医学微生物学课件：14-肝炎病毒

1、肝炎病毒 第22章肝炎病毒的种类甲型肝炎病毒（hepatitis A virus，HAV）乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）丁型肝炎病毒（hepatitis D virus，HDV）戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）核酸包膜传播途径慢性带毒检测病毒抗原HAVRNA无粪口途径 少 粪便HBVDNA有非胃肠道、母-婴 多 血液HCVRNA有非胃肠道 多 血液HDVRNA有非胃肠道、母-婴 多 血液HEVRNA有粪口途径 少 几种肝炎病毒的比较一、甲型肝炎病毒Hepatitis A viruse

2、s 1. 球形,单正链RNA病毒, 直径27-30nm，无包膜，二十面体立体对称。（一）生物学特性甲型肝炎病毒结构示意图HAV, EM电镜下两种颗粒同时存在： 实心-有感染性，有抗原性 空心-无感染性，有抗原性2. HAV抗原性稳定，只有一个血清型。3. 培养特性易感动物：黑猩猩、猕猴、红面猴。组织培养：狨猴原代肝细胞 恒河猴胚肾细胞株 人胚肺二倍体细胞株 人肝癌细胞株病毒增殖缓慢，不引起明显的细胞病变强。100 5分钟 失去传染性对甲醛、过氧乙酸、对氯处理敏感。4. 抵抗力（二）致病性与免疫性传染源及传播途径：传染源：甲肝病人、HAV隐性感染者传播途径：粪-口途径。HAV的致病性粪口途径传播

3、口咽部或唾液腺中早期增殖肠道与局部淋巴结中大量增殖入血并形成病毒血症肝脏为最终靶器官（病毒直接损伤或免疫病理作用）通过胆汁随粪便排出体外常见症状流感样症状厌食恶心黄疸（眼部及皮肤呈黄色）尿黄腹痛乏力3. 免疫性：病后或隐性感染后获得牢固的免疫力。2. 肝炎细胞损伤机制：免疫损伤为主（三）微生物学检查抗体检测: -RIA/ELISA抗-HAV IgM-早期诊断抗-HAV IgG-回顾诊断/流行病学调查抗原检测: 粪便IEM/ELISA/核酸杂交（四）特异性预防一般预防主动免疫国产: 减毒活疫苗（H2株） 灭活疫苗已研制成功美国: 灭活疫苗被动免疫胎盘球蛋白/丙种球蛋白 据估计全世界HBV感染者及

4、携带者已超过5亿，非洲西北部和南部，东南亚包括我国为HBV的高发区，HBV携带者超过10%。我国HBV感染者及携带者已超过1.2亿。二、乙型肝炎病毒（一）生物学性状1. 形态结构（ Hepatitis B virus ）电镜下病人血清中 有三种病毒颗粒大球形颗粒（Dane颗粒）小球形颗粒管形颗粒Dane颗粒核心：双股DNADNA聚合酶内衣壳： f 27nm，20面体，（HBcAg、HBeAg）外衣壳： 脂质双层 蛋白质（HBsAg）（2）小球形颗粒：球形，直径22nm。（3）管形颗粒：直径 22nm 100500nm。外衣壳成分，无传染性有HBsAg（1）大球形颗粒（Dane颗粒）：球形， 直

5、径42nm。Dane颗粒是完整的、有传染性的HBV颗粒。2. 基因结构双链非闭合环状DNA含3.2kb短链（+）：不含ORF长链（）：含4个ORF （S、C、P和X区）HBV基因结构示意图C 区X 区S 区P 区乙型肝炎病毒基因结构模式正链负链重复序列S区： S基因 、PreS1. 2基因 HBsAg PreS1. 2C区：C基因 、 Pre-C基因 HBcAg Pre-C 蛋白经切割HBeAgP区：编码DNA多聚酶（逆转录酶功能）X区：编码x蛋白（HBxAg）激活原癌基因，与肝癌发生发展有关ORF基因编码抗原基复 制 方 式 1、HBV吸附并进入肝细胞后，脱去衣壳，病毒的核酸进入肝细胞核内。

6、2、病毒正股DNA在DNA多聚酶作用下，以负股DNA为模板，延长以修补裂隙区，使形成完整的环状双股DNA。 HBV 复 制 周 期3、双股DNA继而形成超螺旋环状DNA，在细胞RNA多聚酶作用下,以负股DNA转录形成二种不同长短的RNA，分别为2.1kbRNA和3.5kbRNA。前者作为信使RNA，转译病毒的外衣壳蛋白，后者除作为转译病毒内衣壳蛋白的信使RNA外，还作为HBV DNA复制的模板，故亦称为前基因组。4、病毒的前基因组，蛋白引物及DNA多聚酶一起进入组装好的病毒内衣壳中。5、在病毒DNA多聚酶的逆转录酶等活性作用下，自DR区开始，以前基因组RNA为模板，逆转录全长的HBV DNA负

7、股。在负股DNA合成过程中，前基因组被RNA酶降解而消失。 6、病毒以新合成的负股DNA为模板，也自DR区开始复制互补的正股DNA。 7、复制中的正股DNA（长短不等）与完整的负股DNA包装于内衣壳中并包有外衣壳成为病毒体，从细胞浆释放至细胞外，因此HBV的 DNA呈双股，但又有单股区。 由于HBV复制过程有逆转录过程，与逆转录病毒相似。病毒的DNA可整合于靶细胞的染色体中。已知整合区约有50%以上为负股的5，末端区。此外，S基因可通过2.1kbRNA为信使RNA而转译HBsAg，故在部分HBV者中，虽无病毒复制，但都长期产生HBsAg，HBsAg产生的量可远远超过病毒体数。 DNA RNA

8、DNA 转录逆转录 HBV的复制方式很特殊,在复制过程中有逆转录过程,与逆转录病毒相似,逆转录后的DNA可整合至靶细胞的染色体 3、HBV的复制复制方式HBV的DNAS+延长修补DNA聚合酶完整双股环状DNA超螺旋环状DNA 以DNA-为模板RNA聚合酶转录两种RNA短mRNA转译外衣壳蛋白不同步、过剩结合成Dane长mRNA转译内衣壳蛋白DNA复制模板DNA聚合酶逆转录活性子代L-模板复制子代S+结合结合超螺旋DNA转录2.1kbRNA3.5kbRNA 转译外衣壳蛋白 转译内衣壳蛋白及子代DNA逆转录复制逆转录的DNA可整合至细胞染色体HBV复制周期示意图 表面抗原 HBsAg外衣壳抗原 前

9、S1抗原 前S2抗原内衣壳抗原 核心抗原 HBcAg e抗原 HBeAg3. 抗原组成三种颗粒上均有大量存在于患者血中，是HBV感染的主要标志具有抗原性（弱），其抗体HBsAb为中和抗体，建立免疫标志是制备疫苗的最主要成分（1）HBsAg（表面抗原）存在于Dane颗粒上血中不能检出（仅存在于肝细胞内）抗原性强，其抗体HBsAb无中和作用 IgM提示HBV正在复制 IgG持续时间长（2）HBcAg （核心抗原）：存在于内衣壳，为可溶性蛋白，可游离存在于血中 与Dane颗粒出现平行其消长 与DNA聚合酶消长一致有抗原性，抗体HBeAb 无中和作用与肝细胞表面HBeAg结合，破坏受感染细胞，建立部分

10、免疫力Pre-C突变株，不被HBeAb识别故作为HBV复制及血清具有强感染性的标志 （3）HBeAg（e抗原）：HBeAg3）HBeAg可刺激机体产生抗体，此抗体对HBV感染有一定的保护作用。但变异的毒株在PreC区出现终止密码子，因不产生HBeAg，不能被抗-HBe及相应的细胞免疫所识别而清除。变异株可在抗-HBe阳性的情况下仍大量增殖。 4. 动物模型及细胞培养（1）敏感动物：黑猩猩鸭肝炎病毒鸭土拨鼠肝炎病毒土拨鼠地松鼠肝炎病毒地松鼠（2）动物模型动物模型与细胞培养动物模型黑猩猩细胞培养不成功4. 动物模型及细胞培养煮沸100,10min高压灭菌121, 20min干烤160,2h0.5%

11、过氧乙酸、3%漂白粉浸泡30min-200C20年、370C7天仍有传染性。强!5. 抵抗力（二）致病性和免疫性1. 传染源2. 传播途径乙肝病人、 HBsAg 无症状携带者。（1）血液、血制品传播（2）母-婴传播（3）接触传播：性接触、密切接触 0.00004ml含病毒血液足以使人感染。HBsAg阳性患者血液中HBsAg浓度可达10121014/ml。传播方式1、输血传播2、性接触传播3、垂直传播4、口-口传播（唾液检测HBV-DNA）3. 致病机制HBV感染的肝细胞（1）细胞免疫HBV机体致敏T细胞攻击（2）自身免疫损伤HBV持续感染肝特异性脂蛋白（LSP）暴露自身抗原自身免疫应答肝细胞损

12、伤（3）型超敏反应HBV抗原相应抗体中等大小免疫复合物炎症损伤沉积肝肝外脏器（肾、关节） （4）免疫耐受状态：无反应状态 无症状携带者 免疫性与致病性的关系 （1）免疫功能正常：HBV清除 隐性感染或急性肝炎 （2）免疫功能低下： HBV持续存在 慢性肝炎，可转为原发性肝癌 （3）免疫功能过强：肝细胞大量坏死 重症肝炎，肝昏迷等 4. HBV与原发性肝癌（1）动物模型HBV感染与PHC有密切关系.土拨鼠肝炎病毒地松鼠肝炎病毒土拨鼠地松鼠肝癌（2）流行病学研究HBV感染率高的地区，PHC发病率高80%的肝癌病人有HBV感染的证据HBV携带者发生肝癌的危险性为非HBV携带者的217倍（3）实验室研

13、究肝癌组织中发现有HBV DNA的整合HBxAg具有激活肝细胞内的原癌基因（1）诊断： HBsAg (+)、 HBeAg(+)、抗-HBc（+） 称俗大三阳 可确诊为乙肝。 （三）、微生物学检查1、血清学检查乙肝三系的Ag、Ab(二对半抗原抗体系统) 病毒抗原抗体系统检测结果分析HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc结果分析+-HBV感染或无症状携带者+-急性或慢性乙型肝炎，或无症状携带者+-+急性或慢性乙型肝炎（传染性强，“大三阳”）+-+急性感染趋向恢复（“小三阳”）-+既往感染恢复期-+-既往感染恢复期-+既往感染或“窗口期”-+-既往感染或接种过疫苗 HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc（+） 持续6个月以上，-慢肝。 HBsAg、HBeAg转阴-恢复