微生物检验第十三章病原性球菌及检验讲义

1、第十三章病原性球菌及检验葡萄球菌一一分类按色素及生化反应金黄色葡萄球菌：金黄色。表皮葡萄球菌：白色。腐生葡萄球菌：柠檬色。按血浆凝固酶凝固酶阳性葡萄球菌：金黄色葡萄球菌。凝固酶阴性葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。葡萄球菌一一生物学特性形态与结构形态：球形。大小： 0.5 ? 1.5 科 m （中等） 。排列：葡萄状。染色： G+。特殊结构：无鞭毛和芽胞，个别有荚膜。培养特性宫养要求：一 般。气体环境：需氧或兼性厌氧。温度环境： 35? 37 C; pH7.4 。菌落特征：普通琼脂平板 24? 48 小时培养，形成直径 2? 3mm圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐 不透明、色素、溶血环。

2、抗原蛋白抗原：完全抗原，有种属特异性。 结合在细胞壁的肽聚糖部分， 具有抗吞噬作用，称葡萄球菌 A蛋白。多糖抗原：半抗原，具有型特异性抵抗力：耐热，耐干燥，耐高盐，有三种： A 型多糖抗原； B 型多糖抗原； C 型多糖抗原。是抵抗力最强的无芽胞细菌。葡萄球菌一一微生物检验及鉴定标本采集：脓汁、渗出液、血液、尿液、粪便、痰液等。形态学检查：革兰阳性球菌呈葡萄串状排列。分离培养：血标本肉汤增菌 35 C 24h 后或脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物接种血琼脂平板。 35c 18 ? 24h,可见典型产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明溶血环。粪便、呕吐物接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼

3、脂平板 ，经 35 C 18 ? 24h 培养，可形成细小菌落， 48h 后形成典型菌落。生化试验（鉴定）触酶试验 血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验 新生霉素敏感试验金黄色葡萄球菌 + + + +表皮葡萄球国 + - +信生葡萄球菌 + - 一耐药性检测：苯陛西林耐药的葡萄球菌（ MRS ,耐甲氧西林的金葡菌（ MRSA ,耐甲氧西林的表葡菌（ MRSE ,耐 万古的金黄色葡萄球菌（VRSA , 耐万古的表皮葡萄球菌（ VRSE。葡萄球菌致病性及临床意义感染类型 疾病 致病因素侵袭性疾病（化脓性感染）皮肤软组织感染：如毛囊炎、疳、痈等全身性感染：如败血症、脓 毒血症、骨髓炎、心内膜炎、 脑膜炎等

4、血浆凝固酶、葡萄球 菌溶血素、杀白细胞 素医院内感染* 素性疾病食物中毒，急性胃肠炎烫伤样皮肤综合征中毒性休克综合征葡萄球菌性肠炎（假膜性肠. 炎）肠毒素、表皮溶解毒素、毒性休克综合征Wit金黄色葡萄球菌：引起疳、痈、外科伤口、创伤的局部化脓性感染，播散入血后可引起深部组织的化脓性感染；其产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃肠炎。表皮葡萄球菌：皮肤正常菌群，是导致血培养污染的常见细菌。 已成为医院感染的重要条件致病菌。腐生葡萄球菌：导致尿路感染的常见病原菌之一。链球菌 分类按血琼脂平板溶血现象：甲型（“）溶血性链球菌：草绿色链球菌，条件致病菌。乙型 （3） 溶血性链球菌：溶血性链球菌，致病

5、菌。丙型（ Y）链球菌：非致病菌。按细胞壁抗原（ C抗原）分类： A、日 C D? ? 共 18 个群，对人致病的 90%A 群。链球菌一一生物学特性形态与结构形态：球形。大小： 0.8 ? 1.0mi排列：链状。染色： G+。特殊结构：无鞭毛和芽胞，个别有荚膜。培养特性营养要求：较高。气体环境：需氧或兼性厌氧，温度环境： 35? 37 C; pH7.45% CO最好。? 7.6 。菌落特征：血清肉汤中，溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。不溶血菌株均匀浑浊生长。血琼脂平板上培养可形成灰白色、圆形、透明或半透明， 似针尖大小、凸起，菌落周围可出现 a - 溶血或 3 - 溶血，也可不出现溶血。抗

6、原性：细胞壁抗原（即 C抗原）。抵抗力：不强，对各种常用消毒剂敏感， 60c 加热 30min 即可杀灭。链球菌一一微生物检验及鉴定标本采集：脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。形态学检查：革兰染色阳性，圆形呈链状排列。分离培养：血标本：肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，然后接种于血平板，置需氧和厌氧环境中培养。脓汁和咽拭标本：接种血平板并涂片染色镜检，见形态酷似链球菌，并革兰阳性。上述的培养物经18? 24h 培养后，观察菌落特征和溶血情况。（甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生“CAM就D+B生化试验（鉴定）触酶试 杆菌肽敏感试筵A 群链球菌 - +群链球菌 -群链球菌 -肺炎链球菌 -甲型

7、（ a） 溶血 -性链 球菌其他试验：直接检测抗原。胆汁七叶昔试我奥普托欣 胆汁试验 溶菌可生长敏感-病原菌A 群链球菌一一致病性及临床意义A 群、 B 群及肺炎链球菌是链球菌属的 3 种重要致病菌。急性化脓性感染感染类型疾病丹毒、痈、蜂窝组织炎咽炎、鼻窦炎、中耳炎脑膜炎、产褥热猩红热35 C- 溶血）马尿酸盐水解 试验+1. 致病因素侵袭性：透明质酸酶链激酶链道酶丑态反应性疾病 风湿热和肾小球肾炎M蛋白其他感染亚急性心内膜炎新生儿肺炎、脑膜炎和败血症呼吸道和泌尿道感染草绿色链球菌（条件致病）B 群链球菌D 群链球菌链球菌溶血素致热外毒素肺炎链球菌一一生物学特性形态与结构形态：革兰阳性球菌。大

8、小： 0.5 ? 1.25W 值排列：矛尖状，钝面成双排列，有时呈短链状。染色： G+。特殊结构：有荚膜，无鞭毛，无芽胞。培养特性营养要求：较高。气体环境：需氧或兼性厌氧。温度环境： 35? 37 C; pH7.6 ? 8.0 。菌落特征：在肉汤及琼脂培养基上生长不良，在含 3%- 5%fe 或羊血清肉汤中生长良好。在血琼脂平板上可形成灰色扁平、中心凹陷直径为 0.5 ? 1.0mm的菌落（脐窝状），周围有草绿色溶血圈。 在液体培养基中培养 24h, 呈均匀混浊，培养时间过长，可因自溶，培养液变澄清，管底沉淀。抗原性：荚膜多糖抗原。抵抗力：较弱。肺炎链球菌一一微生物检验及鉴定标本采集形态学检查

9、：革兰阳性矛尖状双球菌。分离培养：血液、脑脊液经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置生化试验（鉴定）肺炎链球菌甲型 （a ） 溶血性链球菌 草绿色链球菌，触酶试验-=5% 10% C0 环境中，经 35c 18 ? 24h 培养后观察菌落。动物试 荚膜肿胀试 1 奥普托欣试 胆汁溶 菊糖发酵试验 验 迎 ，解 嬖敏感 + 敏感 + +耐药 - -肺炎链球菌一一致病性及临床意义致病物质：荚膜、溶血素。所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎。可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血肠球菌 - 分类粪肠球菌屎肠球菌肠球菌一一生物学特性形态与结

10、构形态：卵圆形。排列：成双或短链状。染色： G+。特殊结构：无芽胞，无荚膜，部分有稀疏鞭毛。肠球菌一一生物学特性培养特性营养要求：高。气体环境：需氧或兼性厌氧。温度环境： 10? 45C。菌落特征：血平板上主要表现为丫和“溶血 （粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现 3 溶血环）。能在高盐（ 6.5%NaCl） 、高碱（ pH9.6） 、 40%旦汁培养基上生长。肠球菌一一微生物检验及鉴定标本采集：尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液。形态学检查：革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜。分离培养：血平板：丫和 a 溶血（粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现 3 溶血环）。高盐

11、（ 6.5%NaCl） 、高碱（ pH9.6） 、 40%旦汁培养基上可生长。生化试验（鉴定）触酶阴性。胆汁七叶昔中可以生长。多数肠球菌能水解毗咯烷酮 -8 - 蔡基酰胺（ PYR。耐药试验：3- 内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨茉西林）、万古霉素和氨基糖昔类（如庆大霉素）的敏感性。肠球菌一一致病性及临床意义肠球菌是肠道正常菌群（条件致病菌）。肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，其所致感染中最常见的为尿路感染 , 其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。可引起老年人及有严重基础病患者败血症。可引起腹腔感染、胆管炎及心内膜炎，脑膜炎少见。临床上分离率最高的是粪肠球菌

12、，其次是屎肠球菌。奈瑟菌属一一分类主要有 9 个种。其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。形态与结构形态：肾形。大小：直径 0.6 ? 1.5mt排列：成对排列（双球菌），坦面相对。染色： G。特殊结构：无鞭毛，无芽胞，有菌毛，新分离的菌株有荚膜。培养特性营养要求：高，属苛养菌。气体环境：专性需氧。温度环境： 35? 37 C, pH7.4 ? 7.6 。菌落特征：常用血琼脂平板、巧克力琼脂或 EPV京脂，初次分离需置 5%- 10%C0环境中， 35c 培养 18? 24h 后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径 1? 2mm勺小菌落（露珠状） 。抗原:分型：根据群特异性荚膜多糖

13、抗原不同，将本菌分为 A、 B、 C 口 X、 Y、 Z、 1916、 29E 和 W135等。目前，对人致病的主要是 A 群 , 偶见 B 群、 C 群及 1916 群引起散发病例。脑膜炎奈瑟菌一一微生物检验及鉴定标本采集：血液、脑脊液、鼻咽分泌物等。 因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。形态学检查：脑脊液中性粒细胞内 革兰阴性双球菌 , 呈肾形成对排列；有菌毛，有荚膜。分离培养：标本葡萄糖肉汤增菌，型菌落。生化试验（鉴定）M类发酵试验接种血琼脂平板、巧克力琼脂或 EPV琼脂，置 5%- 10%C0环境中， 35c 培养 18? 24h 后可见典口引喋（靛基质）试

14、验硫化氢试 尿素分解 试 触酶试验 验 验氧化酶试验硝酸盐还原 试验- - - + + -分解葡萄糖和麦芽糖，产酸产气其他实验：荚膜多糖抗原直接凝集试验阳性。脑膜炎奈瑟菌一一致病性及临床意义脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。 存在于携带者或病人的鼻咽部，经空气传播，冬末春初为流行高峰。致病物质：1 . 荚膜：抵抗吞噬作用，增强侵袭力。2 . 菌毛：介导细菌黏附在易感细胞表面。3. 内毒素：主要致病物质。淋病奈瑟菌生物学特性形态与结构形态：球形或肾形。大小：直径 0.6 ? 0.8mt排列：成对排列，形似咖啡豆。染色： G。特殊结构：新分离的菌株有荚膜和菌毛

15、 ，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。无芽胞和鞭 毛。培养特性营养要求：高。气体环境：专性需氧。温度环境： 35? 37 C, pH7.5 。菌落特征：常用血液琼脂、巧克力琼脂、 EPV琼脂等培养基。 初次分离时 , 需置 5%- 10%0 族件下才能生长发育。经 24? 48h 培养后，可见表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径 0.5 ? 1.0mm的圆形菌落，无色素易乳化。抗原 :抵抗力：对冷、热、干燥和消毒剂抵抗力很低。淋病奈瑟菌微生物检验及鉴定标本采集：脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，眼结膜分泌物，血液。 不宜置冰箱，应立即送检。形态学检查： 脓汁标本中性粒细胞内，慢性淋病

16、时细胞外，革兰阴性双球菌。分离培养：采样后立即接种于预温的选择性培养基和非选择性培养基中，古霉素和多黏菌素等）的营养培养基上，置于含 5%- 10%勺二氧化碳环境中，乳化菌进一步鉴定。淋病奈瑟菌微生物检验及鉴定 生化试验（鉴定）如巧克力平板、含有两种以上抗生素 （万35c 培养 48h, 取小而透明似 水滴状、无色素易糖类发酵试验“分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦芽糖触酶试验+氧化酶试验+其他实验：荧光抗体染色法、协同凝集试验；核酸探针杂交法。淋病奈瑟菌致病性及临床意义常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病，盆腔炎，淋菌性结膜炎

17、。 人类是其唯一的天然宿主和传染源。卡他布兰汉菌一一生物学特性形态与结构形态：球形。大小：直径 0.6 ? 1.0mt排列：成对排列，类似脑膜炎奈瑟菌。染色： G。触酶试验+DNAB试验+特殊结构：无芽胞和鞭毛。培养特性宫养要求：不图。气体环境：需氧。温度环境： 18? 20C。菌落特征：普通培养基，菌落光滑，直径约 1? 3mm不透明，灰白色，菌落易从培养基上刮下。卡他布兰汉菌一一微生物检验及鉴定 生化试验（鉴定）氧化酶试验+卡他布兰汉菌一一致病性及临床意义健康人群的上呼吸道正常菌群。可导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎的病原体。革 兰形态排列染色特殊 结 气体构 环境温度硝酸盐还原试验+营

18、 养/ 口加小 菌落触酶 抵试验 抗，萄球1 G 求菌，球菌+ G+ G- C G, 他 布C一G“汉菌球形葡萄状球形 链状卵圆形成双或短链肾形 成对球形 成对力个别 后兼性荚 膜厌氧35? 一 血琼脂，高盐 甘 圆形凸起光滑湿润不 透37 c 般 露醇琼脂 明、色素溶血环+最强个别 后荚 膜部分 有鞭 毛后夹 膜菌 毛无兼性厌氧35?37 C较 血琼脂 小圆形灰白色半透明 - 较高 凸起， a 或 3 或小溶血 弱10?兼性厌氧高 血琼脂45 C圆形光滑灰白色， - -溶血+ 弱+不35?37 C18?20 c专性口专性口血琼脂、巧克 力高 圆形光滑凸起半透明琼脂血琼脂 光滑，不透明，灰白色

19、高金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌触酶试验+血浆凝固酶试验+-甘露醇发酵试验+新生霉素 敏感试验+-触酶验A 群链球菌 -B 群链球菌 -D 群链球菌 -而炎链球菌a - 溶血性 舞-球菌试 杆菌肽敏 感试验+CAM就验胆汁七叶 昔 奥普托欣 胆汁 溶 动物 试 荚膜肿胀试验 试验 菌 验 试验菊糖发酵试验+可生长敏感 + + +耐药 - -病膜炎余瑟 * 国淋病余瑟前, 他布兰汉 菌M类发酵试验“解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气“分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦 芽糖触酶试验氧化酶试验DNA? 试硝酸盐还原试 验验+ -+ -+ + + +由疳、痈病变继发的败血症，其细菌多为A. 大肠埃希

20、国B. 脑膜炎奈瑟菌C. 金黄色葡萄球菌D. 流感嗜血杆菌E. 腐生葡萄球菌 正确答案 C答案解析由疳、痈病变继发的败血症，其细菌多为金黄色葡萄球菌。正常人体内及体表多处有葡萄球菌存在而不引起人的疾病，其中最主要的带菌部位是A. 咽喉B. 皮肤C. 鼻腔D. 肠道E. 泌尿道正确答案 B答案解析正常人体内及体表多处有葡萄球菌存在而不引起人的疾病，其中最主要的带菌部位是皮 肤。血培养分离出何种细菌时，需考虑排除采集标本时皮肤细菌污染的可能A. 结核分枝杆菌B. 肺炎链球菌C. 表皮葡萄球菌D. 流感嗜血杆菌E. 大肠埃希菌正确答案 C答案解析五个选项中只有表皮葡萄球菌是皮肤的正常菌群。下列关于金

21、黄色葡萄球菌的描述正确的是A. 革兰染色阴性B. 能产生凝固酶C. 不发酵甘露醇D. 培养需要特殊培养基E. 血液为主要带菌部位 正确答案 B答案解析金黄色葡萄球菌革兰染色阳性，血浆凝固酶阳性，发酵甘露醇，营养要求不高。正常情 况下血液中不带菌。常引起医院交叉感染的细菌是A. 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌B. 伤寒沙门菌C. 痢疾志贺菌D. 霍乱弧菌E. 耶尔森菌正确答案 A答案解析常引起医院交叉感染的细菌是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌。要从粪便或呕吐物标本中分离金黄色葡萄球菌，首选的培养基是A.EMB培养基B. 巧克力琼脂培养基C.M-H 培养基D.SS 培养基E. 高盐甘露醇培养基正确答案 E

22、答案解析要从粪便或呕吐物标本中分离金黄色葡萄球菌，首选的培养基是高盐甘露醇培养基。引起猩红热的主要病原菌为A.A 群链球菌B. 无乳链球菌C.C 群链球菌D.D 群链球菌E. 肺炎链球菌正确答案 A答案解析引起猩红热的主要病原菌为 A 群链球菌。A 群链球菌的主要鉴定试验是A. 马尿酸钠水解试验B.CAMPt 验C.奥普托欣试验D. 杆菌肽敏感试验 E.6.5%NaCl 生长试验正确答案 D答案解析 A 群链球菌的主要鉴定试验是杆菌肽敏感试验， A 群链球菌的杆菌肽敏感试验为阳性。可用荚膜肿胀试验分型的细菌为A.A 群链球菌B.B 群链球菌C.D 群链球菌D. 肺炎链球菌E. 草绿色链球菌正确

23、答案 D答案解析可用荚膜肿胀试验分型的细菌为肺炎链球菌。人类链球菌感染中 90%为A.A 群链球菌B.B 群链球菌C.D 群链球菌D. 草绿色链球菌E. 肺炎链球菌正确答案 A答案解析人类链球菌感染中 90%； A 群链球菌 。链球菌分类的根据是A. 在血液琼脂培养基中溶血的情况B. 产生色素的颜色C. 细菌的致病作用D. 鞭毛抗原的特异性E. 对营养的要求正确答案 A答案解析链球菌分类的根据是在血液琼脂培养基中溶血的情况或链球菌的细胞壁抗原。能在高盐 (6.5% NaCl ) , 40% 旦汁培养基上生长的细菌是A. 大肠埃希菌B. 草绿色链球菌C.B 群链球菌D. 肠球菌E. 表皮葡萄球菌

24、正确答案 D答案解析能在高盐 (6.5% NaCl ) , 40% 旦汁培养基上生长的细菌是肠球菌。属于革兰阴性双球菌的是A. 金黄色葡萄球菌B. 表皮葡萄球菌C. 溶血葡萄球菌D. 肺炎链球菌E. 淋病奈瑟菌正确答案 E答案解析金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌和肺炎链球菌都属于革兰阳性球菌。与脑膜炎奈瑟菌无关的是A. 革兰阴性肾形双球菌B. 营养要求很高C. 初次分离需 5%- 10%=氧化碳D. 在普通琼脂上生长良好E. 引起流行性脑脊髓膜炎的主要病原菌正确答案 D答案解析脑膜炎奈瑟菌营养要求很高，在普通琼脂上不能生长。关于脑膜炎奈瑟菌，叙述不正确的是A. 镜下呈肾形或豆形成双排

25、列、坦面相对的革兰阴性球菌，具有荚膜B. 本菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌C. 本菌经空气传播，定植于人的脑皮质部位D. 人类是脑膜炎奈瑟菌的唯一宿主E. 本菌对外界环境的抵抗力弱，易自溶正确答案 C答案解析脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬未春初为流行高峰。鉴别脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌的相关试验是A.蔗糖发酵试验B. 乳糖发酵试验C. 麦芽糖分解试验D. 触酶试验E. 菊糖分解试验正确答案 C答案解析脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气。淋病奈瑟菌仅分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦芽糖。下列叙述正确的是A. 人类是淋病奈瑟菌唯一宿主B. 人类不是淋病奈瑟菌唯一宿主C. 鼠是淋病奈瑟菌的天然宿主D.淋病奈瑟菌革兰染色阳性E. 淋病奈瑟菌抵抗力强 正确答案 A答案解析淋病奈瑟菌革兰染色阴性，抵抗力极低。人类是淋病奈瑟菌唯一宿主。可鉴别奈瑟菌与卡他布兰汉菌的相关试验是A. 蔗糖发酵试验B. 乳糖发酵试验C. 麦芽糖分解试验D. 触酶试验E. 硝酸盐还原试验正确答案 E答案解析奈瑟菌的硝酸盐还原试验为阴性，卡他布兰汉菌的硝酸盐