β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响

1、1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响【关键词】结肠肿瘤;抗原,d29;细胞增殖;药物挑选试验,抗肿瘤【摘要】目的不雅察1整合素表达下调对人结肠癌ht-29细胞增殖和化疗敏感性的影响。要领接纳反义寡核苷酸(asdn)技能转染ht-29细胞，逆转录-聚合酶链反响(rt-pr)检测1整合素表达下调环境。tt法检测ht-29细胞相对存活率。赐与梯度浓度氟尿嘧啶(5-fu)，盘算i50。效果实行组1整合素条带吸光度积分(iad)值/-atin条带iad值的比值及ht-29细胞的存活率与比拟组比拟明显低落(f=1630.08,q=72.40,

2、p0.01;t=4.37,p0.05)。5-fu+asdn组ht-29细胞对5-fu的i50与5-fu组比力明显落落(t=37.71,p0.05)。结论1整合素表达下调可按捺结肠癌细胞增殖，加强结肠癌细胞对化疗药物敏感性。【关键词】结肠肿瘤;抗原,d29;细胞增殖;药物挑选试验,抗肿瘤abstratbjetivetinvestigatetheeffetfdn-regulatinfintegrin-1expressinnellprliferatinandhesensitivityfhuanlnanerelllineht-29.ethdsht-29ellseretransfetedithantis

3、enselignuletidetehnlgy,thedn-regulatinfintegrin-1rnaexpressinasdetetedbyrt-pr.therelativesurvivalratefht-29ellsasdeterinedbyttethd.gradientnentratinsf5-flururail(5-fu)eregiven,andi50alulated.resultsinparisniththentrlgrup,theexpressinfintegrin-1rnafht-29ellsintheexperientalgrupasarkedlydn-regulated(f

4、=1630.08,q=72.40,p0.01),andthesurvivalratefht-29ellsassignifiantlyredued(t=4.37,p0.05),andthei50rearkablydereased(t=37.71,p0.05).nlusindn-regulatinfintegrin-1aneffetivelyinhibitellprliferatinandenhanethesensitivityfhuanlnanerellthetherapeutis.keyrdslnineplass;antigens,d29;ellprliferatin;drugsreening

5、assays,antitur结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年增高。肝转移是影响结直肠癌预后的紧张因素，无法切除肝转移灶病人的中位保存期仅6.9个月1。如今，手术还是惟一有用的治愈本领，但仅有10%病人得当于手术切除。现有的化疗药物大多疗效欠佳，因此低落药物副作用、加强化疗敏感性已成为如今结肠癌治疗的研究热门。整合素重要介导细胞与细胞外基质(e)的黏附，是一类最紧张的细胞黏附分子。整合素还介导细胞间的黏附，到场细胞多种生理成效和病理变革。谭晓杰等2研究表现，1整合素反义寡核苷酸(asdn)通过低落1整合素表达，对人结肠癌ht-29细胞体外侵袭具有按捺作用。本实行接纳asdn技能使人结肠癌

6、ht-29细胞1整合素表达下调，不雅察1整合素表达下调对ht-29细胞增殖和对化疗药物敏感性的影响。1资料与要领1.1细胞造就人结肠癌细胞株ht-29购于武汉同济病院。将细胞接种于含体积分数0.10小牛血清的rpi1640造就液(gib公司)中，在37、95%湿度及体积分数0.052的造就箱中造就，每48h胰酶消化传代1次，实行所用细胞均处于对数生恒久。1.2asdn技能1整合素asdn序列为:5-t*g*agtaagatat*g*t-3，无义寡核苷酸(nsdn)序列为：5-g*aagagagaggt*g-3,*为硫代位点，由大连宝生物公司合成。实行分3组：实行组(以脂质体转染asdn)、ns

7、dn组(以脂质体转染nsdn)和比拟组(未转染)。在聚苯乙烯管中以无血清rpi1640造就液别离稀释asdn、nsdn和lipfetaine2000脂质体，asdn及nsdn浓度均为120g/l，lipfetaine2000脂质体终浓度为10g/l。别离将两管稀释液轻轻混匀以便形成寡核苷酸-脂质体复合物，于室温下安排40in。取对数生恒久的ht-29细胞，利用无血清的rpi1640造就液洗1次，然后迟钝参加寡核苷酸-脂质体复合物，置于37、95%湿度及体积分数0.052的造就箱中造就6h，弃去转染液，换含体积分数0.20胎牛血清的rpi1640造就液继承造就48h。1.3rt-pr检测1整合素

8、rna的表达接纳trizl总rna纯化试剂盒(北京百泰克生物技能)提取总rna，用逆转录酶和lig(dt)按371h，955in条件举行dna的合成。取1l逆转录产物举行pr扩增，反响条件为：95变性5in，9545s，5845s，7245s，32个循环，72延伸10in。反响体系以-atin作为内参照。1整合素上游引物：5-aa-tgaaggggtgttggtag-3;卑劣引物：5-t-gagtgtagttggggtt-3，扩增产物长290bp。-atin上游引物：5-gggatgatgata-t-3;卑劣引物：5-atgtatattgttgtg-3，扩增产物长546bp，上述引物均由大连宝

9、生物公司合成。1.4tt法检测细胞存活率单细胞悬液以每孔1104个细胞接种于96孔造就板中，每孔体积100l。造就24h后，以无血清rpi1640造就液洗1次，迟钝参加寡核苷酸和脂质体复合物，在37、95%湿度及体积分数0.052的造就箱中造就6h，弃去转染液，换含体积分数0.10小牛血清的rpi1640造就液继承造就。于转染后72h用tt法在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度(a)值，盘算细胞存活率。细胞存活率=实行孔a值/比拟孔a值100%。实行重复4次，取其均值。1.51整合素表达下调对化疗敏感性的影响ht-29细胞接种于96孔板，按处置惩罚要领分为氟尿嘧啶(5-fu)组和5-fu+asdn

10、组。转染24h后两组细胞均参加梯度浓度的5-fu(25、50、100、200g/l)，继承造就48h。以pris3软件盘算化疗药物的i50。1.6统计学阐发接纳spss11.5软件举行t查验和方差阐发。2效果2.1ht-29细胞1整合素rna的表达如图1所示，实行组1整合素条带吸光度积分(iad)值/-atin条带iad值的比值(0.2210.011)与比拟组(0.9540.025)比力，差异有统计学意义(f=1630.08，q=72.40，p0.01);而nsdn组(0.9010.022)与比拟组比力差异无统计学意义(p0.05)。2.21整合素表达下调对ht-29细胞存活率影响比拟组ht-

11、29细胞存活率为100%，nsdn组为(92.904.32)%，两组比力差异无明显性(p0.05);实行组ht-29细胞的存活率为(61.101.78)%，较以照组明显低落(t=4.37，p0.05)。2.31整合素表达下调对ht-29细胞化疗敏感性的影响5-fu+asdn组ht-29细胞对5-fu的i50为(31.450.79)g/l，低于5-fu组的(126.534.98)g/l，差异有明显性(t=37.71，p0.05)。a：arkerdl2000;b：比拟组;：nsdn组;d：实行组。图1人结肠癌ht-29细胞1整合素rna的表达3讨论整合素是由和两个亚基构成的异二聚体，亚基的胞浆区含

12、有asp-x-sev-x-sev序列，到场细胞骨架卵白的彼此作用和胞内信号传导。整合素将胞外的e分子与细胞内的骨架卵白毗连起来形成核心黏附物。核心黏附物是整合素表里双向信号传导的布局底子，很多信号卵白通过与核心黏附物团结，调治细胞凋亡、增殖、迁徙和黏附3。整合素与肿瘤细胞的凋亡及耐药具有严密干系。jhnstne等4以为，肿瘤细胞产生耐药的关键因素之一是肿瘤细胞凋亡机制缺陷。frnar等5研究效果表现，1整合素与e配体团结后，通过pkb/akt途径使survivin的表达上调，对肿瘤坏死因子-诱导的前线腺癌细胞凋亡具有按捺作用。atter等6研究表现，v3、51整合素与e中的相应配体(玻璃黏连卵

13、白、纤连卵白)团结后可激活fak和sh，通过黏着斑卵白激酶(kak)依靠的ras信号体系激活pi-3k/akt，从而进步bl-2的转录程度，使细胞的凋亡受到按捺。audjit等7研究表现，在da-b-231和da-b-435乳癌细胞中，1整合素与e配体团结，通过激活pi-3k/akt信号传导通路，按捺线粒体开释细胞色素，对抗紫杉醇和长春新碱等化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡。以上研究效果提示，调控整合素的表达大概诱导肿瘤细胞凋亡和逆转耐药的产生。asdn技能8是将与靶基因序列互补的小分子寡核苷酸导入细胞，通过激活核酶rnaseh等机制，促使rna落解，按捺转录历程，从而按捺编码卵白的表达。本实行接纳

14、asdn技能使人结肠癌ht-29细胞1整合素表达下调，其效果表现实行组ht-29细胞存活率明显低落(p0.05)，而nsdn对ht-29细胞生长无显着影响。提示下调1整合素表达具有按捺ht-29细胞增殖的作用。然而，肿瘤的产生生长是一个多基因变异累积的历程，单一下调某种靶基因不成能有用地按捺肿瘤希望。多项研究证实，asdn与化疗药物团结应用可产生更强的抗肿瘤效应9。本实行接纳asdn技能使人结肠癌ht-29细胞1整合素表达下调，参加梯度浓度的化疗药物5-fu，研究效果表现5-fu+asdn组的ht-29细胞对5-fu的i50显着低于5-fu组。1整合素表达下调，大概通过诱导凋亡按捺ht-29细

15、胞的生长，同时加强了ht-29细胞对化疗药5-fu的敏感性，其详细的机制有待进一步探究。本研究效果提示，1整合素表达下调能显着按捺ht-29细胞的增殖，团结应用化疗药物，可低落化疗药剂量，淘汰其副作用，并加强癌细胞对化疗的敏感性。【参考文献】1sadahirs,suzukit,ishikaak,etal.reurrenepatternsafterurativeresetinflretalanerinpatientsflledfrainiuftenyearsj.hepatgastrenterlgy,2022,50(53):1362-1366.2谭晓杰,张创立,高军.1整合素反义寡核苷酸对人结肠癌

16、细胞黏赞同侵袭按捺作用j.齐鲁医学杂志,2022,24(4):286-288.3yaadak,geigerb.leularinteratinsinelladhesinplexesj.urpinellbil,1997,9(1):76-85.4jhnstner,ruefliaa,les.apptsis:alinkbeteenanergenetisandhetherapyj.ell,2002,108:153-164.5frnar,plesiaj,hheangs,etal.fibrnetinprtetsprstateanerellsfrturnersisfatr-induedapptsisviatheakt/survivinpathayj.jbilhe,2022,278(50):50402-50411.6atterl,ruslahtie.asignalingpathayfrthealpha5beta1andalpha(v)beta3integrinsthatelevatesbl-2transriptinj.jbilhe,2001,276:27757-27763.7audjitf,egrinsignalinginhibitspalita