96孔板高通量快速测定食品天然产物总多酚含量TPC_第1页
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文档简介

1、96孔板高通量测定食品天然产物中的总多酚含量配置试剂准备 10 毫升稀释的 Folin-Ciocalteu 试剂(FCR, 2 N, from Sigma, Cat.# F9252-1L ):将1毫升福林酚浓缩液(2N)与9毫升H2O混合。用铝箔包裹容器，并将其保存在通风柜下的储酸柜中。它应该显示 浅黄色，可以保存几个月。7.5% Na2CO3溶液(MW. 105.99):将 0.75g Na2CO3 溶解于 H2O 中， 并使最终体积达到10ml。没食子酸母液配制(Mw. 188.1, from Sigma, G-8647):称取5mg没食子酸，加10ml甲醇溶液(70%)于离心管中(500

2、ppm)。样品溶液：您可能需要稀释样品，以获得在线性范围内的标准曲线读数。称取5mg样品放入离心管中，加入10ml纯水，涡旋一分钟，0.22um微孔滤膜过滤。方法:如下表所示，在1.5毫升离心管中制备一系列浓度增加的没食子酸标准品(0-300 ppm)。没食子酸标准溶液浓度.ppm70%甲醇溶液(rL)500 ppm没食子酸母液(rL)251901050180201001604020012080300801203. 吸取25 UL将上述不同浓度G.A.标准品溶液放入96孔板，每个浓度重复3孔。将25 UL样品(具有不同稀释度)加到孔中，重复3个孔吸取125 mL稀释的FCR移液至各孔中。轻轻震动96孔微孔板，静置8至10分钟。吸取125 mL稀释的Na2CO3溶液至各孔中，反应30分钟。酶标仪设置765 nm读数.根据标准曲线计算注意事项:1.FCR与样品在酸性条件下发生反应，加入7.5%Na2CO3，显色要求pH7（以pH 9为最佳）。如果您的样品用酸化溶剂（1N）提取，可能会导致最 终反应混合物7，导致呈绿色。在这种情况下，您需要用无酸溶剂稀释样 品，或在分析前用氢氧化钠中和样品。在7pH9的

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