丁质以外的其他物质，如色素和蛋白 质等。用蒸馏水洗净壳条上的碱，

2、然后用乙醇抽提数次.直到全部颜色 脱净为止。这样的几丁质适用于液体培养基培养未纯化的细菌，和保存几丁 质分解菌.如用于琼脂培养基中的几丁质，必须将这种去净杂质的几丁质研 细分散于培养基中.这可用去杂质的若干几丁质条放于3升的瓶中， 在另一个烧瓶中准备好1500毫升冷水，用100毫升5%的硫酸加到装 几丁质条的烧瓶中，当几丁质刚溶解完时，迅速加入已准备好的1500 毫升冷水将酸稀释，静置过夜，使几丁质重新沉淀出来，轻轻倒出上 清液.反复离心，洗涤沉淀至使石蕊呈中性。或将几丁质放在一个透 水的玻璃纸袋里悬挂在流水中，使酸透析完全。按1： 10，使几丁质重新悬浮于水中。取5毫升悬液于直径10厘 米培

3、养皿时，以仍呈轻微而又清晰的乳白色为宜。将悬液分装于试管中，每管10毫升，于121笆下灭菌15分 钟。几丁质无机盐培养基制备：K2HPO41.0 克MgSO4 7H2O 0.5 克NaCl海水菌用30克 淡水菌0.5克CaCl2 2H2O0.1 克FePO4 2H2O 0.001 克NHCl 1.0 克4HO 1000毫升2溶解上列无机盐类，调pH为7. 0分装于试管中，每管10毫升, 各管加l条去杂质的几丁质条，于121笆蒸汽下灭菌15分钟，冷后 保存待用，无机盐琼脂培养基：将上述培养基的无机盐成分全部溶于 水后，加入2%的琼脂(不加几丁质)加热溶解之，调pH为7.0， 分装于试管中，分与每

4、管5毫升和10毫升的两种，在121笆蒸汽 中灭菌15分钟.(1)几丁质琼脂培养基：K2HPO4 0.7 克KH2PO40.3 克MgSO4 7H2O 0.5 克FeSO4 7H2O0.01 克ZnSO40.001 克琼脂10克蒸馏水1.0升Ph7.0以上为基础培养基，以121 C蒸汽灭菌20分钟、每100毫升 加20毫升胶体几丁质悬浮液和5毫克放线菌酮，或制成用于分离放 线菌的双层平板.底层用基础琼脂和放线菌酮，上层用胶体几丁质培 养基。(2)胶体几丁质的制备：取净几丁质15克加浓盐酸100毫升， 于冰浴中揽拌20分钟，离心，将上清液倒入冷蒸馏水中使再沉淀， 同时将沉淀物用浓盐酸再行处理，如此重复数次。最后加足蒸馏水于 沉淀物中，搅拌，便成奶油状，再用氢氧化钠溶液调pH至7.0，分 装入广口瓶，每瓶20毫升121 C蒸汽下灭菌20分钟。二将5g细粉几丁质溶于88ml浓盐酸中，此几丁质成胶状，在4