旋覆花中化学成分及其活性研究

1、旋覆花中化学成分及其活性研究旋覆花中化学成分及其活性研究?中国药典?2022年版收录的旋覆花为菊科植物旋覆花属旋覆花InulajapniaThunb.或欧亚旋覆花I.britanniaL.的枯燥头状花序，作为传统的中草药主要分布在欧洲、非洲及亚洲的中国、韩国和日本1-2，以地中海地区为主，在我国有20余种。目前，国内外学者报道了旋覆花中富含甾醇、倍半萜及黄酮类化合物3，药理研究结果说明，旋覆花属植物在抗肿瘤4-6、抗炎、抗血脂7和护肝、及预防和治疗糖尿病7等方面都具有很好的生物活性。本文对河南产旋覆花I.japnia开展了活性化学成分研究本文由论文联盟.Ll.搜集整理，从中别离得到15个化合物

2、，利用有机波谱技术鉴定其化学构造，分别为二氢芥子醇1，3S，5R，6S，7E-5，6-epxy-3-hydrxy-7-egastigen-9-ne2，6R，7E-9-hydrxy-4，7-egastigadien-3-ne3，阿里二醇4，蒲公英醇乙酸酯5，8，9，10-三羟基百里香酚6，花旗松素7，木犀草素8，泽兰黄酮9，泽兰黄醇素10，菠叶素11，槲皮素12，对羟基桂皮酸13，咖啡酸14，咖啡酸乙酯15。进一步考察了以上化学成分对肥大细胞LT4生成、脱颗粒及巨噬细胞N释放的影响。1材料BrukerAV400核磁共振仪TS内标；液质联用色谱仪：Alliane2695QuattrirTESIat

3、ers；半制备高效液相色谱仪：日本分光公司JAS，PU-2089泵，RI-2031及UV-2075检测器；制备HPL色谱柱：GP凝胶浸透色谱柱Shdex，AsahipakGS-20G20500，Y-PakDS-ASH-343-520250，Y-PakSIL-0620250，5；凝胶柱色谱TypearlH-40Tsh；日本HitahiUV-3310型紫外-可见分光光度计；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂消费，所用试剂均为分析纯；氘代试剂购自美国Siga-Aldrih公司。小鼠单核巨噬细胞RA264.7细胞韩国细胞株银行；LT4ELISA试剂盒美国ayanheial公司；KL加拿大STEE

4、LLTehnlgies公司；LPS美国Siga-Aldrih公司；RPI-1640，DE和胎牛血清FBS美国Hylne公司。旋覆花于2022年采集于河南，经天津医科大学药学院周晔教授鉴定为I.japnia，标本D20220331存放于天津医科大学药学院。2方法2.1提取与别离旋覆花枯燥头状花序8kg，用75%乙醇回流提取3次，每次2h，提取液减压浓缩，提取物672g以水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚提取物36g、乙酸乙酯提取物117g、正丁醇提取物266g。旋覆花乙酸乙酯提取物117g，以硅胶柱色谱别离，分别用石油醚-乙酸乙酯41，31，21，11，12，乙酸乙酯，乙

5、酸乙酯-甲醇955，91，82梯度洗脱，TL合并类似组分，得到组分XFH0101-0128。组分XFH0112经过凝胶TypearlH-40柱色谱别离得到5个组分12.112.5。组分12.3经制备高效液相色谱DS别离甲醇-水，73和制备凝胶浸透色谱GPeH纯化，得到化合物17.0g，27.5g，314.0g。组分12.4进一步经制备高效液相DS甲醇-水，64纯化，得到化合物1013.5g。XHF0115经过凝胶TypearlH-40柱色谱别离得到6个组分15.115.6。组分15.3和15.4分别经制备高效液相色谱DS-A，甲醇-水，64；GP，甲醇别离纯化，得到化合物69.4g，1155.

6、5g。XFH0111经过凝胶TypearlH-40柱色谱别离，经制备高效液相色谱GP，甲醇纯化得到化合物713.4g，89.1g，938.7g，1435.3g。组分XFH01142.8g以凝胶TypearlH-40柱色谱别离，进一步重结晶得到化合物12300.0g。XFH01092.8g经过凝胶TypearlH-40柱色谱别离，进一步经制备高效液相色谱DS甲醇-水，82和GP甲醇别离纯化得到化合物43.0g，58.6g，137.0g。XFH01132.2g经过凝胶TypearlH-40柱色谱别离，进一步经制备高效液相色谱GP别离得到化合物155.0g。2.2N生成的测定RA264.7细胞培养于

7、含10%FBS的DE培养基。取对数生长期的细胞3105细胞/孔接种于24孔板中，待细胞贴壁后参加不同浓度根据TT法挑选的无细胞毒剂量各种单体化合物孵育1h，再参加终浓度为200gL-1的LPS刺激24h。Griess法8测定上清中N的含量。2.3LT4含量和肥大细胞脱颗粒的测定来源于BALB/小鼠骨髓的肥大细胞bnearr-derivedastells；Bs的制备按文献9方法，Bs培养于含白介素-3IL-3和10%FBS的RPI1640培养基。Bs2105细胞/孔接种于96孔板中，参加不同浓度根据TT法挑选的无细胞毒剂量各种单体化合物孵育1h，再用终浓度为50gL-1的KL刺激15in后搜集上

8、清液。采用ELISA方法检测上清中LT4的含量；采用分光光度分析法定量-hexsainidase-HEX底物的水解作用，检测-HEX的释放。3构造鉴定化合物1无色油状物；ESI-S/z211-H-；1H-NRDl3，400Hz：6.431H，s，H-2，6，2.652H，t，J=7.6Hz，H-7，1.882H，H-8，3.692H，t，J=6.4Hz，H-9，3.886H，s，-H3；13-NRDl3，100Hz：133.0-1，105.0-2，6，147.0-3，5，133.0-4，32.3-7，34.5-8，62.3-9，56.3-H3。以上数据与文献10报道二氢芥子醇的数据根本一致。化

9、合物2无色油状物；Ei-S/z224+；1H-NRDl3，400Hz：7.031H，d，J=15.6Hz，H-7，6.281H，d，J=15.6Hz，H-8，3.911H，H-3，2.283H，s，H-10，1.196H，s，H-11，12，1.073H，s，H-13；13-NRDl3，100Hz：35.1-1，40.6-2，64.0-3，46.6-4，67.3-5，69.5-6，142.4-7，132.6-8，197.5-9，28.3-10，29.3-11，25.0-12，19.9-13。以上数据与文献11报道3S，5R，6S，7E-5，6-epxy-3-hydrxy-7-egastigen

10、-9-ne的数据根本一致。化合物3无色油状物；EI-S/z208+；1H-NRDl3，400Hz：5.931H，s，H-4，5.681H，dd，J=15.2，6.0Hz，H-8，5.531H，J=15.2，8.4Hz，H-7，4.351H，H-9，2.521H，d，J=9.2Hz，H-6，2.331H，d，J=16.8Hz，H-2a，2.071H，d，J=16.8Hz，H-2b，1.903H，d，J=1.2Hz，1.293H，d，J=6.4Hz，H-10，1.033H，s，H-11，0.983H，s，H-12；13-NRDl3，100Hz：36.2-1，47.4-2，199.3-3，125.8

11、-4，162.0-5，55.4-6，126.6-7，138.6-8，68.3-9，23.5-10，27.1-11，27.9-12，23.5-13。以上数据与文献11报道6R，7E-9-hydrxy-4，7-egastigadien-3-ne的数据根本一致。化合物4白色无定形粉末；EI-S/z442+；1H-NRDl3，400Hz：4.651H，d，J=1.9Hz，H-30a，4.631H，d，J=1.9Hz，H-30b，3.391H，dd，J=11.6，4.6Hz，H-3，3.211H，dd，J=11.3，5.0Hz，H-16；13-NRDl3，100Hz：38.8-1，27.4-2，79.0

12、-3，38.9-4，55.4-5，18.3-6，34.0-7，40.0-8，50.0-9，37.1-10，21.4-11，25.9-12，38.8-13，42.3-14，36.1-15，77.3-16，40.9-17，47.7-18，39.0-19，153.6-20，25.0-21，35.3-22，28.0-23，15.3-24，16.3-25，16.3-26，15.9-27，12.8-28，25.3-29，107.4-30。以上数据与文献12报道阿里二醇的数据根本一致。化合物5白色无定形粉末；Ei-S/z468+；1H-NRDl3，400Hz：1.026H，s，H-26，29，0.933H，

13、s，H-27，0.876H，s，25-H3，0.856H，s，H-23，24；0.843H，s，H-28；2.053H，s，H3，4.481H，dd，J=10.4，6.0Hz，H-3，4.621H，brs，H-30a，4.601H，brs，H-30b；13-NRDl3，100Hz：38.4-1，23.7-2，81.0-3，37.8-4，55.4-5，18.2-6，34.5-7，40.9-8，50.4-9，37.0-10，21.5-11，26.1-12，39.1-13，42.0-14，26.6-15，38.3-16，34.5-17，48.6-18，39.4-19，154.6-20，25.6-21

14、，38.9-22，27.9-23，16.4-24，16.5-25，15.9-26，14.7-27，19.5-28，25.5-29，107.1-30，171.0-1，21.4-2。以上数据与文献13报道蒲公英醇乙酸酯的数据根本一致。化合物6无色油状物；ESI-S/z199+H+；1H-NRDl3，400Hz：7.161H，d，J=8.0Hz，H-5，6.541H，d，J=8.0Hz，H-6，6.511H，s，H-2，2.183H，s，H-7，3.674H，H-9，10；13-NRDl3，100Hz：156.0-3，137.5-1，128.2-5，125.2-4，119.7-6，117.3-2，2

15、1.0-7，65.2-9，-10，78.9-8。以上数据与文献14报道8，9，10-三羟基百里香酚的数据根本一致。化合物7浅黄色粉末；ESI-S/z305+H+；1H-NRDS-d6，400Hz：11.911H，brs，5-H，10.861H，brs，7-H，9.021H，brs，3-H，4.971H，d，J=11.2Hz，H-2，4.501H，brd，J=11.2Hz，H-3，6.753H，H-2，5，6，5.911H，d，J=1.6Hz，H-8，5.861H，d，J=1.6Hz，H-6；13-NRDS-d6，100Hz：83.0-2，71.5-3，197.7-4，163.3-5，95.9-

16、6，166.7-7，94.9-8，162.5-9，100.4-10，128.0-1，115.3-2，144.9-3，145.7-4，115.1-5，119.4-6。以上数据与文献15报道花旗松素的数据根本一致。化合物8黄色无定形粉末；ESI-S/z309+Na+；1H-NRDS-d6，400Hz：12.981H，s，5-H，7.431H，brd，J=8.0Hz，H-6，7.401H，brs，H-2，6.901H，brd，J=8.0Hz，H-5，6.671H，brs，H-3，6.451H，brs，H-8，6.201H，brs，H-6；13-NRDS-d6，100Hz：164.0-2，102.8-

17、3，181.6-4，161.4-5，98.7-6，163.8-7，93.7-8，157.2-9，103.6-10，121.4-1，113.3-2，145.6-3，149.6-4，115.9-5，118.9-6。以上数据与文献16报道木犀草素的数据根本一致。化合物9淡黄色针状结晶甲醇；ESI-S/z339+Na+；1H-NRDS-d6，400Hz：13.11H，brs，5-H，7.451H，brd，J=8.4Hz，H-6，7.421H，brs，H-2，6.911H，d，J=8.4Hz，H-5，6.691H，s，H-8，6.581H，brs，H-3，3.783H，s，6-H3；13-NRDS-d6

18、，100Hz：163.9-2，102.4-3，182.0-4，152.3-5，131.3-6，157.2-7，94.1-8，152.8-9，104.0-10，121.5-1，113.3-2，149.6-3，145.7-4，116.0-5，118.9-6，59.9-H3。以上数据与文献17报道泽兰黄酮的数据根本一致。化合物10黄色无定性粉末；ESI-S/z383+Na+；1H-NRDl3，400Hz：12.401H，brs，5-H，7.691H，brd，J=8.4Hz，H-6，7.681H，brs，H-2，6.961H，d，J=8.4Hz，H-5，6.551H，s，H-8，3.99，3.98，3

19、.86各3H，s，6，7，4-H3；13-NRDl3，100Hz：149.8-2，139.0-3，178.8-4，148.8-5，130.4-6，155.9-7，90.2-8，153.0-9，106.4-10，123.8-1，115.6-2，145.2-3，145.5-4，114.3-5，121.6-6，60.26-H3，56.57-H3，56.14-H3。以上数据与文献18报道泽兰黄醇素的数据根本一致。化合物11黄色无定性粉末；ESI-S/z369+Na+；1H-NRDS-d6，400Hz：12.381H，brs，5-H，9.541H，brs，7-H，9.481H，brs，4-H，8.661

20、H，brs，3-H，7.591H，brs，H-2，7.471H，d，J=8.4Hz，H-6，6.911H，d，J=8.4Hz，H-5，6.831H，s，H-8，3.91，3.78各3H，s，6，3-H3；13-NRDS-d6，100Hz：148.8-2，137.5-3，178.1-4，148.6-5，129.5-6，155.7-7，90.8-8，154.5-9，105.5-10，121.0-1，115.7-2，145.2-3，145.6-4，115.5-5，120.9-6，59.63H，s，6-H3，56.33H，s，3-H3。以上数据与文献19报道菠叶素的数据根本一致。化合物12黄色粉末；E

21、SI-S/z303+H+；1H-NRDS-d6，400Hz：12.491H，brs，5-H，10.791H，brs，3-H，9.611H，brs，7-H，9.381H，brs，3-H，9.321H，s，4-H，7.681H，brs，H-2，7.541H，brd，J=8.4Hz，H-6，6.901H，d，J=8.4Hz，H-5，6.411H，brs，H-8，6.191H，brs，H-6；13-NRDS-d6，100Hz：146.9-2，135.8-3，175.9-4，160.6-5，99.3-6，163.9-7，93.6-8，156.4-9，103.2-10，122.2-1，115.1-2，14

22、5.1-3，147.7-4，115.3-5，120.3-6。以上数据与文献20，21报道槲皮素的波谱数据根本一致。化合物13白色粉末；ESI-S/z165+H+；1H-NRDS-d6，400Hz：12.171H，brs，H，7.482H，d，J=8.8Hz，7.411H，d，J=16.0Hz，6.812H，d，J=8.8Hz，6.281H，d，J=16.0Hz；13-NRDS-d6，100Hz：127.0-1，130.8-2，6，116.8-3，5，161.5-4，146.4-7，115.2-8，170.4-9。以上数据与文献22报道对羟基桂皮酸的数据根本一致。化合物14白色针晶；ESI-S/

23、z203+Na+；1H-NRDS-d6，400Hz：10.1310.283H，brs，-H，7.441H，d，J=16.0Hz，H-7，7.051H，brs，H-2，6.971H，brd，J=8.0Hz，H-6，6.781H，d，J=8.0Hz，H-5，6.201H，d，J=16.0Hz，H-8；13-NRDS-d6，100Hz：125.7-1，114.6-2，145.5-3，148.1-4，115.1-5，121.1-6，144.5-7，115.7-8，167.9-9。以上数据与文献23-24报道咖啡酸的数据根本一致。化合物15白色片状结晶甲醇；ESI-S/z231+Na+；1H-NRDl3

24、，400Hz：7.501H，d，J=16.0Hz，H-7，7.011H，brs，H-2，6.901H，brd，J=8.0Hz，H-6，6.781H，d，J=8.0Hz，H-5，6.171H，d，J=16.0Hz，H-8，4.182H，q，J=6.8Hz，H-1，1.313H，t，J=6.8Hz，H-2；13-NRDl3，100Hz：167.9-1，114.0-2，145.1-3，127.2-4，115.2-5，146.9-6，146.9-7，115.3-8，122.2-9，60.6-1，14.3-2。以上数据与文献25报道咖啡酸乙酯的数据根本一致。4抗炎活性测定4.1各种化合物对LPS诱导的RA264.7细胞释放N的影响利用Griess法测定RA264.7细胞N的释放量，在非细胞毒浓度下检测各化合物对N的释放的抑制活性。化合物8，12与其他化合物相比显示出较强的N生成抑制作用，而且其活性呈剂量依赖性，I50分别为24.5，26.5lL-1。以L-N6-1-iinethyllysineL-NILdihydrhlride诱导型一氧化氮合酶特异性抑制剂作为阳性对照药。结果见表1。4.2各种化合物对KL诱导的Bs生成LT4和脱颗粒的影响肥大细胞是I型变态反响性炎症的主要启动细胞，肥大细胞活化后既释放原有的颗粒如组胺，又新合成LT4和前列腺素