电泳应用--SEBIAppt课件

1、电泳技术在临床检验中的运用.背景简介电泳：在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极挪动的景象electrophoresis电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分别样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、外形等性质的差别，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进展分别、鉴定或提纯的技术.开展历程1809年俄国科学家列伊斯首先发现电泳景象1937年瑞典科学家Tiselius建立了界面电泳技术 ，并初次证明了血清是由白蛋白及、球蛋白组成的因此获得1948年诺贝尔化学奖1950年后，区带电泳从开展到成熟1980年以来，毛细管电泳逐渐遭到注重.常用的电泳技术醋酸纤维素薄膜电泳凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳

2、: 琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质.聚丙烯酰胺凝胶电泳 : 最常用的定性分析蛋白质的电泳方法，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量.毛细管电泳 :经典电泳技术和现代微柱分别相结合的产物.毛细管电泳(Capillary Electrophoresis) CE是经典电泳技术和现代微柱分别相结合的产物 “CE统指以高压电场为驱动力, 以毛细管为分别通道, 根据样品中各组分之间电泳速度及分配行为上的差别而实现分别的一类液相分别技术。.检测器200nm紫外光毛细管图象处置.毛细管电泳所用的石英毛细管柱，在pH3的情况下，其内外表带负电，和缓冲液接触时构成双电层，在高压电场的作用下，构成

3、双电层，一侧的缓冲液由于带正电荷而向负极方向挪动构成电渗流。同时，在缓冲液中，带电粒子在电场的作用下，以不同的速度向其所带电荷极性相反方向挪动，构成电泳，电泳流速度即电泳淌度。带电粒子在毛细管缓冲液中的迁移速度等于电泳淌度和电渗流的矢量和。各种粒子由于所带电荷多少、质量、体积以及外形不同等要素引起迁移速度不同而实现分别。 毛细管电泳 .+飞驰列车上的反向赛跑-.影响电泳分别的主要要素 实践上影响电泳的要素 介质(种类, 宽度等) 溶剂(种类,离子强度,PH) 电压 电泳时间 点样技术 染色剂 气泡的影响.加样梳.电泳技术的医学运用 蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手段，可全面、准确描画出患者蛋

4、白质的全貌。对疾病的早期诊断，疗效察看及预后判别具有非常重要的临床价值。.蛋白的电泳检测 根据运用的染料或者是底物的不同，我们可以检测到不同类型的蛋白: 血清蛋白 脂蛋白 (运送脂类) 各种酶类血红蛋白.电泳技术在临检中的运用：急、慢性炎症造血系统疾病：多发性骨髓瘤、肾脏疾病肝脏疾病中枢神经系统疾病：多发性硬化症遗传性疾病：地中海贫血代谢性疾病：糖尿病心血管疾病：心梗、动脉粥样硬化恶性肿瘤.正确解释电泳结果有助于临床疾病判别的参考.血清蛋白电泳.免疫球蛋白C3补体Alpha-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白Alpha-1 酸性糖蛋白电泳条带的鉴定 Alpha-2 巨球蛋白血液结合素白蛋白G

5、ammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1.正常血清标本. 含有单克隆免疫球蛋白的血清标本.血清蛋白电泳的目的是什么？检测异常 :含量的变化 : 条带中蛋白含量的添加或减少性质的变化 : 异常条带的出现.临床意义将电泳作为常规检测之一，有助于我们对以下疾病的筛查 :炎症 营养不良肺气肿.临床意义对异常条带的筛查,有助于我们检测以下疾病: 骨髓瘤 Waldenstrom巨球蛋白血症细菌和病毒感染在这些情况下, 必需求做其他辅助测试, 比如说免疫固定, 运用不同类型的抗血清对异常蛋白进展检测. (对于后期治疗有很重要的指点意义) .什么情况下必需进展电泳检测？血液沉降速度发生异常

6、变化出现恶性疾病征兆在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋白出现大量异常添加. 双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现附属条带能够是由以下缘由呵斥 :- 遗传性双白蛋白血症- 暂时性的双白蛋白血症能够是由于药物刺 激导致的 - 急性胰腺炎导致的双白蛋白血症 : 大量的 胰酶的出现可以导致白蛋白降解Albumin.双白蛋白血症gba2a1Alb. 在以下情况下白蛋白会出现下降 :- 肾病综合症, 蛋白流失, 胃肠病: 检查尿蛋白- 淋巴细胞增生综合征- 营养不良- 肝脏功能不全- 慢性炎症- 严重烧伤- 血液稀释. 在以下情况中白蛋白会出现添加:- 脱水病症- 血液浓缩- 白蛋白注射.

7、Alpha 1 globulins 将会在以下情况下出现下降:- 蛋白流失- 肝功能不全- 先天性抗胰蛋白酶缺乏症 出现两个条带:- 抗胰蛋白酶的不同基因型 出现添加:- 炎症病症.Alpha 1-酸性糖蛋白 : AAG是主要的急性时相反响蛋白，在急性炎症时增高，显然与免疫防御功能有关明。 AAG的测定目前主要作为急性时相反响的目的，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。 .Heterozygous phenotype of A1AT .Alpha 2 globulins 以下情况中出现下降:- 肝功能不全- 血管内溶血. 出现两个条带:- 溶血的标本

8、(haptoglobin-hemoglobin complex)- 出现特殊表型的结合珠蛋白- 出现迁移率接近正极端的单克隆免疫球蛋白 . 出现两个条带:- 溶血的标本 (haptoglobin-hemoglobin complex)- 出现特殊表型的结合珠蛋白- 出现迁移率接近正极端的单克隆免疫球蛋白 Alpha 2条带在电泳图谱中,是一个很特殊的条带. 由于这一条带中含有五种蛋白: HDL, Haptoglobin, Alpha 2 Macroglobulin, Ceruloplasmin and Gc globulin. 由于结合珠蛋白有不同的基因表现型, 添加了这一条带的复杂程度. 结

9、合珠蛋白非常接近Alpha 1条带; 出现溶血时结合珠蛋白的迁移率会发生改动. 同时,由于HDL的含量或者是存放过久的标本, HDL的迁移速度能够会更快.Hemolysed sample.急性炎症及应激型 主要特征： Alb减少或正常，1、2-球蛋白增高，-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显添加。病理生理： Alb下降主要是由于蛋白分解亢进所致,1和2-球蛋白添加与急性时相反响蛋白1糖蛋白添加有关。.急性时相反响. 以下情况下Alpha2区域会出现添加景象: - 炎症病症- 肾病综合征- 出现游离轻链 .Nephrotic syndrome.肾病综合征.Beta globulins 在

10、以下情况下会出现下降 :- 肝功能不全- C3 长期缺乏 或者 C3 代谢过快 (同样会出如今存放过久的标本中,C3 失活, 这时C3补领会被分成四部分: 1 between a2 and b, 1 on b1, 1 on b2 and 1 on g) .在以下情况下会出现两个条带:- 长期存放的标本或者是高胆固醇的标本, LDL 有不同的迁移率; 从而导致LDL电泳是偏移Beta位置 . Beta球蛋白在以下情况下会出现添加景象:- Biliary obstruction胆管阻塞- 肾病综合征- 肝硬化- 缺铁性贫血- 血球蛋白异常- 高脂蛋白血症- 大量溶血 .Beta lipoprote

11、ins.Beta gamma bloc in alcohol cirrhosis.Free light chain disease.Gamma 球蛋白区带免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，主要存在于生物体血液、组织液和外分泌液中，是检查机体体液免疫功能的一项重要目的。 人类的免疫球蛋白分为五类，即lgG、lgA、lgM、IgD和lgE，其中IgD和IgE含量很低，故我们常规所测定的Ig主要为lgG、lgA、IgM三项。 . 血清蛋白电泳是 M蛋白Monoclonal Protein 多克隆 polyclonal Protein) 寡克隆 Oligoclonal Protein) 的首选检测

12、工程.Gamma globulins 在以下情况中会出现下降景象: - 部分的或全部的免疫缺陷- 免疫抑制治疗- 游离轻链病或非分泌型骨髓瘤 常见于新生儿生理性低球蛋白血症、先天性浆细胞缺陷或浆细胞不能产生免疫球蛋白.Hypogammaglobulinemia. 多克隆免疫球蛋白的添加:- 炎症- 肝硬化- 亚急性和慢性感染 检测到其他条带- 单克隆免疫球蛋白- 寡克隆免疫球蛋白.血清蛋白021216狼疮病血清蛋白030127酒精肝B-r桥.与以下各类疾病相关的寡克隆免疫球蛋白(多个条带) :- 本身免疫病- 先天性免疫缺陷症- 病毒感染 (C Hepatitis, HIV disease,

13、CMV巨细胞病毒, EBV,)- 免疫抑制治疗 .Oligoclonal pattern.M蛋白疾病(Monoclonal gammapathies, MG)是由于单一克隆浆细胞无限增殖产生的均一单克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所导致的一组疾病。M蛋白疾病的“M含义是Myeloma, Macroglobulinemia, Malignant lymphoma和Monoclonal Gammapathies均以“M开头. M蛋白在电泳上表现为高而狭窄的尖峰.意义未明的单克隆免疫球蛋白疾病: benign MC在法国, 在对献血者进展检测时,会检测到0,15% 比例的单克隆免疫

14、球蛋白标本 在老龄人群中检测到的频率更高 (80岁以上人群). 在对60到99岁人群的检测显示,出现Ig的比例从2,6%上升至19,2%(平均数= 5%) . MGUS.特征: - 未出现临床和影像学特征- 未出现不良反响, 未检测到血钙升高,也未出现肾功 能衰竭- 未见骨髓瘤的临床特征- 单克隆免疫球蛋白 20g/l - 其他免疫球蛋白都是正常的,同时在患者尿液中未检测到本周氏蛋白- 单克隆免疫球蛋白的浓度随着时间的推移未发生增 加景象- 其他的免疫球蛋白的浓度也未随时间推移而出现下 降 在20%的情况中, MGUS 将会转化成恶性疾病 (6-10 years).Kyle report显示,

15、经过对4名含有MGUS的患者的 2035(average : 22 years)年的跟踪监测发现, 24%的患者最终演化成恶性的淋巴细胞增生症(multiple myeloma, macroglobulinemia, amyloidosis,).从检测到单克隆免疫球蛋白,直到作出多发性骨髓瘤的诊断报告,这段时间是不定的,从2-29年(平均是10年左右).大量报告显示,在以下情况中,开展成为恶性淋巴细胞增生疾病的能够性很小 :- 单克隆免疫球蛋白:IgG 15 g/L IgA 10 g/L IgM 5 g/L- 尿蛋白中未出现本周氏蛋白- 其他类型的免疫球蛋白未出现下降.寡克隆免疫球蛋白 由于药

16、物缘由导致的免疫缺陷:- 在器官或者骨移植后 - 本身免疫病 由于病毒感染导致的免疫缺陷:- Viral : HIV (63%), EBV, CMV, viral hepatitis,- Bacterial,parasitic infections: (脑膜炎, 脑炎,).巨球蛋白血症Waldenstrom氏患者血中存在大量单克隆IgM，血粘度明显增多，骨骼损害不常见，疾病开展类似淋巴瘤。.常所致。血中出现大量无免疫功能的Ig片段重链。 重链病是免疫球蛋白的构造异常见有三型，该病发病率极低。.表1 646例M蛋白类型分类型别 例数 %IgG型骨髓瘤 205 31.73IgA型骨髓瘤 93 14

17、.40IgM型骨髓瘤 56 8.67IgD型骨髓瘤 12 1.86重链病 5 0.77轻链病 214 33.13半分子病 1 0.157S IgM 2 0.31BMG 49 7.59双M蛋白病 8 1.24.MM是造血系统的恶性肿瘤，占整个恶性肿瘤的1%。 常见于中、老年人(50-70岁居多，40岁以下少见)。以往对此病认识缺乏，漏诊、误诊可到达70%以上。随着寿命的延伸对此病认识的提高病例数显著添加。 美国MM的发病率仅次于非霍奇金淋巴瘤高于急性白血病位居血液肿瘤的第二位。多发性骨髓瘤Multiple Myeloma,MM. 骨痛、骨骼肿块与病理性骨折,骨质疏松和溶骨景象 贫血 免疫功能低下

18、,反复感染 肾脏损害 高钙、高粘血浆相对黏度6以上、 高尿酸血症表现 MM的临床表现多样化，经常因此就诊于骨科、肾脏内科等，延误诊治。 MM临床表现特点.多发性骨髓瘤的免疫学特征:血中出现M蛋白,正常Ig程度明显减低尿中出现M蛋白和轻链蛋白(BJP)骨髓中浆细胞明显添加无免疫活性Ig导致免疫功能低下.多发性骨髓瘤病人溶骨报告.多发性骨髓瘤病人溶骨报告(骨盆).多发性骨髓瘤病人溶骨报告(颅骨). MM MGUS 骨髓浆细胞 增多15% 15% 电泳中M蛋白程度 IgG30g/L IgG30g/L IgA10g/L IgA10g/L 尿电泳、轻链 有 本周蛋白1.0g/L/24h 溶骨损害 有 无 病症体征 有 无MGUS与MM的鉴别要点.含有纤维蛋白原的血清电泳曲线 gba2a1Alb.血清蛋白质的图谱类型 总蛋白