实验室生物安全及管理Biosafty of Laboratory

1、实验室生物安全及管理Biosafty of Laboratory上海交通大学附属第六人民医院 中心实验室 杨翠霞 生物安全是一个重要的国际性问题国际社会系列事件表明：由于滥用和排放微生物因子和毒素，公共卫生正受到新的威胁必须避免生物资源的不当使用3主要内容实验室生物安全概论实验室生物安全法律法规和标准生物安全实验室的管理4一、实验室生物安全概论是指当实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过实验室设计建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化的操作规程等综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染什么是实验室生物安全？实验室活动中潜在的生物安全危害因素气

2、溶胶 aerosols：粒径为0.001ul-100ul生物因子 biological agents针刺伤实验动物抓咬实验样本的接触 损伤的皮肤眼结膜呼吸道消化道感染途径实验室感染-统计数据1985-2013年美国CDC确认了58名HIV暴露感染，其中1999年以后确认的感染人数为1人感染途径包括针刺伤49、黏膜暴露5人、皮肤和黏膜同时暴露2人、为止2人2003年9月：新加坡一位27岁的博士后在实验室工作时感染了SARS病毒2003年12月：台湾军方医学院防非典研究所感染SARS。2004年4月：北京中国CDC ，实验人员感染SARS病毒实验室的生物安全事件生物安全分级根据所操作的生物因子的危

3、害程度和采取的防护措施，将生物安全防护水平（biosafety level, BSL）分为4级；I级防护水平最低，IV级防护水平最高；以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平。 10实验室生物安全防护的目的保护操作者保护环境保护被操作对象111级生物安全防护（BSL-1）适用于实验对象已知对健康成年人无致病作用，对实验室工作人员和环境的潜在危害很小。 例如：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌122级生物安全防护（BSL-2）适用于实验对象已知对人和环境具有中等潜在危害例如：麻疹病毒乙肝病毒弓形虫 *有有效的疫苗或抗生素治疗有效 血源病原体人类体液（尤其是有血液污染的

4、体液） 特别要警惕污染的针头或锐器133级生物安全防护（BSL-3）适用于实验对象是通过呼吸途径使人感染导致严重的甚至是致死性疾病的材料 *通过气溶胶途径传播的致病菌例如：结核杆菌圣路易脑炎病毒艾滋病病毒的研究(血清学实验除外)144级生物安全防护（BSL-4）适用于实验对象危险的、新的感染性材料，表现出通过气溶胶途径传播实验室感染和致病疾病的高危险度 * 有暴露于通过气溶胶 传播或者传播途径不明确的致病因子例如：埃博拉病毒无名病毒里夫谷热病毒生物危害评估对微生物和毒素可能给人或环境带来的危害进行评估目的是确定生物安全防护等级、实验标准操作规程、实验人员的防护装备防止工作人员发生感染，同时避免

5、过分防护造成群众恐慌评估目的：实验室生物安全防护的基本原则 安全设备和个体防护 实验室设计与建造的特殊要求安全操作规程 管理制度 防护屏障一级：无须使用生物安全柜、穿工作服，戴防护眼镜、戴手套 二级：生物安全柜、实验室设施结构、通风系统 18防护屏障P3实验室布局人流：一更（换鞋）二更（清洁）缓冲（清洁）内准备（半污染）缓冲（污染）主实验室（污染）物流：外准备（清洁）灭菌内准备（半污染）主实验室（污染）P3实验室防护可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作均应在生物安全柜（2级生物安全柜为宜）或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备处理高浓度或大容量感染性材料必须在生物安全柜（2级生物安全

6、柜为宜）或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备BSL-2实验室的要求BSL-2实验室的建设要求BSL-2实验室的建设要求22二、实验室生物安全法律法规和标准国际组织和国外病原微生物实验室生物安全相关法规和指南我国病原微生物实验室生物安全相关法规和标准23国际组织和国外病原微生物实验室生物安全相关法规和指南WHO的“实验室生物安全手册” 1988年第一版，1993年第二版，2004年第三版欧盟（EEC）： ECC委员会指令93/88-对微生物危险等级分类美国微生物和生物医学实验室生物安全手册 1983年第一版，1993年第三版，1999年第四版美国生物危害主要防护：生物安全柜的选择、安装和

7、使用加拿大实验室生物安全指南 1990年第一版，1996年第二版，2004年第三版24二、实验室生物安全法律法规和标准我国有关生物安全的法律、法规中华人民共和国传染病防治法全国人大医学实验室质量和能力的专用要求实验室生物安全通用要求GB19489-2008生物安全实验室建筑技术规范GB50346-2004非典型性肺炎病例实验室检测标本采集技术指南（试行）4月2日传染性非典型性肺炎病毒研究实验室暂行管理办法传染性非典型性肺炎病毒的毒种保存、使用和感染动物模型的暂行管理办法WHO关于处理SARS标本的生物安全指南病原微生物实验室生物安全管理条例国务院 2004医疗废物管理条例25三、生物安全实验室

8、的管理组织机构管理体系文件生物安全手册实验室操作规程和技术规范体系运行记录生物安全管理制度26实验室生物安全管理成立组织机构，明确职责单位成立生物安全委员会管理层负责人对全体员工、实验室来访者的安全负责实验室安全负责人协助管理层负责安全工作。负责制定安全计划，相关程序并监督执行员工执行有关规定和程序并做相应记录 27编制生物安全手册、计划、程序、记录手册 阐明方针，描述体系的文件、计划 针对特定工作而规定专门措施、资源、活动顺序的文件程序 对完成活动的方法所作的规定记录 为已完成的活动提供客观证据的文件生物安全相关的程序生物危害程度评估员工与外来人员培训外来人员准入样品采集，运送，处理微生物学

9、操作规程有害材料操作规程实验设备去污染及维护菌毒种使用，保藏，运输，销毁生物、化学、物理危险品的确认、存放、处置、监控生物废弃物处理、处置实验室内务管理员工健康监护意外事故发生与紧急处理事件，事故，职业疾病的调查、记录、报告管理层应确保每年对工作场所做至少一次检查，保证各项工作状态正常有序管理层应对手册、计划、程序作每年一次评审和更新对各种已实施的活动要生成记录30有关生物安全防护法规、标准的学习生物安全防护基本知识医院感染控制基本知识职业接触的病原微生物种类、传播途径、危害性、预防方法各种防护用具的正确使用各种消毒剂、消毒器具和灭菌器具的正确使用危急或意外事故的紧急处理人员培训31送检标本的

10、前处理和检测病原微生物检验各种防护用具的使用各种灭菌器具的使用、维护各种消毒剂的正确使用废弃物处理生物安全操作规程32菌毒种及阳性标本管理消毒灭菌与废弃物处置意外暴露的处置 相关生物安全问题简介菌毒种及阳性标本管理34生物安全和重组DNA技术重组DNA技术涉及到组合不同来源的遗传信息，从而创造自然界以前可能从未存在过的遗传修饰生物体（genetically modified organisms, GMOs）重组DNA技术的安全利用重组DNA技术已经对生物学和医学产生巨大影响由于整个人类基因组的核酸序列已经被了解，成千上万种未知功能的基因将采用重组DNA技术来进行研究-极有可能会产生更大的影响生

11、物表达系统：质粒、大肠杆菌用于基因转移的病毒载体：腺病毒、慢病毒转基因动物、基因敲除动物转基因植物重组DNA技术的危险度评估是一个种动态发展的工作，必需考虑到科学的最新进展进行适当的危险度评估，以确保人类在未来得益于重组体DNA技术其他概念操作产生气溶胶的情况医疗废物的分类感染性废物药物性废物病理性废物化学性废物损伤性废物医疗废物分类分类特征常见物名称感染性废物携带病原微生物1、被患者体液血液等污染的2、感染科产生的一切垃圾3、病原体培养基、标本、菌种保存液4、废弃的血液、血清5、使用后的一次性医疗用品及医疗器械病理性废物诊疗过程中产生的人体废弃物、动物尸体1、手术中产生人体组织、器官2、动物

12、实验室产生的动物尸体3、病理切片后废弃的人体组织、病理蜡块损伤性废物（放置利器盒中）易刺伤、割伤人的医用锐器1、医用针头、缝合器2、医用锐器3、玻璃安剖等药物性废物过期、淘汰、变质或被污染的废弃的药品1、废弃的一般药品2、废弃的细胞毒性药物3、废弃的疫苗、血液制品化学性废物具有毒性、腐蚀性、易燃易爆的废弃的化学物品1、放射科产生的化学制剂2、废弃的化学消毒剂3、废弃的汞血压计、温度计坚持就地分类的原则黑色袋装生活垃圾黄色袋装医用垃圾锐器盒装放锐器 46意外暴露的处置预防：对所有器具严格消毒认真洗手使用防护设施避免直接接触体液安全处置废弃物安全处置锐利器具皮肤粘膜污染感染性液体（血液、尿液标本或

13、培养物）外溢到皮肤立即停止工作，脱掉手套用75%的酒精进行皮肤消毒再用大量水冲洗感染性液体溅入眼睛立即停止工作，脱掉手套迅速到缓冲区用洗眼器冲洗再用生理盐水冲洗（注意动作轻柔，勿损伤眼睛）两种情况都应做适当的预防治疗和医学观察，并报告实验室安全员进行事故记录意外暴露的处置洗眼器的使用方法取下洗眼器罩，受感染者的眼睛部位摆放到冲眼器花洒正上方将洗眼器开关打开，洗眼器花洒即有清水喷出刺伤、切割伤或擦伤应急处理保持镇静，立即停止实验，脱掉手套用清水和肥皂水清洗伤口尽量挤出伤口处的血液，取出急救箱，用碘酒或75%的酒精擦洗伤口，适当的包扎及时就医，告知医生受伤原因及可能的微生物污染，必要时要进行医学处

14、理向实验室安全员报告，进行事故记录离心机内带有感染性物质的离心管发生破裂离心机正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭电源，密闭30min使气溶胶沉降。离心机停止后发现破裂，应立即盖上盖子密闭30min戴结实的手套（如厚橡胶手套）及口罩（避免吸入气溶胶）使用镊子清理玻璃碎片，或用镊子夹着的棉花来清理破碎的离心管及离心桶、转轴和转子都应放在无腐蚀性的、对相关微生物具有杀灭作用的消毒剂内浸泡60min以上生物安全柜内溢出处理处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接面对前操作口，而应处于前视面板的后方选择消毒剂时需要考虑消毒剂对生物安全柜的腐蚀性如果溢洒的量不足1 ml时，可直接用消毒剂浸湿的纸巾（或其它材料）擦拭如溢洒量大或容器破碎，按操作程序消毒如果溢洒物流入生物安全柜内部，则视情况，如需要可对生物安全柜进行熏蒸生物安全柜内溢出处理撤离房间发生生物危险物质溢洒时，立即通知房间内的无关人员迅速离开，在撤离房间的过程中注意防护气溶胶关门并张贴“禁止进入”、“溢洒处理”的警告标识