半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研

1、半夏泻心方及配伍药组含药血清按捺人胃癌BGC823细胞增殖的实行研王萍，李娟，刘喜平，李德兴，高波【关键词】半夏泻摘要：目的：研究半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BG823细胞增殖的影响。要领：接纳血清药理学要领和TT法及台盼兰染色法不雅察半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BG823细胞的敏感性及生长按捺作用。效果：辛劳组对人胃癌BG823细胞的生长按捺作用最强，明显高于辛开组、苦落组、辛甘组、苦甘组、甘补组P0.05。结论：半夏泻心方中对BG823细胞增殖起重要按捺作用的药组为辛开、苦落的配伍情势。辛开、苦落配伍后辛劳有明显的协同增效趋势，而其他配伍药群大概存在拮抗作用。提示辛开苦落法大概

2、是中医药防治胃癌的治那么治法之一。关键词：半夏泻心方；人胃癌BG823细胞；配伍；生长按捺半夏泻心方为传统经方，药少力专,配伍严谨，为治疗脾胃病的代表良方，其当代研究也表现出了多方面的消化体系作用机理1。比年来本方在胃癌的防治中已有必然的临床应用2-4，但至今尚未见到该方抗肿瘤的相干底子研究。为此，我们接纳血清药理学和分子生物学的要领及实行技能，精细结合半夏泻心方所反响病机的配伍干系，对半夏泻心方及其配伍含药血清对体外人胃癌BG823细胞的增殖举行了开端研究，以期进一步为研究半夏泻心方抗肿瘤的机制奠基基矗现陈诉如下。1实行质料1.1动物家兔20只，体重2.02.5kg,由兰州生物成品研究所实行

3、动物中央提供。1.2药物及试剂半夏泻心方药材由甘肃中医学院隶属病院提供，经甘肃中医学院中药断定教研室断定切合药典划定；含10%胎牛血清的RPI1640造就液；0.25%胰卵白酶消化液；5-氟脲嘧啶5-Flururaia，简称5-FU，临用时用RPI1640造就液稀释至所需浓度。2实行要领2.1药物制备根据原方比例5，按中医理论及配伍纪律分为7组：全方组半夏12g、干姜9g、黄芩9g、黄连3g、人参9g、大枣4枚、甘草9g、辛开组半夏12g、干姜9g、苦落组黄芩9g、黄连3g、辛劳组(半夏12g、干姜9g、黄芩9g、黄连3g)、甘补组人参9g、大枣4枚、甘草9g、苦甘组黄芩9g、黄连3g、人参9

4、g、大枣4枚、甘草9g、辛甘组半夏12g、干姜9g、人参9g、大枣4枚、甘草9g。将各组药物饮片浸泡30in，煎煮两次，每次30in，纱布粗滤去渣，全方药液浓缩为含生药2g/L，其他配伍煎液中生药量同原方，煎法雷同，煎后浓缩体积与全方煎液雷同，使各配伍组中生药浓度与全方中各相应生药浓度雷同。2.2含药血清的制备参照李振光等6文中的要领：每组选家兔2只，实行前禁食12h，灌胃给药，各药物组每只家兔灌服试验药物，比较组赐与雷同体积的生理盐水。给药剂量：每次26L/kg，相称于60kg成人日服用量的10倍；给药方法：一连灌胃3次，第1、2次隔断20h，第2、3次隔断4h；采血时间：第3次给药后2h无

5、菌条件下心脏采血。静置4h，3000r/in离心20in，分散血清药物血清，DS，同种条件下药物血清混匀，56条件下水浴30in灭活，-20冰箱保存备用。经造就实行没有微生物生长。2.3细胞的造就BG823细胞人胃癌细胞株，由兰州大学细胞室引进。将BG823细胞用含有青霉素、链霉素各100U/L、15%小牛血清的RPI1640造就液造就。在5%2、37造就箱中造就23d后举行传代造就。2.4TT法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BG823细胞的敏感性取对数生恒久的BG832细胞，细胞存活率达95%以上，先用0.25%胰卵白酶消化造就细胞，再用含10%胎牛血清的RPI1640造就液配成单个细胞

6、悬液，以每孔1104个细胞接种于96孔造就板中，每孔体积200L。在细胞液中参加终极浓度别离为5%、10%的全方、辛开、苦落、辛劳、甘补、辛甘、苦甘的兔血清，各浓度设三个平行孔，并设正常兔血清比较组及5-FU阳性比较组，平行做3板，将造就板放入2造就箱，在37、5%2及饱和湿度条件下别离造就24h、48h、72h，每孔参加TT溶液5g/L20L，37继承孵育4h后，停顿造就，警觉吸弃孔内造就上清液。每孔参加150L二甲基亚砜DS，振荡10in，使甲充实溶解，在490n波长下，用酶联免疫检测仪测定各孔光汲取值A，按以下公式求出细胞存活率。每个样品计数4次，按照3次实行效果求均匀值和尺度差(x-s

7、，n=3)。细胞存活率=试验组光汲取值A比较组光汲取值A100%x2.5台盼兰染色法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BG823细胞生长的影响取一瓶对数生恒久的细胞，细胞存活率达95%以上。用含有15%小牛血清的RPI1640造就液将细胞数调治为21053105/L，接种于96孔塑料造就板中。在细胞液中参加终极浓度别离为20%、50%的全方、辛开、苦落、辛劳、甘补、辛甘、苦甘的兔血清。各浓度设三个平行孔，并设正常血清比较组。置37、5%2造就箱造就24h、48h、72h。取出后，参加4%台盼兰染液，显微镜下计数存活细胞数。显色为蓝色的为死细胞，未显色的为活细胞，按以下公式求出细胞生长按捺率。每

8、个样品计数3次，按照3次实行效果求均匀值和尺度差(x-s，n=3)。细胞生长按捺率%=比较组活细胞数实行组活细胞数比较组活细胞数1002.6统计学要领各组数据均用x-s表现，用SPSS10.0统计软件举行统计阐发。接纳方差阐发(ANVA)举行明显性查验，多组间比力接纳q查验。3效果4讨论胃癌属中医痞证、反胃、噎嗝、胃脘痛、症瘕、积累等领域。如今中医学对胃癌的发病机制尚没有明白、同一的熟悉5-6。通过大样本的临床征候阐发，并参考相干临床资料，我们以为胃癌的中医根本病理机制为脾胃衰弱、寒热阻结、中焦起落失调。即其病机以正虚底子上兼以邪实寒湿痰浊和热毒为多见，总体出现本虚标实的特点。这是胃癌的中医病

9、机关键地点。阐发其缘故原由，大概重要在于饮食不节、寒温不适、恣食生冷、饥饱不匀引起脾胃成效失调,脾胃衰弱，运化失司，中焦起落失调，致寒湿痰浊停滞中焦，久郁不去，化生热毒。寒热庞杂，阻结中焦,反过来又加重了中焦起落成效的失调，渐而形成症瘕积累。半夏泻心方出自?伤寒论?，主治寒热庞杂之痞证,为辛开苦落的代表方剂。比年来本方在胃癌的防治中已有必然的临床应用，并获得较好的临床疗效2-4。本方突出辛开苦落，起落同调，以复中焦之起落。同时兼益气健脾，调治脾胃以扶正，具有寒热并用、温而不燥、寒而不遏之特点。因此，全方由辛开、苦落、甘补3组药组配伍组成，布局严谨，药少力专，非常符合胃癌的中医重要病机。如今TT

10、法常应用于体外肿瘤细胞的药敏实行，得到较好效果，本实行接纳TT实行和台盼兰染色实行不雅察皆表白辛劳、辛开、苦落组含药血清对BG823细胞较为敏感，对其增殖有显着的按捺作用，在48h最为显着，且有明显的剂量效应干系，但全方和甘补组无显着影响。因此，半夏泻心方中对BG823细胞增殖起重要按捺作用的药组为辛开、苦落的配伍情势。辛开、苦落配伍后辛劳有明显的协同增效趋势。而其他配伍药群辛甘、苦甘、全方均较辛劳、辛开、苦落的按捺率低，提示这些配伍情势大概存在拮抗作用。这印证了半夏泻心方作为辛开苦落代表方剂对胃癌细胞增殖按捺作用的科学配伍内在，提示辛开苦落法大概是中医药防治胃癌的治那么治法之一。这将为进一步研究半夏泻心方抗肿瘤的机制奠基基矗参考文献：1刘喜平，温志强半夏泻心方方证及机理研究述评J中国中医药信息杂志，2000，87：23-25.2杨瑞合半夏泻心汤调治消化道肿瘤三那么J陕西中医，1998，4：171-1