生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃

1、相关知识点回忆生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃NRERE直链淀粉支链淀粉或糖原分支点的结构RENRE(16)分支点支链淀粉或糖原分子示意图直链淀粉的螺旋结构0.8nm1.4nm6个残基1. 重要的多糖-淀粉生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃支链淀粉的分枝结构开始分枝的残基非还原端残基两个葡萄糖单位之间的1，6-糖苷键两个葡萄糖单位之间的1，4-糖苷键生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃 a -淀粉酶 -淀粉酶 切-1,4-糖苷键 淀粉的 水解 麦芽糖酶 酶促 脱支酶 切 -1,6-糖苷键 降解 异麦芽糖酶 磷酸解: 淀粉磷酸化酶2、淀粉的酶促降解生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃3. 淀粉的酶促水解淀

2、粉酶 淀粉酶：在淀粉分子内部任意水解-1，4糖苷键。产物为麦芽糖，麦芽三糖，糊精等还原糖（内切酶） 淀粉酶:从非还原端开始，水解，4糖苷键，依次水解下一个麦芽糖单位（外切酶）淀粉酶淀粉酶极限糊精生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃-淀粉酶 -淀粉酶 可跨越分枝点 不能跨越分枝点 内切酶（随机切） 端解酶（非还原端两两相切） 产物糊精分子量小 糊精分子量大（极限糊精） 耐70 15min, 不耐酸 耐pH=3.3 酸性, 不耐高温 分布 发芽种子 休眠种子 -淀粉酶和-淀粉酶的异同点：相同点：都作用于-1,4糖苷键，产物都是麦芽糖不同点：生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃淀粉酶活性的测定（P174）实

3、验04生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃一、目的二、原理淀粉-淀粉酶（内切酶）-淀粉酶（外切酶）麦芽糖等寡聚糖麦芽糖3，5-二硝基水杨酸3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色）淀粉酶的作用机制及产物显色原理：D-麦芽糖生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃淀粉酶活性大小的表示方法：淀粉酶活性的大小与产生的还原糖的量成正比。以单位质量样品单位时间生成的还原糖的量表示。测定-淀粉酶和-淀粉酶：-淀粉酶不耐酸， -淀粉酶不耐热，本实验采用70。C保温15min钝化-淀粉酶而测出-淀粉酶。总活力减去-淀粉酶活力则为-淀粉酶活力。生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃三、材料、仪器设备及试剂材料：萌发的小麦种子（芽长1cm

4、）仪器设备：分光光度计、恒温水浴、刻度试管、 容量瓶试剂： 1、标准麦芽糖溶液（1mg/mL） 2、3，5-二硝基水杨酸（含NaOH） 3、1%淀粉溶液生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃四、实验步骤2、酶液制备 称取1g萌发的小麦种子 加少量蒸馏水 研磨 转入100 mL容量瓶 定容 放置15min 过滤 淀粉酶原液（酶液） 取酶液 10 mL于50 mL容量瓶，用蒸馏水定容 至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液（酶液）1、麦芽糖标准曲线的制作 A540=0.264x-0.052 (x为mg麦芽糖）生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃3、酶活力的测定取4支干净的具塞刻度试管，编号，按下表操作：摇匀，沸水浴

5、中5min，取出流水冷却，加蒸馏水至20mL。摇匀，540nm比色测定。操作项目 管号 -1 -2 -1 -2淀粉酶原液（酶液）/mL 1.0 1.0 0 0钝化-淀粉酶 置70 0C水浴中15min，取出后流水冷却淀粉酶稀释液（酶液）/mL 0 0 1.0 1.03，5-二硝基水杨酸/ mL 2.0 0 2.0 0预保温 40 0C恒温水浴中保温10min 1%淀粉溶液/ mL（ 40。C ） 1.0 1.0 1.0 1.0保温 40 0C恒温水浴中保温5min 3，5-二硝基水杨酸/ mL 0 2.0 0 2.0 生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃空白管：2 mL蒸馏水 + 2 mL3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，定容至20 mL生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃五、实验数据VT= VS= W=A-1= A-2 = A1 = A-2 - A-1 x1=A-1= A-2 = A2 = A-2 - A-1 x2=生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃六、结果计算 X1 VT -淀粉酶活力mg/(g.min)= W VS t X2 VT N(+)-淀粉酶活力mg/(g.min)= W VS t-淀粉酶活力=(+)-淀粉酶活力- -淀粉酶活力生化实验