药物分析教学课件：第十五章 甾体激素类药物的分析

1、第十五章甾体激素类药物的分析The analysis of Steroid Hormon Drugs第一节基本结构和分类一、母核环戊烷并多氢菲 环上双键的表示方法： 用“”表示 ,双键的位置写在的右上角。双键位置4 1,4 5 5(10) 分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素1肾上腺皮质激素皮质酮的衍生物 代表药物有： 可的松氢化可的松人工合成药物： 地塞米松氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键，9位上引入-F，16位上引入-CH3 氢化泼尼松在氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键 结构特点： 含有21个C A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮）

2、17位：-醇酮基，有还原性。 人工合成品：1、2位间有双键，6位，9位引入卤素，16位或16位引入甲基，16位引入羟基等。 1. 肾上腺皮质激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应 C17 醇酮基还 原 性2雄性激素及蛋白同化激素睾丸素的衍生物 代表药物：甲基睾丸素 丙酸睾丸素 蛋白同化激素在睾丸素基础上结构修饰得到，如苯丙酸诺龙结构特点： 含有19个C A环的4-3-酮 17位羟基、甲基、酯 供分析官能团： A环4-3-酮C17 羟基可成酯UV、与羰基试剂反应3孕激素黄体酮结构特点： 含有21个C A环的4-3-酮 17位甲酮基 供分析官能团： A环的4-3-酮 17位上的甲酮基

3、 UV、与羰基试剂反应与亚硝基铁氰化钠反应4雌激素 雌二醇、炔雌醇及衍生物 雌酮 结构特点： 含有18个C A环：苯环，3位上有酚羟基， 10位无甲基 17位：羟基、乙炔基 供分析官能团： A环的酚羟基 17位的羟基 C17 乙炔基与AgNO3反应UV、与重氮苯磺酸盐反应可成酯口服避孕药，如炔诺酮、异炔诺酮、安宫黄体酮等 A环有4-3-酮结构；有的第17位有羟基和乙炔基；小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OH-OH-CCH第二节鉴别试验一、呈色反应 1母核 能与H2SO4、

4、H3PO4、HClO4、HCl等呈色。 最常用的是H2SO4。 如：(二) 官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OH1 C17 醇酮基还原性A. 呈色反应肾上腺皮质激素药物Cu2O橙红色碱性酒石酸铜B. 沉淀反应Ag黑色氨制硝酸银甾酮类激素药物呈色羰基试剂2. C3酮基和C20酮基常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼黄体酮异烟双腙（黄色）具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化钠间二硝基酚芳香醛3. 甲酮基黄体酮蓝紫色亚硝基铁 氰化钠其他甾体淡橙色不显色黄体酮蓝紫色雌激素类药物红色偶 氮染料重氮苯磺酸4. 酚羟基含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银5. 乙炔基有机

5、氟F有机破坏有机氯Cl6. 有机卤素茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸硝酸银AgCl 呈色 茜素氟蓝蓝紫色F-香7. 酯的反应特臭特臭二、制备衍生物测定熔点三、紫外分光光度法四、红外光谱法（特征性强） 中国药典上收载的甾体激素类药物均有红外光谱图。五、薄层色谱法六、HPLC 第三节特殊杂质检查 其它甾体、硒、残留溶剂、游离磷酸盐（一）有关物质（其他甾体）定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”Li/NH3 C2H5OH弱酸雌二醇3甲醚苯丙酸诺龙的合成路线III强酸III苯丙酰氯HCl 特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似2. 来源 原料、中间体、异构体、降解产物4. 方法（具有一

6、定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）（1）TLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色（2）HPLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积硒二、来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒原理方法三、残留溶剂（灵敏度法）甲醇 不得出峰 检测限= 3.1ng 0.3%丙酮 0.5% 内标法 + 校正因子GC法四、游离磷酸盐地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法原理：方法：第四节含量测定一、HPLC, USP、BP、JP均采用, RPHPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有

7、结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）特点 用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快二、 UV法-3-酮 240nm（）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素 苯环 280nm（）雌激素三、 比色法（一）异烟肼比色法（二）四氮唑比色法（三）kober反应比色法（一）、异烟肼比色法1原理 C3酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量。2、反应条件（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。 HCl浓度：0.0074mol/L

8、 （1000ml醇中含0.625ml浓HCl） 异烟肼浓度：0.0365mol/L (0.5mg/ml)(3) 水分、O2与光线的影响含水量腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响温度(4)t （3）水分的影响 甾体激素与异烟肼的缩合反应为可逆反应，所以含水量升高可促使反应逆转而水解，使吸收度降低（H2OA）(5) 反应的专属性 在该反应条件下， 对43酮具有一定的专属性 C20酮基反应慢， C17酮基反应慢； C11酮基不反应 43酮：室温下，30反应完全。 肾上腺皮质激素类C17 -醇酮基强还原性1. 原理OH -还原二、四氮唑比色法2四氮唑盐的种类：（1）红四氮唑： 2,3,

9、5三苯基氯化四氮唑 （2,3,5triphenyltetrazoliumchloride） 缩写TTC 或RT（Red tetrazolium）（2）蓝四氮唑：3,3二甲氧苯基双4，4（3,5二苯基）氯化四氮唑3,3-dianisole-bis4,4-(3,5-diphenyl)triphenyltetrazoliumchloride 缩写BT ( Blue tetrazolium ) OOH-分子重排三苯甲瓒深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）蓝四氮唑（BT）双甲瓒（暗蓝）3、测定法ATTC法 BP(1988); ChP(1995)：BBT法 USP(xxIII )4、讨论 结构、反

10、应温度和时间、水分、碱浓度、空气中氧、试剂类别和浓度等，对反应速度，呈色强度和稳定性有影响。（1）官能团位置的影响 a C11： 11位酮基反应速度快于11位羟基 可的松氢化可的松b C21：-羟基（C21-OH） 21 -OH酯化后较母体羟基反应速度慢 即：游离体酯类如：可的松醋酸可的松 简单酯复杂酯， 醋酸酯磷酸酯琥珀酸酯三甲基醋酸酯（2） 溶剂、水分的影响含水量5%含水10%A10%含水30%几无反应 无醛无水乙醇醛 A 无水乙醇（3）液性： 必要条件：强碱性 以(CH3)4N+OH-结果较满意 （4） O2与光线的影响反应过程反应产物怕光避光、快速O2影响颜色强度和稳定性隔绝空气、 快速、充N2（5） 温度与时间t甲瓒分解%ChP 25 4045BP 30 1h1. 原理max=465max=515雌激素三、Kober反应比色法雌二醇-3-甲醚max=465max=515 Kober反应缺点：（1）条件较难控制，易出双色黄+红（2）重现性较差： 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反应时间和温度的影响。 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定剂