微生物的显微直接计数

1、实验四微生物的显微直接计数微生物的显微直接计数目的要求目的要求实验原理实验原理实验材料实验材料实验程序实验程序思考题思考题目的要求目的要求 了解血球计数板的构造和使用方法。了解血球计数板的构造和使用方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的方学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。法。实验原理实验原理血球计数板血球计数板通常是一块特制的厚载玻片，载玻通常是一块特制的厚载玻片，载玻片上有四条槽而构成三个平台。中间的平台较片上有四条槽而构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽而隔成两半，每个半宽，其中间又被一短横槽而隔成两半，每个半边上面各刻有一个方格网，每个方格网共分九边上面各刻有一个方

2、格网，每个方格网共分九大格，其中间的一大格又称为计数室，微生物大格，其中间的一大格又称为计数室，微生物的计数就在此大格中进行。的计数就在此大格中进行。常用的血球计数板的计数室有两种规格常用的血球计数板的计数室有两种规格的刻度网格。一种是一个大方格分成的刻度网格。一种是一个大方格分成16个中个中方格，而每个中方格又分成方格，而每个中方格又分成25个小方格，即个小方格，即为为1625。另一种是一个大方格分成。另一种是一个大方格分成25个中个中方格，而每个中方格又分成方格，而每个中方格又分成16个小方格，即个小方格，即2516。但是不管计数室是那种规格，其计。但是不管计数室是那种规格，其计数室的小格

3、数总是相同的，即数室的小格数总是相同的，即162525l6400（小格）。（小格）。计算计算每一个大方格边长为每一个大方格边长为1毫米，则每一大方格毫米，则每一大方格面积为面积为1平方毫米。盖上盖玻片后，载玻片计数平方毫米。盖上盖玻片后，载玻片计数室与盖玻片之间的高度为室与盖玻片之间的高度为0.1毫米，所以每个计毫米，所以每个计数室（大方格）的体积为数室（大方格）的体积为0.1立方毫米。立方毫米。在计数时，通常数五个中方格的总菌数，求在计数时，通常数五个中方格的总菌数，求得平均值。再乘上得平均值。再乘上16或或25就得一大方格中的总菌就得一大方格中的总菌数。然后再换算成数。然后再换算成1毫升菌

4、液中的总菌数。毫升菌液中的总菌数。（1毫升毫升1立方厘米立方厘米1,000立方毫米）立方毫米）彼得罗夫彼得罗夫-霍瑟（霍瑟（Petroff Hausser）细菌计数板）细菌计数板两种计数板的原理和部件相同。只是细两种计数板的原理和部件相同。只是细菌计数板较薄，可以用油镜观察。而血球计菌计数板较薄，可以用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。实验材料实验材料酵母菌悬液酵母菌悬液 显微镜，血球计数板。显微镜，血球计数板。 盖玻片，无菌滴管，吸水纸，擦镜纸，香柏盖玻片，无菌滴管，吸水纸，擦镜纸，香柏油、镜头洗液。油、镜头洗液。 实验程序实验

5、程序计数步骤：计数步骤：1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴（取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。不宜过多），使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。3. 静置静置5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数板的大方格网位置。寻找时光圈要先用低倍镜找到计数板的大方格网位置。寻找时光圈要缩小，光线要偏暗些，并将计数室移至视野中央。缩小，光线要偏暗些，并将计数室移至视野中央。4.

6、 在高倍镜下计数：随机地计数五个中格内的菌数，在高倍镜下计数：随机地计数五个中格内的菌数，然后求得每个中格的平均值。乘上然后求得每个中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每毫升菌液中的含一大格中的总菌数，最后再换算到每毫升菌液中的含菌数量。由于菌体细胞在血球计数板上处于不同的空菌数量。由于菌体细胞在血球计数板上处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须不断调节微调节器，方能数到全部菌体，以免遗漏。不断调节微调节器，方能数到全部菌体，以免遗漏。5. 计算方法：计算方法：酵母菌细胞数毫升酵母菌细

7、胞数毫升=（X1+X2+X3+X4+X5）/5*25（或（或16）101000稀释倍数稀释倍数6. 注意事项。注意事项。计数时，为避免重复或遗漏计数，凡是遇到压在计数时，为避免重复或遗漏计数，凡是遇到压在方格线上的菌体，一般以压在底线和右侧线上的方格线上的菌体，一般以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内，遇到有芽体的酵母时，如果芽菌体计入本格内，遇到有芽体的酵母时，如果芽体和母体同等大时，就按两个酵母菌体计数。体和母体同等大时，就按两个酵母菌体计数。7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净并放回盒。用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净并放回盒。思考题思考题为什么计数室内不能有气泡？试分析产生气为什么计数室内不能有气泡？试分析产