第七章 化学酶工程

1、第七章第七章 化学酶工程化学酶工程前言前言n一一 酶的化学修饰原因酶的化学修饰原因q1 稳定性不够，不能适应大量生产的需要。稳定性不够，不能适应大量生产的需要。q2 酶的主要动力学性质的不适应酶的主要动力学性质的不适应易受产物和抑制剂易受产物和抑制剂抑制。抑制。q3体外的反应条件不在其最适反应条件范围内。体外的反应条件不在其最适反应条件范围内。q4临床应用的特殊要求不符合临床应用的特殊要求不符合体内使用时候，异体蛋体内使用时候，异体蛋白抗原性、蛋白水解酶、半衰期短、不能在靶部位有效白抗原性、蛋白水解酶、半衰期短、不能在靶部位有效聚集。聚集。n教学重点：教学重点：酶分子化学修饰的原理；酶分子化学

2、修饰的原理；酶分子化学修饰的方法酶分子化学修饰的方法7.1. 酶化学修饰酶化学修饰n定义：定义：n在较温和条件下，以可控方式使酶同某些化学试剂发生在较温和条件下，以可控方式使酶同某些化学试剂发生特异反应，特异反应，引起酶分子中某些基团发生共价的化学改变引起酶分子中某些基团发生共价的化学改变的过程的过程（狭义）（狭义） 。n凡凡通过化学基团的引入或除去通过化学基团的引入或除去，而使酶蛋白共价结构发，而使酶蛋白共价结构发生改变，称为酶蛋白的化学修饰（广义）。生改变，称为酶蛋白的化学修饰（广义）。酶修饰的方向酶修饰的方向n1蛋白质水平（化学修饰）n2 核酸水平q1酶经化学修饰后，能减少由于内部平衡力

3、被破坏而引起的酶分子酶经化学修饰后，能减少由于内部平衡力被破坏而引起的酶分子伸展，增强伸展，增强酶天然构象的稳定性；酶天然构象的稳定性；q2 酶表面形成缓冲外壳，抵御外界环境，维护酶活性部位稳定性。酶表面形成缓冲外壳，抵御外界环境，维护酶活性部位稳定性。q3 大分子修饰剂产生的空间障碍遮盖酶活性部位或敏感键，增加酶大分子修饰剂产生的空间障碍遮盖酶活性部位或敏感键，增加酶抗抑制剂、抗蛋白水解酶的能力。抗抑制剂、抗蛋白水解酶的能力。q4 修饰可破坏抗原决定簇的结构，使酶抗原性降低或消失。修饰可破坏抗原决定簇的结构，使酶抗原性降低或消失。7.1.2酶化学修饰的内在机制及原理酶化学修饰的内在机制及原理

4、酶分子化学修饰的基本要求酶分子化学修饰的基本要求n1酶性质的了解酶性质的了解n2修饰剂的选择修饰剂的选择n3修饰反应条件的选择修饰反应条件的选择n4. 修饰反应的定性定量检测修饰反应的定性定量检测1酶性质的了解酶性质的了解n1 酶活性部位情况酶活性部位情况n2 酶的稳定条件、酶反应最适条件酶的稳定条件、酶反应最适条件n3 酶分子侧链基团的化学性质及反应活泼性等。酶分子侧链基团的化学性质及反应活泼性等。2修饰剂的选择修饰剂的选择n1 修饰剂的分子量、修饰剂链的长度对蛋白质修饰剂的分子量、修饰剂链的长度对蛋白质的吸附性。的吸附性。n2 修饰剂上反应基团的数目及位置。修饰剂上反应基团的数目及位置。n

5、3 修饰剂上反应基团的活化方法与条件。修饰剂上反应基团的活化方法与条件。3修饰反应条件的选择修饰反应条件的选择n1 反应体系中酶与修饰剂的分子比例。反应体系中酶与修饰剂的分子比例。n2 反应体系的反应体系的pH条件、溶剂性质，离子强度。条件、溶剂性质，离子强度。n3 反应温度及时间。反应温度及时间。4. 修饰反应的定性定量检测修饰反应的定性定量检测n需建立适当的方法对反应进程进行跟踪，获得一系列有关需建立适当的方法对反应进程进行跟踪，获得一系列有关修饰反应的数据；以确定修饰程度和部位。修饰反应的数据；以确定修饰程度和部位。n间接分析法，被修饰的残基经分离纯化后，通过其含有的间接分析法，被修饰的

6、残基经分离纯化后，通过其含有的同位素标记量或有色修饰剂的光谱强度、荧光标记量来测同位素标记量或有色修饰剂的光谱强度、荧光标记量来测定反应程度。定反应程度。n对修饰部位进行鉴定，需要被修饰的酶蛋白经总降解和氨对修饰部位进行鉴定，需要被修饰的酶蛋白经总降解和氨基酸分析。基酸分析。7.1.17.1.2 小结小结化学修饰原因化学修饰原因酶修饰的方向酶修饰的方向基本原理基本原理酶分子化学修饰的基本要求酶分子化学修饰的基本要求1 稳定性不够，不能适应大量生产的需要。2 酶的主要动力学性质的不适应。3体外的反应条件不在其最适反应条件范围内。4临床应用的特殊要求不符合。核酸水平蛋白质水平1 增强酶天然构象的稳

7、定性与耐热性2 酶表面形成缓冲外壳，抵御外界环境，维护酶活性部位稳定性。3 大分子修饰剂产生的空间障碍遮盖酶活性部位或敏感键，增加酶抗抑制剂、抗失活因子能力。4 修饰可破坏抗原决定簇的结构，使酶抗原性降低或消失。酶性质的了解修饰剂的选择修饰反应条件的选择修饰反应定性定量检测7.1.3 酶分子化学修饰的方法酶分子化学修饰的方法1. 酶分子侧链基团酶分子侧链基团的化学修饰的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应）几种重要的修饰反应（2）特定氨基酸残基侧链基团）特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰的化学修饰2. 酶分子的亲和标记酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰大分子结合修饰聚乙二醇聚乙二醇右旋糖酐及右旋

8、糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯糖肽糖肽具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质4. 酶分子的化学交联酶分子的化学交联1. 酶分子侧链基团的化学修饰酶分子侧链基团的化学修饰 n酶分子侧链上有各种不同的活泼功能基团，可与一些试酶分子侧链上有各种不同的活泼功能基团，可与一些试剂发生化学反应，达到对酶分子进行化学修饰的目的。剂发生化学反应，达到对酶分子进行化学修饰的目的。n一几种重要的修饰反应一几种重要的修饰反应n二特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰二特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰n三三. 研究新热点（扩展）研究新热点（扩展）一几种重要的修饰反应一几种重要的修饰反应q1酰化反应酰化反应酶分

9、子侧链基团的酰化反应酶分子侧链基团的酰化反应2烷基化反应烷基化反应 修饰剂特点：修饰剂特点：带有活泼的卤素原子，卤素原子的电负性使烷基带有部分带有活泼的卤素原子，卤素原子的电负性使烷基带有部分正电荷，容易导致酶分子的亲核基团发生烷基化。正电荷，容易导致酶分子的亲核基团发生烷基化。亲核基团：亲核基团：亲近核的基团亲近核的基团,核核,来自于原子核这个概念，带正电。即：来自于原子核这个概念，带正电。即：亲近正电荷的基团，据异性相吸，这样的基团带负电荷。亲近正电荷的基团，据异性相吸，这样的基团带负电荷。2,4-二硝基氟苯二硝基氟苯碘乙酸碘乙酸3氧化和还原反应氧化和还原反应 具有氧化性的试剂，能将侧链基

10、团氧化（在修饰反应中要控制好反应条件，具有氧化性的试剂，能将侧链基团氧化（在修饰反应中要控制好反应条件， 以免强氧化剂使肽链发生断裂）以免强氧化剂使肽链发生断裂）受氧化反应作用的侧链基团：巯基，硫醚基，咪唑基，酚基受氧化反应作用的侧链基团：巯基，硫醚基，咪唑基，酚基还原剂：还原剂： -巯基乙醇，二硫苏糖醇（主要作用于酶分子中二硫键的修饰试剂巯基乙醇，二硫苏糖醇（主要作用于酶分子中二硫键的修饰试剂 ）酶分子中巯基的可逆保护反应酶分子中巯基的可逆保护反应（连四硫酸钠或连四硫酸钾）（连四硫酸钠或连四硫酸钾）4芳香环取代反应芳香环取代反应 四硝基甲烷四硝基甲烷酶分子酪氨酸残基的酚羟基在苯环酶分子酪氨酸

11、残基的酚羟基在苯环3和和5位上容易发生位上容易发生亲电取代的硝化和碘化反应亲电取代的硝化和碘化反应3-硝基酪氨酸衍生物，具有特殊光谱，硝基酪氨酸衍生物，具有特殊光谱，用于直接的定量测定用于直接的定量测定二特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰二特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰 酶分子侧链上的功能基团：氨基，羧基，巯基，咪唑基，胍酶分子侧链上的功能基团：氨基，羧基，巯基，咪唑基，胍基，吲哚基，酚基，羟基，硫醚基，二硫键。基，吲哚基，酚基，羟基，硫醚基，二硫键。1氨基的化学修饰氨基的化学修饰-赖氨酸侧链赖氨酸侧链-氨基是酶分子中氨基是酶分子中亲核反应活性很高的基团。亲核反应活性很高的基团。 2羧基的化学

12、修饰羧基的化学修饰 3巯基的化学修饰：具有很强的亲核性巯基的化学修饰：具有很强的亲核性专一性强的巯基修饰剂专一性强的巯基修饰剂最常用的定量酶分子中巯基数目最常用的定量酶分子中巯基数目的修饰剂（的修饰剂（Ellman试剂）试剂）n可溶性的可溶性的N -乙基马来酰亚胺敏感型融合蛋白受体；乙基马来酰亚胺敏感型融合蛋白受体；n定位在高尔基体中，通过膜泡融合调节内体运输。定位在高尔基体中，通过膜泡融合调节内体运输。4咪唑基的化学修饰咪唑基的化学修饰 5胍基的化学修饰胍基的化学修饰 6. 二硫键的化学修饰二硫键的化学修饰n-巯基乙醇、二硫苏糖醇（巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）三三. 研究热点研究热点-核酸

13、类酶的修饰核酸类酶的修饰 nRNA酶的侧链基团修饰：指组成酶的侧链基团修饰：指组成RNA的核苷酸残基上的功能团，的核苷酸残基上的功能团，主要是核糖主要是核糖2-位置上的羟基以及嘌呤、嘧啶碱基上的氨基。位置上的羟基以及嘌呤、嘧啶碱基上的氨基。n方法：方法：n核苷酸置换修饰核苷酸置换修饰n2-位置上的羟基去除位置上的羟基去除n接上氨基酸等有机化合物接上氨基酸等有机化合物7.1.3 结束结束n重要的修饰反应重要的修饰反应n特定氨基酸残基侧特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰链基团的化学修饰酰化反应酰化反应烷基化反应烷基化反应氧化和还原反应氧化和还原反应芳香环取代反应芳香环取代反应氨基的化学修饰氨基的化学

14、修饰羧基的化学修饰羧基的化学修饰巯基的化学修饰巯基的化学修饰咪唑基的化学修饰咪唑基的化学修饰胍基的化学修饰胍基的化学修饰二硫基的化学修饰二硫基的化学修饰1. 酶分子侧链基团酶分子侧链基团的化学修饰的化学修饰 7.1.3 酶分子化学修饰的方法酶分子化学修饰的方法1. 酶分子侧链基团酶分子侧链基团的化学修饰的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应）几种重要的修饰反应（2）特定氨基酸残基侧链基团）特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰的化学修饰2. 酶分子的亲和标记酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰大分子结合修饰聚乙二醇聚乙二醇右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯糖肽糖肽具有生物活性的大分子物质

15、具有生物活性的大分子物质4. 酶分子的化学交联酶分子的化学交联酶分子的亲和标记酶分子的亲和标记n亲和标记概念：亲和标记概念：n利用酶和底物亲和性，使用利用酶和底物亲和性，使用与酶底物结构类似的修饰剂与酶底物结构类似的修饰剂，专一性专一性共价共价结合到酶分子活性部位氨基酸残基上，是位点结合到酶分子活性部位氨基酸残基上，是位点专一性的化学修饰。（只对特定部位的特定基团进行共价专一性的化学修饰。（只对特定部位的特定基团进行共价标记。）标记。）n专一性不可逆抑制专一性不可逆抑制Ks型不可逆抑制（亲和标记）型不可逆抑制（亲和标记）Kcat型不可逆抑制：底物的类似物，但型不可逆抑制：底物的类似物，但结构中

16、结构中潜藏着一种化学活性基团潜藏着一种化学活性基团，酶与底物类似物结合，酶与底物类似物结合，酶促催化作用进行到一定阶段以后，潜在的化学基团酶促催化作用进行到一定阶段以后，潜在的化学基团被暴露、活化，和酶活性中心发生共价结合，使酶失活。被暴露、活化，和酶活性中心发生共价结合，使酶失活。该过程为酶的该过程为酶的“自杀自杀”。自杀性底物：青霉素亚砜自杀性底物：青霉素亚砜7.1.3 酶分子化学修饰的方法酶分子化学修饰的方法1. 酶分子侧链基团酶分子侧链基团的化学修饰的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应）几种重要的修饰反应（2）特定氨基酸残基侧链基团）特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰的化学修饰2. 酶分

17、子的亲和标记酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰大分子结合修饰聚乙二醇聚乙二醇右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯糖肽糖肽具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质4. 酶分子的化学交联酶分子的化学交联有机大分子对酶的修饰有机大分子对酶的修饰q概念：利用水溶性和生物活性的大分子与酶通过共价键概念：利用水溶性和生物活性的大分子与酶通过共价键结合，使酶的结构发生某些精细的改变，从而改变酶的结合，使酶的结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能；特性与功能；q特点：这些水溶性和生物活性大分子不能直接与酶分子特点：这些水溶性和生物活性大分子不能直接与酶分子上的基团反应，使用之前需

18、进行活化上的基团反应，使用之前需进行活化常用的大分子修饰剂常用的大分子修饰剂 q聚乙二醇聚乙二醇 q右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯q糖肽糖肽 q具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质 聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）n用的最多的一类修饰剂；用的最多的一类修饰剂；n特点：溶解度高，没有免疫原性和毒性；特点：溶解度高，没有免疫原性和毒性；n应用：采用应用：采用只带有一个可被活化羟基聚乙二醇只带有一个可被活化羟基聚乙二醇（MPEG）：）：MPEG三氯均嗪类衍生物（三氯均嗪类衍生物（7-15,7-16）n用聚乙二醇修饰过的超氧化物岐化酶，用聚乙二醇修饰过的超氧化物岐化酶，可降低

19、或消除酶可降低或消除酶的抗原性，提高抗蛋白水解酶能力，延长酶在体内半衰的抗原性，提高抗蛋白水解酶能力，延长酶在体内半衰期时间，从而提高酶的药效。期时间，从而提高酶的药效。聚乙二醇分子式聚乙二醇分子式糖肽糖肽n来源：通过蛋白水解酶降解纤维蛋白或来源：通过蛋白水解酶降解纤维蛋白或-球蛋白得到；球蛋白得到；n糖肽上的氨基经活化后，与酶分子中的氨基反应，以共价键结糖肽上的氨基经活化后，与酶分子中的氨基反应，以共价键结合，实现对酶的修饰；合，实现对酶的修饰；n戊二醛法活化糖肽之后，进行酶的修饰戊二醛法活化糖肽之后，进行酶的修饰具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质蛋白质类修饰蛋白质类修饰n血浆

20、蛋白质是血浆的天然组分；n分子质量比较大；n其中人血清白蛋白应用较多的酶修饰剂。常用修饰方法常用修饰方法q1戊二醛法：戊二醛双功能基团 q2碳二亚胺法：碳二亚胺作为交联剂 q3活性酯法： 戊二醛法戊二醛法n利用戊二醛利用戊二醛双功能基团的活泼性双功能基团的活泼性，使白蛋白和酶分子上的氨，使白蛋白和酶分子上的氨基发生交联而对酶进行修饰。基发生交联而对酶进行修饰。活性酯法活性酯法q（1）原理：根据多肽合成原理发展起来）原理：根据多肽合成原理发展起来 q（2）特点：反应条件温和，减少了修饰反应中副反应）特点：反应条件温和，减少了修饰反应中副反应的产生。的产生。q（3）工艺步骤：）工艺步骤：活性酯法介

21、导白蛋白修饰酶的反应过程：活性酯法介导白蛋白修饰酶的反应过程：a 白蛋白琥珀酰化白蛋白琥珀酰化 b 活性酯形成反应活性酯形成反应 c 修饰反应修饰反应 大分子结合修饰大分子结合修饰 概念概念 常用的水溶性和生物活性大分常用的水溶性和生物活性大分子修饰剂子修饰剂 举例：举例：聚乙二醇聚乙二醇右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯糖肽糖肽具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质聚乙二醇结合修饰聚乙二醇结合修饰SOD7.1.3 酶分子化学修饰的方法酶分子化学修饰的方法1. 酶分子侧链基团酶分子侧链基团的化学修饰的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应）几种重要的修饰反应（2）特定氨基酸

22、残基侧链基团）特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰的化学修饰2. 酶分子的亲和标记酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰大分子结合修饰聚乙二醇聚乙二醇右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯糖肽糖肽具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质4. 酶分子的化学交联酶分子的化学交联n交联剂：交联剂：具有两个活性反应基团的双功能试剂具有两个活性反应基团的双功能试剂，可在酶分子内，可在酶分子内相距较近的两个氨基酸残基直接形成共价交联，使酶分子空间相距较近的两个氨基酸残基直接形成共价交联，使酶分子空间构象更稳定。构象更稳定。n交联酶晶体制备交联酶晶体制备扩充知识点扩充知识点金属离子置换修饰金属离

23、子置换修饰q把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方法和功能发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。称为金属离子置换修饰。q常用的离子：大都是二价金属离子。常用的离子：大都是二价金属离子。-淀粉酶中的钙离子淀粉酶中的钙离子（ Ca2+ ），谷氨酸脱氢酶中的锌离子（），谷氨酸脱氢酶中的锌离子（ Zn2+ ），超氧化），超氧化物岐化酶分子中的铜、锌离子（物岐化酶分子中的铜、锌离子（ Ca2+ 、Zn2+ ）q从酶分子中除去其所含的金属离子，酶会丧失催化活性。从酶分子中除去其所含的金属离子，酶会丧失催化活性。重新加入原

24、有的金属离子，酶的催化活性可恢复。若用另重新加入原有的金属离子，酶的催化活性可恢复。若用另一种金属离子进行置换，可使酶呈现不同的特性：酶的活一种金属离子进行置换，可使酶呈现不同的特性：酶的活性降低或增加。性降低或增加。举例举例n将基质金属蛋白酶的将基质金属蛋白酶的Zn2+除去，然后用除去，然后用Ca2+置换，则酶置换，则酶活力可提高活力可提高20-30%。若将钙型蛋白酶制成结晶，则其酶。若将钙型蛋白酶制成结晶，则其酶活力比锌型蛋白酶结晶的酶活力提高活力比锌型蛋白酶结晶的酶活力提高2-3倍。倍。 n应用：只是适用于在分子结构中本来含有金属离子的酶。应用：只是适用于在分子结构中本来含有金属离子的酶

25、。金属离子置换修饰的过程金属离子置换修饰的过程n除去原有的金属离子除去原有的金属离子：加入金属螯合剂加入金属螯合剂EDTA，使酶分子中，使酶分子中的金属离子与的金属离子与EDTA形成螯合物。通过透析、超滤等将形成螯合物。通过透析、超滤等将EDTA-金属螯合物从酶液中除去，此时，酶称为无活性状金属螯合物从酶液中除去，此时，酶称为无活性状态。态。n加入置换离子加入置换离子：去离子的酶液中加入另一种金属离子，酶：去离子的酶液中加入另一种金属离子，酶蛋白与新加入的金属离子结合，得到置换后的酶。蛋白与新加入的金属离子结合，得到置换后的酶。n定义：定义：n在较温和条件下，以可控方式使酶同某些化学试剂发生在

26、较温和条件下，以可控方式使酶同某些化学试剂发生特异反应，从而特异反应，从而引起酶分子中某些基团引起酶分子中某些基团发生共价的化学发生共价的化学改变的过程（狭义）改变的过程（狭义） 。7.1.17.1.2 小结小结化学修饰原因化学修饰原因酶修饰的方向酶修饰的方向基本原理基本原理酶分子化学修饰的基本要求酶分子化学修饰的基本要求1 稳定性不够，不能适应大量生产的需要。2 酶的主要动力学性质的不适应。3体外的反应条件不在其最适反应条件范围内。4临床应用的特殊要求不符合。核酸水平蛋白质水平1 增强酶天然构象的稳定性与耐热性2 酶表面形成缓冲外壳，抵御外界环境，维护酶活性部位稳定性。3 大分子修饰剂产生的

27、空间障碍遮盖酶活性部位或敏感键，增加酶抗抑制剂、抗失活因子能力。4 修饰可破坏抗原决定簇的结构，使酶抗原性降低或消失。酶性质的了解修饰剂的选择修饰反应条件的选择修饰反应定性定量检测7.1.3 酶分子化学修饰的方法酶分子化学修饰的方法1. 酶分子侧链基团酶分子侧链基团的化学修饰的化学修饰 （1）几种重要的修饰反应）几种重要的修饰反应（2）特定氨基酸残基侧链基团）特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰的化学修饰2. 酶分子的亲和标记酶分子的亲和标记 3.大分子结合修饰大分子结合修饰聚乙二醇聚乙二醇右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯糖肽糖肽具有生物活性的大分子物质具有生物活性的大分子物质4.

28、 酶分子的化学交联酶分子的化学交联5. 金属离子置换修饰金属离子置换修饰化学修饰（广义）化学修饰（广义）n凡凡通过化学基团的引入或除去通过化学基团的引入或除去，而使酶蛋白共价结构发，而使酶蛋白共价结构发生改变，称为酶蛋白的化学修饰（广义）。生改变，称为酶蛋白的化学修饰（广义）。n利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构和利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构和空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能。空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能。7.1.4 化学修饰酶的特性化学修饰酶的特性n1热稳定性热稳定性n2抗原性抗原性n3体内半衰期体内半衰期n4最适最适pHn5酶学性质

29、的改变酶学性质的改变n6对组织的分布能力变化对组织的分布能力变化1热稳定性热稳定性原因：原因：n1修饰剂存在多个活性反应基团，可与酶多点交联，修饰剂存在多个活性反应基团，可与酶多点交联，稳稳定了酶的天然构象，增强了酶的结构刚性定了酶的天然构象，增强了酶的结构刚性，不易伸展打，不易伸展打开。开。n2减少了酶分子内部基团的热振动。减少了酶分子内部基团的热振动。热稳定性举例：热稳定性举例：q例：例：q过氧化氢酶：右旋糖酐：过氧化氢酶：右旋糖酐：50/10min50/10min，40%-90% 40%-90% q糜蛋白酶：右旋糖酐：糜蛋白酶：右旋糖酐：37/6h37/6h，0%-70% 0%-70%

30、q糜蛋白酶：肝素：糜蛋白酶：肝素：37/6h37/6h，0%-80% 0%-80% q尿酸酶：人血清白蛋白：尿酸酶：人血清白蛋白： 37/48h37/48h，50%-95%50%-95%二抗原性二抗原性q原因：原因：n组成抗原决定簇的基团组成抗原决定簇的基团与修饰剂形成了共价键与修饰剂形成了共价键，破坏了，破坏了抗原决定簇的结构抗原决定簇的结构n大分子大分子修饰剂遮盖抗原决定簇修饰剂遮盖抗原决定簇和阻碍抗原、抗体产生结和阻碍抗原、抗体产生结合反应合反应q部分可消除。部分可消除。PEGPEG、人血清白蛋白在消除酶抗原性上效、人血清白蛋白在消除酶抗原性上效果明显。果明显。3体内半衰期体内半衰期q体内半衰期延长体内半衰期延长q酶在经化学修饰之后，增强了抗蛋白水解酶、抗抑制剂和抗失活酶在经化学修饰之后，增强了抗蛋白水解酶、抗抑制剂和抗失活因子的