药物分析六杂质

1、第三章药物的杂质检查15-7月-221药物分析六杂质第三章 药物的杂质检查第一节 概述（杂质和杂质的限量检查）第二节 一般杂质的检查方法第三节 特殊杂质检查方法药物分析六杂质3、甚至对人体健康有害的物质。1、药物中存在的无治疗作用2、影响药物的疗效和稳定性杂质药物分析六杂质影响药物质量反应药物生产过程中存在的问题杂质杂质检查鉴别真伪纯度药物分析六杂质杂质检查的目的：保证用药的安全有效；为生产、流通过程的质量保证和企业管理提供依据。药物研究设计、开发实施工厂 企管药品原料药典检验药品剂型药典检验药品使用安全、有效药物分析六杂质第一节. 概述 杂质和杂质的限量检查一、药物纯度的概念与要求二、药物中

2、杂质的来源与种类三、杂质的限量6药物分析六杂质一、药物纯度的概念与要求概念杂质来源杂质危害检查杂质要求与纯度控制药物杂质（或纯度）与新药研究纯度控制药物分析六杂质1、纯度（Purity）：药物纯净的程度。 它是判定药品质量优劣的一个重要指标。对药物纯度的要求是随着生产工艺的改进、变化以及分离分析技术的发展而不断提高、完善的。 一、药物的纯度要求8药物分析六杂质2、杂质来源 生产 贮藏过程中引入 过程中引入使用试剂、原料 光、热分解中间体、副产物例: (1)aspirin中salicylic acid (2)生产中的 HCl, H2SO4 胃刺激变色 氯化物 硫酸盐 无毒,但使药物含量降低 肠溶

3、片药物分析六杂质3、杂质危害没有治疗作用影响药物的疗效、稳定性对人体健康有害检查杂质、控制纯度必要性 确保用药安全、有效，保证药品质量药物分析六杂质对于规定中的各种杂质检查项目，系指该药品在按既定工艺进行生产和正常贮藏过程中可能含有或产生并需要控制的杂质（如残留溶剂、有关物质等）；改变生产工艺时需另考虑增、修订有关项目。中国药典凡例药品质量标准中的杂质不包括变更生产工艺或变更原辅料而产生的新的杂质，也不包括参入或污染的外来物质。4、杂质检查要求与纯度控制11药物分析六杂质药物性状理化常数含量测定等主要指标杂质杂质检查项目名称检查方法杂质允许限量其它指标纯度评价收载在“检查”项下“氯化物”“砷盐

4、”“有关物质”综合整体评价药物纯度12药物分析六杂质 药物纯度、稳定性 新药质量研究的重要组成部分可能引入杂质？ 影响药物变质的因素？分离，结构？ 变质的过程？毒性？ 分解的产物？控制的方法？ 选择适合的贮藏条件5、药物杂质（或纯度）与新药研究分析技术的发展13药物分析六杂质杂质制剂安全性有效性药理学、微生物学、免疫学、生物化学等质量标准中检查项药物分析药剂学杂质检查和质量标准的关系不能用试剂代替药品14药物分析六杂质药物的纯度与化学试剂的纯度 药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。 化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯

5、、光谱纯。药物分析六杂质二、药物中杂质的来源和种类杂质的主要来源 (一)生产过程中引入 原料药生产（合成：未反应完的原料、反应的中间体、副产物、残留溶剂；提取：药物结构、性质相近的物质、残留溶剂） 制剂生产*注意：生产设备也可能引入杂质例:1. 残留溶媒 2.生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质金属杂质 3. 盐酸普鲁卡因注射剂水解、高温灭菌对氨基苯甲酸;二乙氨基乙醇(二)贮藏过程药物分析六杂质二、药物中杂质的来源和分类杂质的主要来源 (一)生产过程中引入易发生水解的结构：环酰胺、苷类、酯、内酯、酰胺易发生氧化的结构：醛基、长链共轭双键、酚羟基、 巯基、亚硝基(二)

6、贮藏过程(外界条件，微生物)温度 湿度日光 空气水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉有关物质药物分析六杂质1）按杂质来源：一般杂质和特殊杂质。 一般杂质：自然界分布广泛、在多种药物的生产和储藏过程中容易引入的杂质。 特殊杂质：指在特定药物的生产和贮藏 过程中容易引入的杂质。2）按杂质理化性质：无机杂质，有机杂质和残留溶剂。3）按杂质毒性：信号杂质和毒性杂质。 （三）杂质的种类18药物分析六杂质杂质分类 一般杂质：自然界分布较广泛，容易引入酸、碱、水分、来源 氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属检查方法中国药典附录 特殊杂质：个别药物的生产和贮藏过程中引入检查方法收藏在该药 质量标准中

7、无机杂质：氯化物、硫酸盐、硫化物、氰化物、重金属性质 残留溶剂 有机杂质：有机药物中引入原料、中间体、副产物、分解产物 异构体 信号杂质：一般无害，含量多少药物纯度水平，氯化物、硫酸盐毒性 毒性杂质：重金属、砷盐、氰化物应严格控制，保证用药安全药物分析六杂质说明：1.药典未规定的杂质：一般不需要检查。2.遇特殊情况：需要进一步追踪、检查。如：改变了原料、生产方法。3.新药研究：要对纯度、稳定性进行考察。药物分析六杂质药典中药物杂质检查项目的前提：GMP按既定工艺生产按正常条件贮藏药典中药物杂质检查项目未列入的杂质含量极少临床限量允许较宽从生产实践到检验方法，认识不够时代发展药物分析六杂质三、杂

8、质的限量*1杂质限量的概念 在不影响药物疗效和不发生毒性的前提下，药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。通常用百分之几（）或百万分之几（ppm）来表示。 药物中杂质的检查，一般也不要求测定其含量，而只检查杂质的量是否超出限量杂质限量检查（Limit Test)22药物分析六杂质杂质量 杂质限量 杂质量药品合格药品不合格药物分析六杂质2.杂质限量制定砷：不超过百万分之一重金属：不超过百万分之五十依据：杂质自身的性质生产能达到的水平参照各国药典惯例3.杂质限量的检查1）与杂质对照品溶液进行对比2）以检测条件下正反应的灵敏度控制15-7月-2224药物分析六杂质3.杂质限量的检查1）与杂质对照品

9、溶液进行对比一定量被检杂质的对照品溶液一定量供试品溶液相同条件：平行原则试剂相同、反应温度相同、放置时间等相同颜色浑浊色斑比色比浊比较色斑特点：不需知道杂质的准确含量15-7月-2225药物分析六杂质2）以检测条件下正反应的灵敏度控制 在供试品溶液中加入试剂，在一定条件下反应，观察有无正反应出现，以不出现正反应为合格，即以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量。例：纯化水中检查氯化物，是在50ml水中加入硝酸与硝酸银试液，不得发生浑浊。由于50ml水中含有0.2mg的CL-时，所显浑浊已比较明显，所以此检查限制了纯化水中氯化物的含量小于0.2mg/50ml=0.004mg/ml，4ug/ml。

10、药物分析六杂质 4杂质限量的计算15-7月-2227药物分析六杂质示例：例1.茶苯海明中的氯化物的检查取本品0.30g置200ml量瓶中，加水50ml时、氨试液3ml和10%硝酸溶液6ml时，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀， 放置15min，滤过，取续滤液25ml置纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀释成50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶液（10gCL/ml）1.5ml制成的对照液比较，求氯化物的限量。28药物分析六杂质例1.茶苯海明中的氯化物的检查已知：S = 0.3g25/200；C =

11、10g/ml；V = 1.5ml求： L = ？ 解： *注意:单位要统一29药物分析六杂质例2谷氨酸钠中重金属的检查取本品1.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，依法检查，与标准铅溶液（10gPb/ml）所显颜色相比较，不得更深重金属限量为百万分之十，求取标准铅溶液多少毫升？15-7月-2230药物分析六杂质例2谷氨酸钠中重金属的检查已知：S=1.0g；C=10g/ml；L= 1010-6求： V = ？解： 31药物分析六杂质第二节 一般杂质的检查方法氯化物检查法硫酸盐检查法铁盐检查法重金属检查法砷盐检查法溶液颜色检查法一般杂质广泛存在于药物中，中国药典把检查方法

12、收载于附录中易炭化物检查法溶液澄清度检查法炽灼残渣检查法干燥失重测定法水分测定法残留溶剂测定法15-7月-2232药物分析六杂质一般杂质检查规则 药品检验操作标准规定：1. 遵循平行操作原则（1）仪器的配对性 如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作药物分析六杂质 2. 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过2%，1g不超过1% 3. 正确的比色、比浊方法 4. 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份 药物分析六杂质 原理中国药典检查 方法实验条件注意事项Cl-（样品）+AgNO3 HNO3 Ag

13、Cl（白色浑浊液）与标准氯化钠溶液（一定量），相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，判断供试品中的氯化物是否超过了限量见讲义标准氯化钠溶液10g Cl-/ml 5ml8ml50 g 80 g Cl-/50ml 此范围氯化物所显浊度明显HNO3供试品溶液不澄清过滤带颜色：内消色法；化学方法排除有机氯破坏 Cl-一、氯化物(Chloride)的检查法药物分析六杂质一、氯化物的检查法1原理* 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，产生氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，判断供试品中的氯化物是否超过了限量15-7月-2236药物分析六杂质2.方法：Ch.P药典附录

14、除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照浴液。药物分析六杂质于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得药物分析六杂质3条件控制* ： (1)标准液：NaCl标准液（每1ml相当于10g的CL）(2)所加试剂试液的作用

15、和目的：稀硝酸酸性溶液50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜氯化物检查避免弱酸银盐（碳酸银，磷酸银），及氧化银沉淀形成而干扰加速氯化银沉淀的生成并形成较好的乳浊15-7月-2239药物分析六杂质(3)操作：观察前避光（暗处放置5 min）避免光线使单质银析出(4)观察方法：氯化银沉淀为白色，黑色背景，从比色管上向下 (5)供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀(6)取样原则：便于观察或测量结果(50g80g) /50ml CL- ，即标准液5 8ml，浑浊梯度明显。）根据这个量选择供试品的量。 氯化物检查药物分析六杂质4供试品处理*目的：排除干扰方法：（1）供试品液

16、混浊：过滤，用含硝酸的水洗滤纸，以保证氯化物的完全转移。（2）供试品有色：氯化物检查根据药物的化学性质，设计适当的排除干扰的方法。两份供试品溶液：1.加过量硝酸银洗涤沉淀无氯化物的有色溶液加入标准氯化钠对照品。2.按规定方法检查。41药物分析六杂质4供试品处理*目的：排除干扰方法：（3）有机药物中氯化物的检查溶于水的有机药物 不溶于水的有机药物氯化物检查（4）有机氯杂质：先破坏，再检查 （注意与有机药物中的氯化物区别）直接检查加水振摇氯化物溶解滤除不溶物加热溶解供试品冷沉淀过滤取滤液药物在稀乙醇或丙酮 中溶解检查15-7月-2242药物分析六杂质二、硫酸盐检查法 原理 中国药典检查方法实验条件

17、注意事项SO42- + BaCl2 HCl BaSO4（白色浑浊） 标准K2SO4溶液见讲义标准K2SO4溶液 1ml 0.1mg SO42-, 50ml中含0.1mg0.5mg SO42-,标准K2SO4溶液 1ml5ml, 此范围内浊度梯度明显HCl酸性同氯化物检查法药物分析六杂质1.原理*硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，产生硫酸钡白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液相同条件下生成的浑浊比较，判断供试品中的硫酸盐是否超过了限量2.方法：讲义或Ch.P硫酸盐15-7月-2244药物分析六杂质3.条件控制： 标准硫酸钾溶液（每1ml相当于0.1mg的SO42-），每50ml溶液中含0.1

18、mg 0.5mg 的SO42-）浑浊明显，相当于1.0ml 5.0ml的标准溶液。 酸度（pH1）、稀盐酸防止碳酸钡或磷酸钡沉淀的产生硫酸盐加入氯化钡试液后，应立即充分摇匀防止局部过浓，影响产生浑浊的程度45药物分析六杂质4供试品处理目的：排除干扰方法：与氯化物类似供试品如果需要过滤，用加入盐酸的酸性水洗涤滤纸上的硫酸盐药物分析六杂质三、铁盐检查法 原理 中国药典检查法实验条件Fe3+6SCN- H+ Fe(SCN)63- 红色FeNH4(SO4)212H2O 标准铁溶液（硫酸铁铵） 10g/ml见讲义50ml含5 g90 g A C 线性50ml含10g50 gFe3+ 标准铁溶液15ml

19、易于辨别HCl酸性药物分析六杂质铁盐检查法1原理（一）硫氰酸盐法*铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液同法处理后所呈颜色比较，判断供试品铁盐是否超限15-7月-2248药物分析六杂质 2.方法：讲义或Ch.P，药典附录 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸

20、4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。 药物分析六杂质3.条件控制： 标准铁溶液：硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O 标准铁溶液（每1ml相当于10ug的Fe3+ ），每50ml溶液中含5ug 90ug 的Fe3+ 时，溶液的吸收度与浓度呈良好线形关系。 目视比色，以50ml溶液中含10ug 50ug 的Fe3+ 浑浊明显，易于区别。15-7月-2250药物分析六杂质3.条件控制： 标准铁溶液：硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O供试品反应加入试液作用：增加生成配位离子稳定性 +硫酸，防止铁盐水解盐酸

21、防止Fe3+水解50ml中加入稀盐酸4ml过硫酸铵（氧化剂）氧化 Fe2+成 Fe3+防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解过量硫氰酸铵提高反应灵敏度 消除氯化物等的干扰51药物分析六杂质4供试品处理方法：（1）色调不一致或颜色较浅 加正丁醇或异戊醇提取分别取醇层比色。硫氰酸铁配位离子在正丁醇等中的溶解度大增加酸度；增加硫氰酸铵的量；用正丁醇提取后比色（2）其它能与Fe3+或SCN-反应的酸根阴离子，CL-、枸橼酸根（3）某些有机药物实验条件下不溶解炽灼残渣依法检查。15-7月-2252药物分析六杂质（二）巯基醋酸法*方法灵敏度高，试剂较贵试剂巯基醋酸还原 Fe3+ Fe2+，在氨碱性溶液中进一步与

22、 Fe2+ 作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以限制铁的量。15-7月-2253药物分析六杂质四、重金属(Heavy metals)检查法 原理 实验条件重金属指在实验条件下能与S2-(硫代乙酰胺或硫化钠)作用显色的金属杂质，如Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Sn、Sb、Bi等，其中Pb生产中遇到机会多，易在人体内蓄积中毒。检查时以铅Pb作为代表。标准铅溶液：硝酸铅注意：配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅 显色剂： H2S试液（1990版药典前） 硫代乙酰胺试液（1990版药典后） 硫化钠试液（JP）药物分析六杂质重金属检查法第一法硫代乙酰胺法 适用于实验条件

23、下，供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。CH3CSNH2 + H2O CH3CONH2 + H2S 适宜目视比色范围 H2S + Pb2+ pH3.5(醋酸盐缓冲液) PbS + 2H+ 10g20g Pb/27ml 黄色棕黑色硫化物均匀混悬液 标准铅10 g Pb/1ml第二法用于在水中难溶或能与重金属离子形成配位化合物而影响检查的有机药物将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查第三法适于磺胺类、巴比妥类等难溶于稀酸，但溶于碱水溶液的药物。取规定量的供试品，加NaOH试液5ml，水20ml，溶解后，加硫化钠试液5滴，再与一定量标准铅溶液经同样处理比色。

24、第四法微孔滤膜法适用于含 2 5 g 重金属杂质检查。 限量低时，硫化物颜色太浅，需富集。药物分析六杂质第一法、硫代乙酰胺法 2.原理和方法 对照法1.适用范围在实验条件下，供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。即溶于水、稀酸和乙醇的药物。重金属检查 56药物分析六杂质方法：讲义或Ch.P，药典附录 除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5) 2ml后，加水或各药品项下规定的溶剂稀释使成25m1，乙管加入按各药品项下规定方法制成的供试液25m1；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min，同置白纸上，自

25、上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。药物分析六杂质（1）标准硝酸铅溶液（每1ml相当于10ug的Pb2+） 用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），临用前加水稀释而成。 适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+，相当于加入标准铅溶液12ml。 3. 条件控制药物分析六杂质 （2） pH值为33.5硫化铅沉淀完全 本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液的弱酸性。 供试品如果用强酸溶解、或用过强酸处理过氨水酚酞中性（无色） 3. 条件控制药物分析六杂质重金属4.供试品处理供试品有色：外消色法消除（在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。）内消色法。

26、(2) 供试品有微量Fe3+ Fe3+会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加抗坏血酸（Vc）或盐酸羟胺（0.51.0g）使Fe3+ 还原成Fe2+离子，消除干扰再检查。60药物分析六杂质(3)供试品为铁盐 在相对密度1.1031.105的盐酸中使大部分 Fe3+生成 再加氨试液，使溶液成碱性，用氰化钾掩蔽残留的微量铁盐后，加硫化钠试液检查铅盐(4)供试品本身也能生成不溶性硫化物 根据具体情况特殊处理。若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后，再依第三法检查重金属药物分析六杂质第二法、炽灼后的硫代乙酰胺法 2.原理 1.适用

27、范围在水、乙醇中难溶，或能与重金属离子形成配位化合物的有机药物。将供试品破坏后（如炽灼残渣项下遗留的残渣），加硝酸加热处理，使有机物分解、破坏完全后，再按第一法进行检查重金属15-7月-2262药物分析六杂质操作方法重金属药物分析六杂质3.注意事项重金属1）炽灼温度：5006002）加入试剂的干扰：硝酸、盐酸3）特殊药物对容器的腐蚀含钠及氟的有机药物应使用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）15-7月-2264药物分析六杂质第三法、硫化钠法 2.原理 1.适用范围适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。 在碱性介质中，以硫化钠为显色剂

28、，使Pb2+生成PbS微粒的混悬液，与一定量的标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较进行检查重金属65药物分析六杂质第三法、硫化钠法 3.注意事项硫化钠对玻璃有一定的腐蚀性；溶液放置过久会产生絮状物，试液应临用新制。重金属15-7月-2266药物分析六杂质第四法、微孔滤膜法 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液经同法处理后所产生的色斑深浅，确定重金属是否超限。1.适用范围适用于2 5 g重金属杂质检查，提高灵敏度。2.原理 重金属第一法：10-20ug15-7月-2267药物分析六杂质3.注意事项供试溶液有颜色或浑浊，应用滤膜进行预滤 ；滤膜污染，换滤膜 A：滤器上

29、盖部分B：连接头；C：垫圈D：孔径3.0m的滤膜E：尼龙垫网(孔径不限)F：滤器下部 重金属15-7月-2268药物分析六杂质*五、砷盐(Arsenic)检查法 砷盐生产过程使用无机试剂引入标准砷溶液： 三氧化二砷方法：中国药典检查法第一法：古蔡法（Gutzeit法）第二法：二乙基二硫代氨基甲酸银法（AgDDC法） （silver diethyldithio-carbamate）所加试剂的作用： 碘化钾、氯化亚锡、醋酸铅棉的作用仪器装置15-7月-2269药物分析六杂质(一)古蔡法1. 原理： Zn + H+ H2 + Zn2+ 新生态氢 AsO33- AsH3 砷盐 HgBr2 (溴化汞试纸

30、) As3+ As(HgBr)3 (黄色) AsH(HgBr)2 (棕色) As2Hg3 (棕黑色)砷斑与标准砷斑比较药物分析六杂质古蔡法 （Gutzeit）：醋酸铅棉花： 吸收HsS砷斑HgBr2As(HgBr)3 + AsH(HgBr)2 +As2Hg3橙黄色砷斑黄色棕色棕黑色加 KI 和 SnCl2目的： 还原 As5+； 抑制SbH3生成； 形成锌锡齐， 使氢气的生成连续均匀。Zn粒、HCl2、装置A.砷化氢发生瓶 B.中空磨口塞 C.导气管 D.具孔有机玻璃旋塞 E.具孔有机玻璃旋塞盖71药物分析六杂质3、注意事项(1)标准砷溶液:三氧化二砷配制储备液标准砷溶液临用前新配：1gAs/

31、1ml 中国药典规定: 标准砷斑用2ml标准砷溶液(2 gAs) 清晰砷斑。过深或过浅均会影响比色的正确 药物含砷限量不同按规定限量改变供试品取用量(2)氢气的发生速度砷化氢逸出速度砷斑色泽、清晰锌粒的大小和用量溶液的酸度反应温度药物分析六杂质注意事项(3)酸性氯化亚锡SnCl2及碘化钾KI的作用是还原As5+为As3+，加快反应速度 As5+ As3+ AsO43- + 2I- + 2H+ AsO33- + I2 + H2O AsO43- + Sn2+ + 2H+ AsO33- + Sn4+ + H2O I2 + Sn2+ 2I- + Sn4+ 4I- + Zn2+ ZnI4 2- 稳定配位

32、离子 利于AsH3不断生成 Zn + SnCl2 锌粒表面形成锌锡齐去极化作用 氢气均 匀连续发生药物分析六杂质(4)导气管装醋酸铅棉花60mg（装管高度约6080mm）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰。(5)溴化汞试纸 + AsH3反应灵敏， 但所形成的砷斑不稳定。溴化汞试纸 保持干燥、避光保存在棕色磨口瓶中形成砷斑后，立即比较 。药物分析六杂质4、供试品处理(1)供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时 加HNO3， 使氧化成硫酸盐，以除去干扰再检。如硫代硫酸钠中砷盐的检查。 (2)供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。铁盐 SnCl2 Fe

33、2+如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。砷盐药物分析六杂质(3)干扰砷检查的有机药物，先进行有机破坏能溶于水, 不干扰检查的药物, 直接依法检查. 环状结构有机药物 As 共价键结合结果偏低或难以检出有机破坏(碱破坏法; 酸破坏法)碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法 酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查 砷盐15-7月-2276药物分析六杂质(4)含锑药物，可改用白田道夫法 Betterdorff法含锑药物如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠，用古蔡法检砷时，锑盐也可被还原为锑化氢，与溴化汞试纸灰色锑斑，干扰砷斑的检查。 SbH3 + HgBr2 SbH2(HgBr) + HBr原理： SnCl2 在盐酸中能将砷盐还原

34、成棕褐色的胶态 砷，与一定量标准砷溶液按同法处理后进行 比较，即可判断供试品中含砷限量。 2As3+ + 3SnCl2 + 6HCl 2As+3SnCl4 +6H+ (注意！不加 Zn 粒和 KI )15-7月-2277药物分析六杂质(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法(AgDDC法) 检查、含量测定1.原理红色胶态银药物分析六杂质是利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，AsH3使Ag-DDC中的银还原为红色胶态银。试剂的作用同古蔡法。用(1)目视比色法(2)以Ag-DDC溶液为空白，于510nm的波长处，测定吸收度，再与一定量标准砷溶液用同法处理后得到的有色溶液进行比较,供试溶液的吸收度不得大于标

35、准砷溶液的吸收度。药物分析六杂质2.装置药物分析六杂质Ag-DDC法 ：二乙基二硫代氨基甲酸银法AsH3Ag-DDC吡啶Ag（红色胶态）ABC醋酸铅棉花Zn、HCl、KI、SnCl2同古蔡氏法Ag-DDC吡啶溶液25-40水浴反应45min检查(1)比色(2)510nm测吸收度15-7月-2281药物分析六杂质3.注意事项(1)线性关系 1 g 10 g As /40ml线性关系良好，颜色2小时稳定, 重现性好, 可作为限量检查和砷盐含量测定。(2)有机碱吸收用有机碱吸收反应产生的HDDC( 二乙基二硫代氨基甲酸)有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。 用吡啶检测

36、灵敏度: 0.5g As /30ml用三乙胺检测灵敏度略低于吡啶。药物分析六杂质六、溶液颜色检查法目的：控制药物中有色杂质含量方法：中国药典（2005年版）第一法：目视比色法:与标准比色液进行比较的方法第二法：分光光度法:规定波长处吸收度值第三法：色差计法15-7月-2283药物分析六杂质标准比色液的配制 第一法：目视比色法观察方法与标准比色液比较的方法，全波长范围定性观察 药物分析六杂质黄绿色黄色橙黄色橙红色棕红色比色用重铬酸钾液比色用硫酸铜液比色用氯化钴液水 五个色调：每个色调10个色号110浅深（62.4mg/ml, 蓝色）（0.8000mg/ml, 黄色）（59.5mg/ml, 红色）

37、85药物分析六杂质色差值标准液供试液水第二法：使用分光光度法检查有色杂质如果溶解度不好，先过滤，再在规定波长测定，吸收度不得超过规定值。第三法：色差计法:本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。 15-7月-2286药物分析六杂质七、易炭化物检查法目的:检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。方法:与规定的对照液进行比色供试品一定量加入到5ml硫酸中振摇溶解静置15分钟与一定量标准比色液比较不得更深比色：同置白色背景前，平视观察比较。 药物分析六杂质 如为固体，应先研成细粉。 如不溶，可加热。加热溶解后，放冷 至室温，再移置比色管中。 注意事项

38、：对照液溶液颜色检查项的对照液比色用硫酸铜、重铬酸钾、氯化钴按规定方法配制的对照液KMnO4液药物分析六杂质八、溶液澄清度检查法目的:检查药物中的微量不溶性杂质用作注射剂的原料药，一般应作此项检查。 加水 15ml 浊度标准液 浊度标准原液 浊度标准贮备液 稀释 至1000ml水配制后5分钟内使用 550nm不同级号 A：0.120.15 0.5 1 2 3 4与水配制药物分析六杂质检查方法室温 供试品溶液 等量 分别置于配对的比浊用玻璃管中 浊度标准液 暗室内垂直同置于伞棚灯下 照度1000 lx 水平方向观察、比较 检查 药物分析六杂质浊度标准液硫酸肼 乌洛托品 水*甲醛腙浊度标准液：贮备

39、液、原液、比浊用液新沸过冷水15-7月-2291药物分析六杂质 硫酸高温炽灼 挥发物质逸出有机药物 硫酸盐炽灼残渣 硫酸灰分九、炽灼残渣检查法目的:控制有机药物和挥发性无机药物中存在的非挥发性无机杂质。炽灼残渣:有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后,高温炽灼,所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。方法:称重量法方法:药物分析六杂质检查方法：规定量供试品置已炽灼至恒重的坩埚中精密称定 电炉 缓缓炽灼至炭化 放冷 至室温 加硫酸 0.5ml湿润低温加热至硫酸蒸气除尽后将坩埚置高温电炉中700800炽灼至恒重计算计算方法:称重量法药物分析六杂质注意事项：炽灼残渣限量: 0.1%0.2% , 一般使炽

40、灼残渣量 12mg（称量误差决定），取样量大，1g（0.1%） 用药剂量小或价格昂贵的药品一般不作此项检查.炽灼残渣: 缓缓加热进高温马弗炉前要挥尽硫酸 如果重金属检查 , 炽灼温度500600 ， 避免重金属杂质挥发药物分析六杂质注意事项：坩埚应先700800炽灼至恒重炽灼至恒重： 供试品连续两次炽灼（第二次称重至少要炽灼30min）后的重量差异在0.3mg以下。含氟药品铂坩锅瓷坩埚编号用蓝墨水与FeCl3溶液混合涂写恒重15-7月-2295药物分析六杂质十、干燥失重 测定法目的：检查药物中的水分或其 它挥发性物质（乙醇）指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，根据所减失的重量和取样量计算供

41、试品干燥失重的百分率。量：恒重第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。 药物分析六杂质常压恒温干燥法干燥剂干燥法减压干燥法热分析法热重分析法（TGA）差示热分析法（DTA）差示扫描量热法（DSC）15-7月-2297药物分析六杂质“恒重”：药典术语，指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量。干燥温度：105（一般）， 枸橼酸钠， 180 干燥至恒重。 硫代硫酸钠，含结晶水，防熔化，4050 ，渐次升温105 恒重器皿：扁形称量瓶，样品厚度5mm， 疏松物质，不超过10mm； 大颗粒结晶，研细，2mm。置干燥器中放冷至室温称量干燥失重（一）常压恒温干燥法适用药

42、物：受热较稳定的药物。药典：40多种药物分析六杂质（三）干燥剂干燥法适用药物：适用于受热易分解或挥发的药物如氯化铵；苯佐卡因；硝酸异山梨酯；马来酸麦角新碱。干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷吸水效力：P2O5 硅胶硫酸 吸水效果好、使用方便、价廉 变色硅胶1g吸水20mg变色 105 干燥吸水容量：硫酸 P2O5 (贵) 再次使用药物分析六杂质（二）减压干燥法真空干燥器适用药物：适于熔点低、受热不稳定、水分难赶除的药物 减压干燥剂干燥 恒温减压干燥例:布洛芬：m.p 74.5 77.5 规定:P2O5干燥器中减压干燥至恒重 肾上腺素： P2O5干燥器中减压干燥 18 小时 地高辛：105 减压干燥

43、 1 小时恒温减压干燥 箱减压压力：2.67 Kpa(20mmHg)以下一般情况下药物分析六杂质热分析法是在程序控制温度下，精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化、还原等化学变化，用以对该物质进行物理常数、熔点和沸点的确定以及作为鉴别和纯度检查的方法。 干燥失重（四）热分析法15-7月-22101药物分析六杂质 类型（根据测定物理量的不同 ）：热重分析法（Thermogravimetric Analysis，TGA）差示热分析法（Differential Thermal Analysis，DTA）差示扫描量热法（Di

44、fferential Scanning Calorimetry，DSC）15-7月-22102药物分析六杂质1、热重分析法 在程序控制温度下，测量物质的质量与温度关系的方法。热重分析仪：由安装在程序升温炉中的微量分析天平组成，天平不受温度的影响，经过长时间加热仍有良好的稳定性。样品用量：120mg容器：瓷坩埚、铂坩埚 天平盘 升温 氮气流（或其它惰性气流）带走挥发性物质药物分析六杂质ABCDWT或t起始温度终止温度平台热重曲线：记录质量变化对温度（或时间）的关系曲线 104药物分析六杂质热重分析特点能准确地测量物质的质量变化及变化的温度样品用量少(120mg)测定速度快（比通常干燥失重法）适用

45、：贵重药品；在空气中易氧化的药物 干燥失重药物分析六杂质例：USP（24），用TGA法测定：硫酸长春碱的干燥失重供试品约10mg精密称定氮气流（流速40ml/min），5 /min 恒速升温200 范围内记录TG曲线减失重量不得过15.0%药物分析六杂质2、差示热分析法（DTA）概念:差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质（供试品）和参比物之间的温度差与温度(或时间)关系的热分析技术。差热分析曲线：记录样品与参比物的温度差(T)变化对温度（或时间）的关系曲线 参比物：应具有惰性，与待测物有相似的热容15-7月-22107药物分析六杂质应用原理：待测物的相变(包括熔融、升华和晶型转变等)和化

46、学反应(包括脱水、分解和氧化还原等)可产生特征吸热和特征放热峰。 复杂的化合物常具有比较复杂的差热分析曲线，各种吸热和放热峰的个数、形状和位置与相应的温度可用来定性地鉴别待测物质或其多晶型；与其对照品或标准品差热分析曲线之间的差异，亦可检查待测物质的纯度。15-7月-22108药物分析六杂质0+ABBCDDEFGTT or tDTA曲线峰宽T 负值倒峰 吸热反应T 正值正峰 放热反应DTA适用：测药物熔点 鉴定、估测药物纯度 根据吸热或放热峰的数目、形状和位置药物分析六杂质3、差示扫描量热法（DSC）应用：鉴别药物：DSC曲线上峰位置、 形状、数目 检查杂质：熔点下降 准确测药物熔点药物分析六

47、杂质DSC法是在程序控制温度下，测量维持样品与参比物质的温度相同,系统所需输给待测物和参比物的能量差随温度(或时间)变化差示扫描量热法 DSC法基本类型样品与参比物的热流量差（功率差(dQ/dt)）纵坐标功率补停型热流型样品与参比物的温度差(T)成正比温度T或时间t横坐标DSC曲线15-7月-22111药物分析六杂质3）DSC法曲线15-7月-22112药物分析六杂质药物分析六杂质贵重药物的干燥失重测定空气中不稳定药物的测定区分结晶水和吸附水测定结晶水含量1)TGA法药物的熔点测定晶型鉴别纯度测定杂质限量2)DTA和DSC法热分析法的应用15-7月-22114药物分析六杂质十一、水分测定法卡尔

48、费休法，甲苯法费休氏法原理根据碘和二氧化硫在无水吡啶和无水甲醇溶液中能与水起定量反应的原理测定水分。所用仪器应该干燥，并能避免空气中水分的侵入；测定要在干燥的地方进行。药物分析六杂质费休氏试液的配制：称取碘（置硫酸干燥器内48小时以上）110g，置干燥的具塞锥形瓶中，加无水吡啶160ml，注意冷却，振摇至碘全部溶解，加无水甲醇300ml，称定重量，将锥形瓶置冰浴中冷却，在避免空气中水分侵入的条件下，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，于暗处放置24小时后进行标定。药物分析六杂质无水吡啶和无水甲醇利于使可逆反应向正反应进行。水与费休氏试液作用的摩尔比为：

49、水碘二氧化硫甲醇吡啶=11113药物分析六杂质供试品用费休氏试液滴定，再滴定空白溶液A：供试品消耗的费休氏试液的容积 (ml)B：空白消耗的费休氏试液的容积 (ml)F：每1ml费休氏试液相当于水的重量(mg)W：供试品的重量指示终点方法：1、碘终点前显淡黄色，终点时呈红棕色；2、永停法药物分析六杂质十二、有机溶剂残留量测定法检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂 苯、氯仿、1,4二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷如生产过程中涉及其他需要检查的有害有机溶剂，则应在各品种项下另作规定。2000版药物分析六杂质Ch.P2005：溶剂残留量限度要求中，按有机溶剂毒性程度分为一类二类三类四类有机

50、溶剂残留量限度要求毒性较大、致癌、对环境有害对人有一定毒性对人的健康危险性较小无毒理学资料尽量避免使用限量使用质控要求限制使用推荐使用药物分析六杂质有机溶液柱温()内标测定方法限量,%二氧六环170吡啶一法0.038吡啶170二氧六环一法0.02苯170甲苯一或二法0.0002甲苯170苯一或二法0.089氯仿1401,2-二氯乙烷一或二法0.006二氯甲烷140一或二法0.06环氧乙烷80二法0.001表3-2 残留有机溶剂测定的方法和限量（2000）药物分析六杂质中国药典规定，在残留溶剂测定前应作色谱系统适用性试验。(1)用待测物的色谱峰计算的填充柱理论塔板数应大于1000，n 1000。

51、毛细柱，n 5000。(2)以内标法测定时，内标物与待测物的两个色谱峰的分离度应大于1.5。 R 1.5（内标与待测物）(3)以内标法测定时，每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD不大于5。 n = 5 RSD 5% (内标法) (4)若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD不大于10%。 n = 5 RSD 10% (外标法)122药物分析六杂质中国药典 GC法 （填充柱）固定相：直径为0.250.18mm的GDX （二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子 多孔小球）载气：氮气检测器：FID柱温：80170 （毛细管柱）方法，顶空进样药物分析六杂质第三节 特殊杂质的检查方法概念：特殊

52、杂质是指在该药的生产和贮藏过程中可能引入的特有杂质。原理: 利用药物和杂质在物理和化学性质 上的差异方法: 方法专属性要强药物分析六杂质利用药物和杂质在物理 性质 上的差异外观形状分配或吸附光的吸收 利用药物和杂质在化学 性质 上的差异化学反应的差异药物不发生反应，杂质反应药物分析六杂质一、色谱分析法薄层色谱法 TLC气相色谱法 GC高效液相色谱法 HPLC药物分析六杂质吸附或分配性质的差异 （色谱法） 中间体、副产物、分解产物 与药物结构近似 色谱分离 检查 薄层色谱法；高效液相色谱法； 气相色谱法。药物分析六杂质(一)薄层色谱法 TLC灵敏、简便、快速、不需要特殊设备杂质对照品比较法较理想

53、, 需杂质对照品供试品、杂质对照品点在同一薄层板上杂质斑点颜色与对照品斑点比较，不得更深可认为未超过规定的含杂质最高限量。(2)供试品溶液自身稀释对照法(高低浓度对照法)杂质结构不能确定，无杂质对照：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显主斑点颜色（注：供试品与所检杂质所显颜色应相同）药物分析六杂质(3)杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用药物中存在多个杂质其中有些杂质有对照品杂质未知或没有对照品杂质对照品法供试品溶液自身稀释对照法药物分析六杂质(4)对照药物法选供试品相同的药物作为对照品（适用于：无适合杂质对照或供试品中杂质斑点颜色与主成分斑点的颜色有异）此对照药物所含待检杂质应符合于要求的限量水平，且稳定性好。 试验条件下杂质的检测限来控制其限量少数药物采用在试验条件下不出现杂质斑点为合格。 此法受条件影响较大，如薄层板厚度、显色剂的量等。 一般在无其它合适的检查方法时才使用。药物分析六杂质为了保证TLC系统符合要求，中国药典2005，增加了TLC系