2005版药典细菌内毒素检查法培训版

1、2005版药典细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。细菌内毒素的量用内毒素单位EU表示。细菌内毒素标准品细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。ng与EU换算 七十年代以前用重量单位

2、ng毫微克给内毒素标量，八十年代以后改为活性单位促凝活性致热活性EU。同一重量的内毒素可因菌种的不同或制备技术的不同而得出不同的Eu值。其制定的标准大致如下：一美国制备成一批内毒素国家标准品，命名为EC2，用它与一批标准鲎试剂做凝胶反响试验，同时也用它做家兔最低致热量试验，共做了56次，对照的结果是：1EC2的家兔最低致热量为1.04ng/kg最低1.04ng/kg，最高1.79ng/kg，平均值为1.37ng/kg，就取为1ng/kg。2EC2对该标准鲎试剂的促凝胶活性为平均值0.194ng，就取0.2ng整数，并把这个最低促凝胶活性0.2ng值定为内毒素单位1Eu。0.2ng=1EU，亦即

3、1ng=5EU。3因为家兔最低致热量的试验是一公斤体重注射10ml从上述对照中得出静脉输液的内毒素限量为0.5EU/ml。二同样用以上方法测后来制备的EC5，共做113次对照试验，得出1ng=10.3EU，取整数为1ng=10EU。三我国第一个国家标准内毒素“79-5上海生物制品研究所张天仁教授制备家兔最低致热量为1.93ng/kg，如按上述换算，1ng约等于2.5EU，可见其致热活性略低于EC2和EC5。 细菌内毒素检查用水凝胶法细菌内毒素检查用水系指含量小于0.015EU/ml灭菌注射用水。光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。实验器材试验所用的器皿需

4、经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。假设使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。理化性质分子量 500025000。形成微胶粒影响水溶性和生物活性水溶性：核心多糖中KDO及单糖数量，磷酸和羧酸数，吸附性：石棉，活性碳，容器，滤膜热稳定性：250，60分钟以上酸碱，辐照，氧化剂的破坏供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.08.0的范围内。对于过酸、过碱或本身

5、有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液或其稀释液的PH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节PH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中进行配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。最大有效稀释倍数MVDMVD=CL/式中L为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，那么C等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位需为mg/ml或U/ml；如供试品为注射用无菌粉末或原料药，那么MVD取1，可计算供试品的最小稀释浓度C=/L。为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度EU/ml，或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的

6、内毒素浓度。方法1 凝胶法凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反响的原理来检测或半定量内毒素的方法。取有鲎试剂溶液的10mm75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿，参加待检样品溶液，轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入371恒温器中，保温60分钟2分钟。将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180，假设管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应防止受到振动造成假阴性结果。鲎试剂灵敏度复核试验 1在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml表示。 当使用新批

7、号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。鲎试剂灵敏度复核试验 2根据鲎试剂灵敏度的标示值，将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2、0.5和0.25四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别参加0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个浓度平行做4管；另外2管参加0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入

8、371恒温器中，保温60分钟2分钟。鲎试剂灵敏度复核试验 3将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180，假设管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应防止受到振动造成假阴性结果。当最大浓度2管均为阳性，最低浓度0.25管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。按下式计算反响终点浓度几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(c).c=1g-1(X/4)式中X为反响终点浓度的对数值1g。反响终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。当c在0.5-2(包括0.5和2)时，方可用于细菌内毒素检查，并以标

9、示灵敏度为该批鲎试剂的灵敏度。干扰试验 1按表1制备溶液A、B、C和D，使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数MVD的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。只有当A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。干扰试验 2按下式计算C和B的反响终点浓度的几何平均值Es和Et。Es= 1g-1(Xs/4)Et= 1g-1(Xt/4)式中Xs和Xt分别为系列溶液C和溶液B的反响终点浓度的对数值1g。当Es在0.52(包括0.5和2)及Et在0.5Es2Es (包括0.5 Es和2 Es)时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。假

10、设供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对试验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。干扰试验 3可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其他适宜的方法如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。为确保所选择的处理方法能有效的排除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验。当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。凝胶限量试验1按表2制备溶液A、B、C、D。使用稀释倍数为MVD并且

11、已经排除干扰的供试品溶液来制备溶液A和B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。注：A供试品溶液；B供试品阳性对照；C阳性对照；D阴性对照。表2 凝胶限量试验溶液的制备凝胶限量试验2结果判断 保温60分钟2分钟后观察结果。假设阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的所有平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。假设溶液A的两个平行管均为阴性，判供试品符合规定；假设溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合规定。假设溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，假设所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否那么判供试品不符合规定。

12、注射用硫酸链霉素的细菌内毒素检查法 本试验所选样品，不须经过特殊处理即可排除干扰，作者对操作过程及结果表达的文字处理仅供学习探讨，探讨本样品可以加强对细菌内毒素检查法的理解，也为最初参加本项工作的同志提供了参考依据。通过学习本样品可以到达以下目的： 1、掌握新品种内毒素限值确实定。 2、掌握细菌内毒素检查法凝胶法的操作规程。 3、掌握新品种干扰试验的设计。 4、掌握试验结果分析。 一、试剂和样品鲎试剂批号：040330 灵敏度：0.5EU/ml；批号：040317 灵敏度：0.25EU/ml；规格均为0.1ml/支；湛江海洋生物制品厂生产细菌内毒素检查用水批号：031229 规格： 2ml/支

13、；湛江海洋生物制品厂生产细菌内毒素工作标准品内毒素工作标准品2004-2，160EU/支，中国药品生物制品检定所提供 注射用硫酸链霉素规格：1.0 g/瓶 批号：20020523 生产厂家：大连美罗大药厂 二、干扰实验：一、限值确实定： 由于2000版中国药典细菌内毒素检查法没有收载注射用硫酸链霉素品种的内毒素限值，按照2005年版中国药典细菌内毒素检查法内毒素限值的计算方法，在此我们通过计算并参考美国药典25版注射用硫酸链霉素规定的内毒素限值。/ =0. 25EU/mgM为人用每公斤体重每小时最大剂量，以?临床用药须知?和?化学药品说明书汇编?所载的临床剂量为准(M=1.2g)。补充说明：2

14、005年版中国药典二部附录?细菌内毒素检查法?内毒素限值的建立 药品、生物制品的细菌内毒素限值L一般按以下公式确定：L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U活性单位表示；K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kgh)表示，注射剂K=5E U/(kgh)，放射性药品注射剂K=2.5 EU/(kgh)，鞘内用注射剂K=0.2 EU/(kgh)；M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml(kgh)、mg (kgh)或U活性单位/ (kgh)表示，人均体重按60kg计算，注射时间假设缺乏1小时，按1小时计算。 二、干扰试验浓度的

15、计算： 按照中国药典2005年版提供的公式计算最大有效稀释倍数，选用鲎试剂的灵敏度为0.5EU/ml和0.25EU/ml ，用4ml细菌内毒素检查用水将样品注射用硫酸链霉素溶解，那么C=1000mg/4ml=250mg/ml。计算方法如下： 这里涉及到样品的浓度C，因不同检验操作人员可能选用不同体积的细菌内毒素检查用水溶解样品，这样每个检验操作人员的样品浓度C都不同，计算出的最大有效稀释倍数MVD也不同。对于粉末类药品，我们直接通过对内毒素限值表达方式的变换，就可以得到干扰试验用的药品浓度，而不必用MVD公式计算。/1mg/ml/2mg/ml/ /0.25 mg/ml (三)、预试验预试验结果

16、，样品硫酸链霉素在2mg/ml 0.25mg/ml范围内不存在明显的增强和抑制作用，可选用其中任一浓度做该样品的细菌内毒素干扰试验。我们选用该样品的2mg/ml 和1mg/ml溶液做演示试验。四、凝胶法干扰试验溶液的制备干扰试验溶液的制备见下表，各溶液制备方法如下： 补充：1、在哪种条件下要做灵敏度复核试验？ 答：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。 2、在哪种条件下要做干扰试验？ 答：当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验。当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何

17、有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。 1、供试品溶液：注射用硫酸链霉素溶解稀释： 用细菌内毒素检查用水(4ml)将其溶解并稀释到、和1. 0mg/ml备用。操作过程必须严格遵守无菌操作规程，保证无外源物质的干扰。 链霉素溶液 250mg/ml 链霉素溶液 20mg/ml 链霉素溶液4.0mg/ml 链霉素溶液 链霉素溶液 4ml2、鲎试剂灵敏度的对照系列： 根据鲎试剂灵敏度的标示值，将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水1ml溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成、0. 5EU/ml、 和等5个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。 200EU/

18、ml20EU/ml补充：内毒素标准品的正确开启方法 取细菌内毒素工作标准一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。 正确易折点错误3、干扰试验系列的制备方法：1、取注射用硫酸链霉素的稀释液分别参加四支试管中，每管加，然后分别吸取相同体积的内毒素标准溶液，浓度依次为 、和，参加四支试管中。将这四支管混合均匀即可得到含内毒素分别为1.0EU/ml、 、和，含样品注射用硫酸链霉素浓度为的标准内毒素对照溶液干扰试验。 链霉素内毒素标准溶液(2EU/ml)(1EU/ml)(0.5EU/ml)(0.25EU/ml)1EU/ml/2、取注射用

19、硫酸链霉素的稀释液分别参加四支试管中，每管加，然后分别吸取相同体积的内毒素标准溶液，浓度依次为1.0EU/ml 、和，参加四支试管中。将这四支管混合均匀即可得到含内毒素分别为 、和，含样品注射用硫酸链霉素浓度为1. 0mg/ml的标准内毒素对照溶液干扰试验系列。 链霉素(1EU/ml)(0.5EU/ml)(0.25EU/ml)(0.125EU/ml)/内毒素标准溶液五、干扰试验加样方法参考中国药典2005版细菌内毒素检查法。 取含有分装了0.1ml鲎试剂溶液的10mm75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管参加0.1ml内毒素标准溶液，每一个浓度平行做4管；另外

20、2管参加0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入371适宜恒温器中，保温60分钟2分钟。 六、试验结果见下表：1、结果记录(TAL:040218，0.5EU/ml，样品浓度C为2.0mg/ml) 2、结果记录(TAL:040225，样品浓度C为1.0mg/ml) 补充：干扰试验判断的标准 当Es在0.52.0(包括0.5和2.0)时，且当Et在0.5Es2.0Es (包括0.5和2.0)时，那么认为供试品在该浓度下无干扰作用。否那么如果供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对试验有干扰，将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。3、结论

21、依据中国药典2005版附录“细菌内毒素检查法，注射用硫酸链霉素细菌内毒素检查干扰试验和稀释液符合试验要求，对鲎试验没有干扰。 三、样品常规检查 建议用注射用硫酸链霉素溶液浓度C为，TAL。一、按表制备所需溶液注：A供试品溶液；B供试品阳性对照；C阳性对照；D阴性对照。 首先，将样品注射用硫酸链霉素溶解稀释到和备用。1、供试品阳性对照PPC：做2管取注射用硫酸链霉素的稀释液和浓度为的内毒素稀释液各混合均匀，取该混合液参加已经复溶好的鲎试剂中即可。2、阳性对照PC：做2管取浓度为的内毒素稀释液参加已经复溶好的鲎试剂中即可。3、供试品溶液：做2管取注射用硫酸链霉素的稀释液参加已经复溶好的鲎试剂中即可

22、。4、阴性对照：做2管取细菌内毒素检查用水参加已经复溶好的鲎试剂中即可。四、关于影响细菌内毒素检查法试验结果的原因分析 1、器皿的洗涤洁净程度、洗涤用水2、鲎试剂灵敏度的差异 3、细菌内毒素工作品效价的误差4、样品本身属性的影响1、-葡聚糖 2、PH值3、金属离子和弱酸阴离子5、实验操作的误差 6、温度 1、器皿洗涤的重要性?中国生物制品操作规程?389页细菌内毒素检查法“玻璃器皿的洗涤规定：“ 将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后，置洗液中浸泡4小时，取出将洗液沥干，用自来水将剩余的洗液洗净，再用新鲜蒸馏水冲洗枯燥后置适宜的密闭金属容器中，迅速置烤箱中，除去玻璃器皿外表可能存在

23、的外源性内毒素。应该特别注意，该规程明确规定最后冲洗玻璃器皿必须“用新鲜蒸馏水冲洗，禁用纯化水和久置的蒸馏水冲洗。有的客户使用反渗透制备的纯化水冲洗试验用玻璃器皿，结果试验中所有的阳性对照都为阴性，复核鲎试剂灵敏度时试验结果误差较大，这主要是由于纯化水和蒸馏水的内在质量不同所造成的。因纯化水中存在的阴阳离子经250高温干烤不能完全被破坏，这时不同的离子就产生对鲎试剂酶反响抑制或增强的反响，为了保证试验结果的准确性和检验报告的权威性，我们应该严格遵守操作规程，用新鲜多效蒸馏水冲洗鲎试验用玻璃器皿。移液管浸泡洗液时，应如何放置？A、正 B、反反放尖端向上的优点？1、保护移液管刻度的准确性2、防止标

24、本缸底部结晶体堵塞移液管2、鲎试剂灵敏度的差异 不同厂家的鲎试剂虽然标示值相同，但仍然存在较大的误差。比方，标示值为的鲎试剂，假设有的产品真实灵敏度可能是或；而另一个厂家的鲎试剂可能是或时，按误差标准都是合格产品，但对同一检品虽然在相同的稀释倍数下，这两个厂家的鲎试剂产品对内毒素的检出水平却不同。 光度测定法光度测定法分为浊度法和显色基质法。浊度法根据检测原理，可以分为终点浊度法和动态浊度法。显色基质法根据检测原理，分为终点显色法和动态显色法。光度测定试验需在特定的仪器中进行，温度一般为371。为保证浊度和显色试验的有效性，应预先进行标准曲线的可靠性试验以及供试品溶液的干扰试验。浊度法浊度法系

25、利用检测鲎试剂与内毒素反响过程过程中浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法是依据反响混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时的浊度吸光度和透光率之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。动态浊度法是检测反响混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反响时间，或是检测浊度增加速度的方法。OD值t010Eu/ml1Eu/ml显色基质法显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反响过程中产生的凝固酶使特定底物释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法。终点显色法是依据反响混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时释放出的呈色团的量之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。动态显色法是检测反响混合物的色度到达某一

26、预先设定的吸光度所需要的反响时间，或是检测色度增长速度的方法。标准曲线的可靠性试验 当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检测结果的改变时，需进行标准曲线的可靠性实验。用标准内毒素配成溶液，制成至少3个浓度的稀释液相邻浓度间稀释倍数不得大于10，最低浓度不得低于所用鲎试剂的标示检测限。每一稀释步骤的混匀时间同凝胶法，每一浓度至少做3支平行管。同时要求做2支阴性对照。当阴性对照的反响时间大于标准曲线最低浓度的反响时间，将全部数据进行线性回归分析。根据线性回归分析，标准曲线的相关系数r的绝对值应该大于或等于0.980，试验方有效。否那么须重新试验。十倍稀释标准曲线优点：检测范围宽，线性好

27、，易操作。缺点：相对于对倍稀释的标准曲线数据准确性 稍差。对倍稀释标准曲线例：把内毒素标准品稀释为0.5 EU/ml ，0.25EU/ml ，0.125 EU/ml ，0.0625EU/ml，0.03125 EU/ml 五个浓度。优点：数据准确性好。缺点：曲线范围窄，线性稍差，初学者不易于操作。推荐标准曲线例：把内毒素标准品稀释为2 EU/ml ，0.5EU/ml ，0.125 EU/ml ，0.03125 EU/ml 四个浓度。优点：曲线范围适中，线性好，最低浓度与凝胶法最高灵敏度一致，数据准确性好。缺点：某些样品不适用，如血液。干扰试验 1选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度设为m。

28、作为供试品干扰实验中添加的内毒素浓度。按表4制备溶液A、B、C和D。表4 光度测定法干扰试验的制备注: A为稀释倍数不超过MVD的供试品溶液。B为参加标准曲线中点或靠近中点的一个浓度内毒素的，且与溶液A有相同稀释倍数的供试品溶液。C为如“标准曲线的可靠性试验项下描述的，用于制备标准曲线的标准内毒素溶液。 D为阴性对照干扰试验 2按所得线性回归方程分别计算供试品溶液和含标准内毒素的供试品溶液的内毒素含量Ct和Cs，再按下式计算该试验条件下的回收率R。 R=(CS-Ct)/m100%当内毒素的回收率在50%-200%之间，那么认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。当内毒素的回收率不在指定的范

29、围时，须按“凝胶法干扰试验中的方法去除干扰因素。并重复干扰试验来验证处理的有效性。当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，需重新进行干扰实验。去除干扰因素的方法可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其他适宜的方法如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。为确保所选择的处理方法能有效的排除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。检查法按“光度法的干扰试验中的操作步骤进行检测。试验必须符合以下三个条件方为有效：1标曲溶液的结果要符合“标准曲线的可靠性试验中的要求。2用样品阳性溶液中的内毒素浓度减去阳

30、性溶液中的内毒素浓度后，计算出的内毒素的回收率要在50%-200%的范围内。3阴性对照的反响时间应大于标准曲线最低浓度的反响时间。结果判断 假设供试品溶液所有平行管的平均内毒素浓度乘以稀释倍数后，小于规定的内毒素限值，判供试品符合规定。假设大于或等于规定的内毒素限值，判供试品不符合规定。光度法细菌内毒素检测实验一、样品限值确实定1药典规定品种：查阅2005版药典，找出其细菌内毒素限值。2非药典规定品种：通过计算得出限值，计算公式参照2005版药典L=K/M，式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U活性单位表示；注射剂平安性检查法应用指导原那么修订稿对热原检查或细菌内毒

31、素检查设定限值有以下说明：热原检查或细菌内毒素检查的限值根据临床人每公斤体重每小时最大用药剂量计算临床最大用药剂量应采用国内外权威资料作为依据，如药典临床用药须知。计算公式见细菌内毒素检查法，由于药品生产和临床适应症的不同如抗感染、抗肿瘤、心血管药等重症用药、儿童和老人用药、联合用药，可适当调整限值提高至计算限值的23倍，以保证平安用药。细菌内毒素限值一般以EU/mg、EU/U表示，复方制剂以EU/ml表示。大输液热原检查剂量为10ml/kg、细菌内毒素限值一般为0.5EU/ml。最大有效稀释倍数MVD确实定最大有效稀释倍数是指在实验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下

32、进行内毒素限值的检测。用以下公式来确定MVD：MVD=CL/式中L为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，那么C等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位需为mg/ml或U/ml；如供试品为注射用无菌粉末或原料药，那么MVD取1，可计算供试品的最小稀释浓度C=/L。为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度EU/ml，或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。例：注射用头孢噻肟钠(1.0g/支)L=0.05EU/mg,加5ml细菌内毒素检查用水溶解,C=200mg/ml, =0.03125EU/ml ,MVD=CL/=2000.05/0.03125=320(倍)。干扰实验供试品稀释倍数确实定在最大有效稀释倍数MVD范围内选择两到三个稀释倍数，如上，MVD=CL/=2000.05/0.03125=320(倍)，可选择20倍、40倍、80倍。根据实验经验，样品稀释倍数不要等于或接近最大稀释倍数，只有这样才能保证实验结果判断准确，保证用药平安。标准品稀释取国家