百日咳菌苗原液免疫力试验方法_第1页
百日咳菌苗原液免疫力试验方法_第2页
百日咳菌苗原液免疫力试验方法_第3页
百日咳菌苗原液免疫力试验方法_第4页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、百日咳菌苗原液免疫力试验方法1免疫1.1动物选用体重1012g同性或雌雄性各半的健康NIH小白鼠。将动物随机分为三组，每组16只或20只（同性或雌雄性各半，为保证攻击后有16只或20只小白鼠，可适当多免疫几只小白鼠），同时饲养健康小白鼠55只，备做对照用。1.2免疫原稀释将百日咳原液用生理盐水或pH7.30.1磷酸盐缓冲生理盐水稀释至成品菌苗浓度的1/2，然后再稀释7.5、37.5、187.5，百日咳参考菌苗稀释至每ml含8IU，然后再稀释成每ml含1.0IU（0.125ml）、0.2IU（0.025ml）及0.04IU（0.005ml）。1.3免疫方法将不同稀释度的免疫原分别免疫小白鼠，每只

2、小白鼠各腹腔注射0.5ml。2攻击菌及攻击菌液的制备2.1菌种小白鼠脑内攻击用58030（18323）菌株。2.2培养基可用包-姜氏培养基（含羊血20%30%）或其他适宜的培养基。2.3培养温度及时间放3537培育，第一代不超过72小时，攻击时菌种的培育时间为2024小时。原代菌种放28可保存2周。2.4攻击菌液的制备将培育2024小时的菌苔经肉眼检查为纯菌后，刮入生理盐水或pH7.30.1缓冲生理盐水，用灭菌脱脂棉过滤，测定浓度，然后用pH7.07.2水解酷素、蛋白胨水或肉汤稀释成每0.03ml含菌8万，作为试验组的攻击菌液，然后再连续稀释，使每0.03ml分别含8000、800、80及8个

3、菌，以上5个不同稀释度的菌液，作为对照组的攻击菌液。2.5工作起止时间自攻击菌液制备（开始刮菌）至注射完最后1只小白鼠不得超过2.5小时。2.6活菌计数在攻击前后，可将0.03ml含8个菌的攻击菌液，接种于包一姜氏培养基或其他适宜的培养基平皿中，每个平皿0.2ml，每次不得少于2个平皿，其菌落形成单位约为浊度测定的1/4。3攻击动物免疫后14天，每只小白鼠脑内攻击0.03ml菌液（含8万个菌），用0.25ml注射器，4号针头。在试验组攻击后再进行对照组毒力测定，对照组每稀释度攻击10只小白鼠。4记录结果动物攻击后观察14天。攻击后第2天，将试验组动物处理成每组16只或20只。以后逐日观察动物并记录死亡数，最初3天死亡的动物不作统计，至第14天有麻痹、头部肿胀、弓背及明显耸毛的动物按死亡计算。5结果计算5.1按Wilson-Worcester氏法计算参考菌苗及待检菌苗的ED50SD%，每个ED50标准差的范围一般应为64%156%。5.2按Reed-Muench氏法计算对照组LD50，1个LD50的菌数应不高于800个菌。5.3计算均质性因子“”。5.4IU计算待检原液每ml应含IU=参考菌苗ED50/待检原

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 工业设计

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论