G实验和GM实验-2016-3-31刘恒

1、刘恒广州医科大学附属第一医院主 要 内 容一、血清G试验二、血清GM试验三、肺泡灌洗液GM、BG试验 大自然中有真菌30余万种，引起人类疾病的致病真菌及条件致病真菌有280余种。近30年来，人类生活的显著变革创造了真菌感染的机会，随着社会的老龄化、广谱抗生素、抗肿瘤药、免疫抑制剂、介入治疗的广泛应用，器官移植的大量开展，尤其是获得性免疫缺陷综合症（ARDS）的流行，急性侵袭性真菌感染明显增多。 -缪晓辉,翁心华.全国首届深部真菌感染学术会议纪要.中华传染病杂志，2005,23:15-216.-Martin GS et al. N Engl J Med 2003；348:1546-54.流行病学

2、与变迁胡必杰.侵袭性真菌感染的流行病学与变迁.2007真菌感染组织分布J Med Assoc Thal，2007，90（12）：2630-2637.刘又宁等.中华结核和呼吸杂志.2011.34(2):86-90肺部真菌病原体分布结论：结论： 我国肺真菌病前5位致病原依次为曲霉菌、念珠菌、隐球菌、孢子菌及毛霉菌曲霉菌、念珠菌、隐球菌、孢子菌及毛霉菌，其中念珠菌属中以白色念珠菌及热带念珠菌为多。一、血清G试验1.血清G试验原理2.血清G试验的临床价值3.血清G试验检测方法4.血清G试验假阳性的情况5.血清G试验假阴性的情况6.血清G试验的优势和局限真菌病早期发病隐匿，症状与细菌、病毒感染相似，给其

3、诊断带来不便，早期诊断真菌病比较困难。传统的真菌实验室诊断为沙保罗培养基培养24、48h，根据形态学观察确定是否为真菌感染。但此法耗时长、阳性率低，很难早期发现真菌感染。葡聚糖广泛分布于多种真菌细胞壁中，为真菌的特有成分，其中（1-3）-D-葡聚糖占真菌胞壁成分50%以上，因此当真菌进入人体血液或深部组织后，经巨噬细胞吞噬、消化后，（1-3）-D-葡聚糖可从胞壁中释放，使得血液或其他液体中（1-3）-D-葡聚糖含量增高，经过检测（1-3）-D-葡聚糖的含量能够及时反应真菌感染情况。血清G试验-Bellanger A-P,et al.Retrospective assessment of -d-

4、(1,3)-glucan for presumptive diagnosis of fungal infectionsJ.APMIS,2011，119(4/5):280-286-邓林强,余理智,熊章华,等.血浆(1-3)-D葡聚糖检测和真菌培养在诊断深部真菌感染的临床价值J.实验与检验医学,2008,26(6):601-602.（1-3）-D-葡聚糖含量检测与临床诊断对比差异不明显P0.051.1 血清G试验原理G试验：检测（1-3）-D-葡聚糖的试验。研究发现：马蹄鲎（hu）凝血系统中凝血酶原G因子能够识别这种葡聚糖，是（1-3）-D-葡聚糖的天然检测者。（1-3）-D-葡聚糖细胞核（1-3

5、）-D-葡聚糖-张鹏等.血浆（1-3）-D-葡聚糖检测对真菌感染的诊断价值J.检验医学与临床.2012.9.(5):564-566.1.2 血清G试验的临床价值(1 ,3)-D 葡聚糖为真菌细胞壁成分,适用于除隐球菌和接合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期诊断，尤其是念珠菌和曲霉菌，但不能确定菌种。诊断侵袭性真菌感染（如侵袭性念珠菌病、侵袭性曲霉菌病、肺孢子菌肺炎等）的方法之一。1.3 血清G试验检测方法 Fungitec G test 阳性阈值为20ng/L 敏感性67-100% 特异性84-100% Glucatell test 阳性阈值为60ng/L或80ng/L 敏感性70-80%

6、 特异性90%左右1.4 血清G试验假阳性的情况 使用纤维素膜进行血透时，标本接触过含有葡聚糖的材料 ; 化疗或放疗引起的粘膜炎症，使得食物中（1-3）-D-葡聚糖通过胃肠道粘膜进入血液循环 ; 使用真菌为原料制成的抗生素，如多粘菌素等; 某些抗肿瘤药物中蘑菇聚糖，K多聚糖等成分含有（1-3）-D-葡聚糖类似物 ; 操作者处理标本时存在污染，如纱布棉球等污染。1.5 血清G试验假阴性的情况 隐球菌具有厚壁包膜，生长缓慢，导致假阴性； 局灶性曲菌病，（1-3）-D-葡聚糖很少释放入血； 抗真菌药物的使用。1.6 血清G试验的优势和局限优势： 鉴别侵袭性感染与定植； 不受机体免疫状态影响，早于临床

7、诊断平均4天；是早期真菌感染的敏感生物标志。局限： 不能区分真菌的种类。二、血清GM试验1.血清GM试验原理2.血清GM试验的临床价值3.血清GM试验检测方法4.血清GM试验假阳性的情况5.血清GM试验假阴性的情况6.血清GM试验的优势和局限2.1 血清GM试验的原理GM试验检测的是半乳甘露聚糖（glactomannan，GM），主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断；半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原；检测法采用双抗体夹心法，采用小鼠单克隆抗体EBA-2，检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。2.3 血清GM

8、试验假阳性的情况 使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦； 新生儿和儿童（双歧杆菌定植、食用乳制品含有半乳甘露聚糖）； 血液透析，接触含有半乳甘露聚糖的材料； 自身免疫性肝炎等； 食用含有半乳甘露聚糖的牛奶等高蛋白食物。2.4GM试验假阴性的情况 释放入血循环中的半乳甘露聚糖并不持续存在而是会很快清除； 以前使用了抗真菌药物； 病情不严重； 非粒细胞缺乏的患者。 2.5 血清GM试验的优势和局限 优势： 鉴别曲霉菌侵袭性感染与定植； 早于临床症状和影像学异常1周； GM试验诊断侵袭性曲霉感染的敏感度高于G试验； 半乳甘露聚糖释放量与菌量成正比，可以反映感染程度； 血清中存在时间较短，可作为疗

9、效监测。 局限： 不能区分曲霉菌的种类。G试验和GM试验的联合使用G试验以及GM试验不足之处较多，会产生较多的假阳性，从而造成检出率较低的情况。两种方法的联合诊断，能够有效降低假阳性的产生，提高诊断检出率，降低误诊率、漏诊率，从而提高其的敏感性以及特异性。-臧琳琳.G试验联合GM试验在恶性血液病侵袭性真菌感染诊断中的价值分析J.世界临床医学.2015.9(12).G试验和GM试验的联合使用种属种属G G试验试验GMGM试验试验念珠菌属念珠菌属镰刀菌属镰刀菌属隐球菌属隐球菌属曲霉菌属曲霉菌属青霉青霉/ /拟青霉拟青霉接合菌纲（毛霉菌）接合菌纲（毛霉菌）同时测定G试验和GM试验有助于早期诊断侵袭性

10、真菌感染！主 要 内 容一、血清G试验二、血清GM试验三、肺泡灌洗液GM、BG试验三、肺泡灌洗液（BAL）的GM试验以半乳甘露聚糖(GM)值为1.0作为阳性界值时，BALF和血清GM的特异度、阳性预测值均可达100,但BALF GM试验的敏感度和阴性预测值(66.7和 90.1)明显高于血清GM试验(28.6和81.O),可见BALF GM检测有利于侵袭性肺曲霉病（IPA）的早期诊断。-杜娟等.支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测对侵袭性肺曲霉病的早期诊断价值J.实用医学杂志.2013.29(10):1677-1679.三、肺泡灌洗液（BAL）的GM试验界值降低时敏感性增高，有利于早期诊断及治疗,但特异性相对较差,有可能出现假阳性,导致过度治疗;界值升高时检测的特异性增高,但敏感性稍差,从而导致治疗不及时、延误病情。肺泡灌洗液（BAL）GM试验结论： 侵袭性肺部真菌感染重要的检测方法