糖的组织化学

1、组织化学 histochemistry特殊染色, 通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色试剂,定位地显示病变组织细胞的特殊化学成分,同时又能保存原有的形态改变, 达到形态与代谢的结合.可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类、核酸、某些金属元素等。1糖 的 组 织 化 学2糖的分类单糖和双糖多糖：淀粉、纤维素、糖原粘液物质（粘多糖） 中性粘多糖 酸性粘多糖糖蛋白 粘蛋白 氨基己糖4% 糖蛋白 氨基己糖4%5. 糖脂 含有半乳糖, 脂肪酸,神经氨基醇3糖 原4一. 糖原的概念 由多糖衍化而来，是天然存在于动物组织内的多糖 分布：胞浆内 肝、心肌、骨骼肌 同种葡萄糖的聚合物 作为糖原染色的切片

2、，必须冰冻或经特殊固定液固定后进行切片5二.固定剂的选用Carnoy（冷4） 无水乙醇 60ml 防止糖原溶于水 氯 仿 30ml 增加渗透力 冰 醋 酸 10ml 抵消乙醇对组织的 收缩、硬脆作用 *优点：固定迅速，保存肝糖原 62. Gendre （冷4） 苦味酸无水乙醇饱和液 80ml 甲醛 15ml 冰醋酸 5ml临用前混合配制73. Lillie固定液（AAF） 无水乙醇 85ml 冰醋酸 5ml 甲醛 10ml 固定液预冷4，固定24h后，95%乙醇脱水，包埋8三.固定中注意事项1.尽可能取小块新鲜组织及时固定，不用水溶性固定液2.应用含酒精的溶液作为固定液，但最好不单独使用乙醇固

3、定，以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳3.固定原理：使糖原与固定液之间相结合的蛋白质凝固，糖原被周围凝固的蛋白质膜保护起来，9四.显示糖原的方法 1. 碘染色 2. 胭脂红染色 *3. 过碘酸-Schiff 反应 4. 银浸染法10过碘酸-Schiff 反应Periodicacid-Schiff, PAS11(一）染色原理过碘酸是一种强氧化剂，能氧化糖分子，使相邻二个碳原子上的羟基（-OH）变为醛基（-COOH）12Schiff氏试剂是付品红（碱性品红）经SO2作用后，形成的无色溶液付品红Schiff试剂13当Schiff氏试剂与醛基作用后，形成含有发色基团的化合物，呈现紫红色沉淀14*PAS反

4、应的基本原理 1. 通过过碘酸的氧化作用，将糖分子中的碳键打断，游离出醛基 2. 醛基与Schiff试剂反应显出红色沉淀15(二) 染色步骤1.切片脱蜡至水2.1%过碘酸溶液内氧化5-10min3.流水洗5min, 再用蒸馏水洗4.用Schiff试剂处理10-20min5.流水洗10min6.复染(可用Mayer明矾苏木素或甲基绿衬染细胞核)7.脱水、透明、封片16切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。17切片充分洗净后入Schiffs试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后

5、水洗，镜检。18 肝糖原-PAS染色 X20019 肝糖原- PAS+苏木素复染 X20020【结果】 胞浆内PAS阳性物质呈紫红色，颗粒状或均质团块状，胞核呈蓝色或绿色 红色深浅反应含糖原量的多少【对照】 采用淀粉酶或唾液酶消化切片 对照片PAS（-），未处理片（+）2122This normal glomerulus is stained with PAS to highlight basement membranes. The capillary loops of the glomerulus are well-defined and thin. 23A888 kidney 11-PAS

6、24A888 kidney 14-PAS25（三）PAS反应的应用证明与鉴别细胞内空泡样变性 （水变性、脂肪变性、糖原）心肌病变及其它心血管疾病的诊断和研究糖原累积病的诊断及研究糖尿病的诊断及研究某些肿瘤的诊断与鉴别26肝细胞水变性27肝脂肪变性 (石蜡切片)28肝脂肪变性 (冰冻切片)脂肪特染：苏丹III29糖原累积症30 PAS（+） PAS（-） 肝细胞癌 胆管癌 横纹肌瘤 颗粒细胞肌母细胞瘤 Ewing肉瘤 骨的网织细胞肉瘤 31（四）注意事项1.过碘酸溶液与Schiff试剂均可反复使用多次，用后密封放入冰箱4保存2.新鲜配成的溶液与应用过的作用时间不同，刚配成的作用时间短，以后逐渐延

7、长3.过碘酸溶液在作用前应与室温接近，温度太低，造成氧化不全，影响效果4. Schiff试剂如呈淡红色，则应弃去重配325. Schiff试剂配法很多，区别不大，可以随意选用6. Schiff试剂作用时，染色缸必须加盖，不然Schiff试剂将因SO2消失而失效33Schiff试剂 碱性复红 1g 1N盐酸 20ml 偏重亚硫酸钠 1g 重蒸馏水 200ml34粘 液 物 质(粘 多 糖)35 人体的各种腺体及其他许多组织、细胞，如结缔组织、纤维母细胞、软骨基质等都能合成和分泌粘液物质，统称为粘多糖 或粘液36分类中性粘多糖酸性粘多糖 1.硫酸化粘液物质 结缔组织 （强） 上皮 （弱） 2.非硫

8、酸化粘液物质 含己糖醛酸的结缔组织粘液物质 含唾液酸的上皮粘液物质 37粘液物质染色在诊断中的应用用于一般粘液性病变的观察肿瘤的诊断与研究：用显示粘液的染色方法进行观察和鉴别38胃粘膜上皮分泌中性粘液，而胃肠上皮化生或肠型胃癌细胞分泌酸性粘液 -AB-PAS染色区分中性与酸性粘多糖酸性粘多糖含有硫酸基团和羧基。用阳离子染料与酸性基团结合形成盐键而显色。利用染液不同的PH值及不同的电解质浓度，可以区别酸性粘多糖的二种基团 -HID-AB法39不同PH的竞争性抑制 PH2.5时，二种酸性粘多糖均被奥蓝着色 PH1.0时，仅硫酸粘多糖着色402.电解质浓度与粘液物质着色的关系 MgCl2浓度 显示物

9、 0.06M 羧酸和硫酸化粘液 0.3M 弱和强硫酸化粘液 0.5M 强硫酸化粘液 0.7M 强硫酸化结缔组织粘液 0.9M 硫酸角质41 显示糖分子和酸性基团的 组化方法421.奥蓝-过碘酸Schiff氏法（AB-PAS）【目的】鉴别胃粘液（中性粘多糖）和肠粘液（酸性粘多糖）；对鉴定肠上皮化生有一定意义43【染色原理】 奥蓝是一种水溶性氰化亚钛铜盐，带有阳电荷，与组织中的酸根结合形成盐键。 AB-PAS法：首先酸性粘多糖为奥蓝染色，不再与PAS发生反应；仅中性粘多糖为PAS阳性44【染色步骤】1.石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗2.1%奥蓝的醋酸（3%）液染30分钟（PH约2.5）3.蒸馏水洗4.

10、1%过碘酸液氧化5-10min5.蒸馏水洗6.Schiff试剂作用10-30min7.流水洗10min8.脱水，透明，封片45Alcin blue染色液： 奥蓝1g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml 临用前过滤使用，调节PH2.5-3之间【结果】 中性粘多糖（胃粘液）呈红色，酸性粘多糖（肠粘液）呈蓝色，酸性和中性混合粘液呈紫红色46 AB-PAS X10047AB-PAS X200482.高铁双胺-奥蓝法（HID-AB）法【目的】 主要用于鉴别硫酸化粘多糖和唾液酸粘多糖，对确定肠化生类型有一定价值正常胃粘膜上皮，十二指肠腺中性粘液小肠氮乙酰化唾液酸粘液大肠氧乙酰化唾液酸粘液和硫酸粘液49肠型胃癌

11、唾液酸粘液 硫酸粘液弥漫型胃癌 中性粘液高分化腺癌 硫酸粘液中低分化腺癌 唾液酸粘液大肠型化生 硫酸粘液小肠型化生 不含硫酸粘液50高铁双胺染液 N，N-二甲基-间-苯二胺二盐酸盐 120mg N，N-二甲基-对-苯二胺二盐酸盐 20mg 溶于预热至25的蒸馏水50ml中，再加入60% FeCl3.6H20 1.5ml (PH1.4-1.5)51【染色原理】 二胺盐离解后带阳电荷，与硫酸化粘液物质结合成复合物而显色。 该反应缓慢，需加入FeCl3作为催化剂 FeCl3的作用 -使二胺盐氧化形成棕黑色阳离子色原，加快染色 -使染色液的PH降至1.4 以后奥蓝（PH2.5）把羧基化的唾液酸粘液染成蓝