细胞化学染色检验血液检验

1、会计学1细胞化学染色检验血液检验细胞化学染色检验血液检验n掌握细胞化学染色临床应用掌握细胞化学染色临床应用n掌握各种细胞化学染色的原理及临床意义掌握各种细胞化学染色的原理及临床意义n熟悉各种细胞化学染色结果判断及正常血熟悉各种细胞化学染色结果判断及正常血细胞染色反应细胞染色反应n了解细胞化学染色的基本步骤了解细胞化学染色的基本步骤 1. 辅助判断急性白血病的细胞类型辅助判断急性白血病的细胞类型 2. 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别辅助血液系统疾病的诊断和鉴别 诊断诊断 3. 观察疾病的疗效和预后观察疾病的疗效和预后疾病疾病形态学分型：进行初步的诊断形态学分型：进行初步的诊断免疫学分型：明确细胞种

2、类免疫学分型：明确细胞种类细胞遗传学分型：与疾病预后有关细胞遗传学分型：与疾病预后有关分子生物学分型：提高到分子水平分子生物学分型：提高到分子水平1. 固定固定2. 显示：有色沉淀反应显示：有色沉淀反应3. 复染：使各种细胞能显示出来复染：使各种细胞能显示出来核：中性红、甲基绿、沙黄等。核：中性红、甲基绿、沙黄等。浆：伊红、刚果红、光绿等。浆：伊红、刚果红、光绿等。 第二部分第二部分 具体细胞化学染色方法具体细胞化学染色方法 铁染色铁染色(Ferric stain) 骨髓中的贮存铁主要存在于骨髓小粒骨髓中的贮存铁主要存在于骨髓小粒(外铁外铁)和幼红细胞和幼红细胞(内铁内铁)中；检测中；检测采用

3、普鲁氏蓝反应。采用普鲁氏蓝反应。一、原一、原 理理 4Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 Fe4Fe(CN)63 + 12K+ 含铁物质含铁物质 亚铁氰化钾亚铁氰化钾 亚铁氰化铁亚铁氰化铁酸性酸性二、结果判断二、结果判断+（1）分级）分级(按铁颗粒数量的多少及大小按铁颗粒数量的多少及大小) 细小颗粒：细沙样铁小粒，不易看清细小颗粒：细沙样铁小粒，不易看清。 粗大颗粒：很容易看清的颗粒。粗大颗粒：很容易看清的颗粒。（2）阳性率）阳性率 观察观察100个中个中晚幼红细胞，计算出铁晚幼红细胞，计算出铁 粒幼红细胞的百分比。粒幼红细胞的百分比。 环形铁粒幼红细胞环形铁粒幼红细胞(ringed side

4、roblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒幼红细胞胞质内铁颗粒6个，围绕个，围绕 核周核周1/2以上者。以上者。 铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞(sideroblast)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。 铁粒红细胞铁粒红细胞(siderocyte)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞三、参考范围三、参考范围3. MDS-RAS：内外铁内外铁增多增多，环形铁粒幼，环形铁粒幼 红细胞红细胞15%。4. 非缺铁性贫血：非缺铁性贫血：溶贫

5、、巨幼贫、再障、溶贫、巨幼贫、再障、 白血病等，内外铁常增多。白血病等，内外铁常增多。5. 感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等：感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等： 外铁外铁增多增多。中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色neutrophilic alkaline phosphatase （NAP）-磷酸萘酚钠磷酸萘酚钠-萘酚萘酚+ +磷酸钠磷酸钠NAPPH9.6-萘酚萘酚+重氮盐重氮盐不溶性沉淀定位不溶性沉淀定位于胞质于胞质 1. 结果判断：出现深褐色颗粒的量及密度结果判断：出现深褐色颗粒的量及密度+EOS 钙钙 钴钴 法法 2. ： 3. 参考范围：参考范围： 中性粒细胞中性粒细胞N

6、AP阳性率：阳性率：40% NAP积分为：积分为： 30130分分NAP染色结果既报阳性率又报积分值。染色结果既报阳性率又报积分值。1.生理性变化：应激状态、妊娠、新生儿等。生理性变化：应激状态、妊娠、新生儿等。 2.病理性变化：病理性变化： (1)NAP ：细菌性感染、慢粒细菌性感染、慢粒(加、急加、急)、急、急 淋、慢淋、恶性淋巴瘤、转移癌、淋、慢淋、恶性淋巴瘤、转移癌、 骨纤、真红、再障、原发性血小骨纤、真红、再障、原发性血小 板增多症、使用糖皮质激素等。板增多症、使用糖皮质激素等。 (1) 类白与慢粒类白与慢粒: 前者前者 后者后者 (2) 慢粒慢性期与慢粒慢性期与慢性中性粒细胞白血病

7、：慢性中性粒细胞白血病： 前者前者 后者后者 (3) 细菌性感染与病毒性感染细菌性感染与病毒性感染/寄生虫感染：寄生虫感染： 前者前者 后两者正常或后两者正常或 (2)NAP ：慢粒慢粒(慢慢)、PNH、MDS、恶组等。、恶组等。(6) 恶组与反应性组织细胞增多症恶组与反应性组织细胞增多症： 前者前者 后者常后者常 (7) 急性白血病类型：急性白血病类型： 急性髓细胞急性髓细胞 急淋急淋 (4) 慢粒病情观察：慢粒病情观察： (5) 再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿：再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿： 前者前者 后者后者 CML类白类白 过氧化物酶染色过氧化物酶染色 (peroxidase，POX)

8、在细胞质内出现金黄色颗粒为阳性反应。在细胞质内出现金黄色颗粒为阳性反应。2. 单核细胞系统：单核细胞系统：或弱（或弱（+ +），阳性颗粒少而细小。），阳性颗粒少而细小。3. 其它系统细胞：其它系统细胞： 淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核细胞系统、浆细胞、组织细胞细胞系统、浆细胞、组织细胞 急淋和急性髓细胞系的鉴别：急淋和急性髓细胞系的鉴别：ALLALL原粒阴性原粒阴性原粒弱阳性原粒弱阳性原粒阳性原粒阳性 早幼粒早幼粒 强阳性强阳性 苏丹黑染色苏丹黑染色（Sudan black B，SBB）1. POX特异性高于特异性高于SBB，而敏感性，而敏感性 低于低于SBB；2

9、. SBB步骤较繁琐。步骤较繁琐。过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应( (糖原染色糖原染色) ) periodic acid-Schiff reaction(PAS) 过碘酸是氧化剂，使含有过碘酸是氧化剂，使含有乙二醇基乙二醇基的的多糖类物质多糖类物质(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖糖等等)氧化，氧化，形成形成双醛基双醛基。醛基与。醛基与Schiff s液中的无色品红结合，使无色品红变成紫液中的无色品红结合，使无色品红变成紫红色化合物，定位于红色化合物，定位于含多糖类含多糖类的细胞内。的细胞内。一、原理一、原理 二、正常血细胞的染色反应二、正常血细胞的染色反应a 粒细胞、粒细胞

10、、b 巨核细胞、巨核细胞、c 单核细胞、单核细胞、d 幼红细胞幼红细胞三、结果判断三、结果判断1. 粒细胞系统：粒细胞系统： 红色、弥散状。红色、弥散状。各种细胞阳性反应强弱不同各种细胞阳性反应强弱不同 2. 淋巴细胞系统：淋巴细胞系统： 粗颗粒状、小块状、大块状红色。粗颗粒状、小块状、大块状红色。1、+ 2、+ 3、+ 4、+ 5、3. 红细胞系统：红细胞系统： 均匀红色或块状均匀红色或块状 4. 单核细胞系统：单核细胞系统： 细颗粒状细颗粒状 5. 巨核细胞和血小板：巨核细胞和血小板： 颗粒状、块状。颗粒状、块状。1.巨核细胞和血小板阳性巨核细胞和血小板阳性四、临床意义四、临床意义 A 红

11、白血病红白血病(+) B 巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血() 3. 其他细胞：其他细胞： 急慢性淋巴细胞白血病和急慢性淋巴细胞白血病和 淋巴瘤细胞多呈强阳性淋巴瘤细胞多呈强阳性 戈谢细胞呈强阳性戈谢细胞呈强阳性 尼曼尼曼- -皮克细胞多呈阴性皮克细胞多呈阴性CLLALL （一）（一）氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 Naphthol AS-D chloroacetate esterase 1. 原理原理 氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚萘酚 AS-D萘酚萘酚 不溶性的有色不溶性的有色(红红)沉淀。沉淀。 NAS-DCE几乎仅出现在粒细胞，其特异性高，几乎仅出现在粒细胞，其特异性高， 因此又称

12、为因此又称为“粒细胞酯酶粒细胞酯酶” NAS-DCE 重氮盐重氮盐(坚牢蓝紫酱坚牢蓝紫酱) 氯氯乙酸乙酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色单核细胞系统：单核细胞系统： 肥大细胞：肥大细胞：（淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、 巨核细胞、血小板：巨核细胞、血小板： 1. 原原 理理 非特异性脂酶在相应的非特异性脂酶在相应的pH环境中，环境中， 将基质液中相应底物水解，产生含萘酚将基质液中相应底物水解，产生含萘酚 的物质，后者与重氮盐发生偶联反应，的物质，后者与重氮盐发生偶联反应， 形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质 内酶所在的部位。内酶所在的

13、部位。 名称名称pHpH底物底物生成物生成物重氮盐重氮盐( (产物颜色产物颜色) )-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶(-NAE)中中-醋酸萘酚醋酸萘酚-萘酚萘酚坚牢蓝坚牢蓝B棕黑棕黑,灰黑灰黑醋酸醋酸AS-D萘酚酯萘酚酯酶酶 (AS-D NAE)中中醋酸醋酸AS-D萘萘酚酚AS-D萘萘酚酚坚牢蓝坚牢蓝BB蓝蓝-丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶(-NBE)碱碱-丁酸萘酚丁酸萘酚-萘酚萘酚坚牢紫酱坚牢紫酱GBC红红酸性酸性-醋酸萘酚醋酸萘酚酯酶酯酶(ANAE)酸酸-醋酸萘酚醋酸萘酚-萘萘酚酚六偶氮六偶氮付品红付品红红红-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色灰黑色、棕黑色)-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯

14、酶染色a:单核单核 b:BPC c:巨核巨核 d:LC(+) e:幼红幼红(-)NaF抑制抑制率率= = 抑制抑制前前阳性率阳性率 抑制抑制后后阳性率阳性率 抑制抑制前前阳性率阳性率( (或阳性积分或阳性积分) ) 100%-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色M5NaFM1NaF酸性酸性-醋酸萘酚酯酶染色（弥漫性棕红色）醋酸萘酚酯酶染色（弥漫性棕红色）-M5 3. 酯酶双染色酯酶双染色 在同一张涂片上进行两种酯酶染色在同一张涂片上进行两种酯酶染色特异性酯酶特异性酯酶 + + 非特异性酯酶非特异性酯酶对诊断急性粒对诊断急性粒- -单细胞白血病有独特价值单细胞白血病有独特价值-NAE 与与NAS-D

15、CE 红色红色(单单)-NBE 与与 NAS-DCE 兰色兰色(粒粒)酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色(acid phosphatase，ACP)白色()(3)3(24234POPbNOPbPOPbSSNHPOPb24243)(）（棕黑色34 POACP甘油磷酸钠甘油pH5.0ACPPh5.0重氮盐重氮盐3. 抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一组同工酶）抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一组同工酶）两张相同标本涂片两张相同标本涂片+ +两份基质液两份基质液( (加加L-L-酒石酸，不加酒石酸，不加 L-L-酒石酸酒石酸) ) ACP染色染色耐耐L-酒石酸酒石酸两份（两份（+）不耐不耐L-酒石酸酒石酸不加不加 L-酒

16、石酸（酒石酸（+）加加L-酒石酸（）酒石酸（）多毛细胞白血病多毛细胞白血病慢性淋巴细胞慢性淋巴细胞白血病白血病抗酒石酸酸性磷抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸酶染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛细胞白血病多毛细胞白血病 抗抗L-酒石酸酒石酸ACP阳性阳性2.鉴别戈谢鉴别戈谢(Gaucher)细胞和尼曼细胞和尼曼-匹匹 克克(Niemann-Picks)细胞：细胞：前者（前者（+） 后者（）后者（）3.鉴别鉴别T淋巴细胞和淋巴细胞和B淋巴细胞：淋巴细胞：前者（前者（+） 后者（）后者（） s cell四种常见急性白血病的细胞化学染色结果四种常见急性白血病的细胞化学染色结果项目项目 M3 M1/M2 M5

17、 ALLPOX 强阳性强阳性 阳性阳性/阴性阴性 弱阳性弱阳性/阴性阴性 阴性阴性 NAS-DCE 强阳性强阳性 阳性阳性/阴性阴性 多阴性多阴性 阴性阴性-NAE 强阳性强阳性 阴性阴性/弱阳性弱阳性 阳至强阳性阳至强阳性 阴性阴性/阳性阳性-NAE+NaF 不抑制不抑制 不抑制不抑制 抑制抑制 不抑制不抑制-NBE 阴性阴性 阴性阴性 阳性阳性 阴性阴性-NBE+NaF 抑制抑制 急非淋急非淋 脂酶染色脂酶染色NAP：类白与慢粒、感染类型、再障与类白与慢粒、感染类型、再障与 PNH、慢粒分期；、慢粒分期；ACP：毛白、毛白、T细胞细胞/B细胞、脂代谢障碍；细胞、脂代谢障碍；PAS：巨幼贫与巨幼贫与MDS-RA、红白血病；、红白血病；铁染色：铁染色：缺铁贫、铁粒幼贫、缺铁贫、铁粒幼贫、MDS-RAS。急淋急淋POX急性白血病急性白血病n掌握细胞化学染色临床应用掌握细胞化学染色临床应用n掌握各种细胞化学染色的原理及临床