激活辣椒素受体是调控下颌下腺分泌的新途径

1、激活辣椒素受体是调控下颌下腺分泌的新途径主讲人：肖作慧小组成员：闻雯刘艳Page 2激活辣椒素受体是调控下颌下腺分泌的新途径Page 3 研究背景在静息状态下，下颌下腺的分泌量占全唾液量的60%-65%。全身性疾病如舍格伦综合征或局部疾病，如慢性下颌下腺 炎症和下颌下腺失神经损伤，以及某些治疗后的并 发症如头颈部肿瘤行放射治疗等，可导致腺体的分泌功能受损，唾液的分泌量降低，影响进食和吞咽等功能，严重者继发猖獗龋和念珠菌感染等并发症，严 重影响患者的生活质量Page 4n -肾上腺素受体、n -肾上腺素受体n 毒蕈碱乙酰胆碱受体辣椒素受体辣椒素受体Page 5制约？n 这 种受体为作用靶点干预

2、腺体分泌，存在一定的问题。 由于受体在全身各 组织器官的广泛表达，全身应用其激动剂可能会带 来一定的副作用。Page 6WHAT IS TRPV1（辣椒素受体）免疫荧光染色显示，辣椒素受体免疫荧光染色显示，辣椒素受体分布于家兔下分布于家兔下 颌下腺导管细胞颌下腺导管细胞的基侧膜，浆液性腺泡的胞浆中的基侧膜，浆液性腺泡的胞浆中也也 有少量表达；有少量表达；在人下颌下腺中，辣椒素受体主在人下颌下腺中，辣椒素受体主要分布要分布 于导管、浆液性腺泡和于导管、浆液性腺泡和混合性腺泡的新月细胞（混合性腺泡的新月细胞（ 浆浆 液液性腺泡细胞），但在黏液性腺泡性腺泡细胞），但在黏液性腺泡中很难检测到辣中很难检

3、测到辣 椒素受体的表椒素受体的表达达 。 辣椒素受体，是辣椒素受体，是1997 1997 年由年由 Cateria Cateria等从大鼠基因中成功克隆出的一类配体门等从大鼠基因中成功克隆出的一类配体门控的非选择性阳离子通道。辣椒素受体具有控的非选择性阳离子通道。辣椒素受体具有6 6次跨膜结构域，其次跨膜结构域，其- -端和端和 - -端均位于胞浆内。端均位于胞浆内。 辣椒素受体可被热辣椒素受体可被热( (4242)、低、低p p值以及辣椒中的主要值以及辣椒中的主要辛辣成分辣椒素激活，介导细胞外阳离子主要是辛辣成分辣椒素激活，介导细胞外阳离子主要是 Ca2+ 和和Na+内流，引起一系内流，引起

4、一系列生物学效应列生物学效应。Page 7激活辣椒素受体促进下颌下腺的分泌n 健康志愿者 自制的辣椒素含漱剂口内含漱min唾液和泪液的分泌 n 健康志愿者辣椒素霜剂涂抹于颌下区皮肤表面30min 下颌下腺的分 泌量n (对照组)健康志愿者利多卡因和丙胺卡因的皮肤表面麻醉剂预处理辣椒素霜剂涂抹于颌下区皮肤表面30min 下颌下腺的分 泌量n (对照组)健康志愿者利多卡因和丙胺卡因的皮肤表面麻醉剂预处理辣椒素受体的拮抗剂处理30min辣椒素霜剂涂抹于颌下区皮肤表面30min 下颌下腺的分 泌量n 离体家兔下颌下腺灌注辣椒素唾液剂量依赖性Page 8辣椒素临床应用n血管化自体下颌下腺移植是治疗重症角

5、结膜干燥症最重要的方式之一n选取接受血管 化自体下颌下腺移植并获得手术成功的重症角结膜 干燥症患者 42 例，在 “休眠期”使用辣椒素含漱剂或辣椒素霜剂，可明显 促进移植腺体的分泌 ，证实辣椒素刺激可以作为 “休眠期”促进移植腺体分泌、预防导管阻塞的有效 手段之一。 由于辣椒素霜剂使用方便，安全有效，目 前已经成为临床血管化自体下颌下腺移植术后“ 休 眠期”促进腺体分泌的常规用药Page 9激活辣椒素受体调控下颌下腺分泌的机制n 增加细胞内 Ca2+浓度 n 调控水通道蛋白介导的跨细胞转运n 调控紧密连接蛋白介导的旁细胞转运 Page 101.增加细胞内 Ca2+浓度Ca2+作为唾液腺细胞中的

6、第二信使可启动多种下游反应， 是调节水和电解质分泌的关键信号分 子 原代分离的乳兔和人下颌下腺细胞 培养液中辣椒素在激光共聚焦显微镜下可以观察到细胞内 Ca2+浓度明显升高 原代分离的乳兔和人下颌下腺细胞 培养液中辣椒素受体拮抗剂 CPZ 预处理细胞内 Ca2+浓度结论：结论： 激活辣椒素受体可引起下颌下腺细胞内 Ca2+ 浓度 增加 ，在大鼠下颌下腺腺泡细胞系 - 中 同样观察到此现象 。 进一步实验发现，无论细胞 培养液中有无Ca2+，辣椒素均能增加细胞内Ca2+含 量，表明激活辣椒素受体所增加的 Ca2+不仅来源于细胞外，并且还与细胞内钙库释放有关 。Page 11激活辣椒素受体调控下颌

7、下腺分泌的机制n 增加细胞内 Ca2+浓度 n 调控水通道蛋白介导的跨细胞转运n 调控紧密连接蛋白介导的旁细胞转运 Page 122.调控水通道蛋白介导的跨细胞转运 在唾液腺细胞中，水的快速跨细胞转运主要由水通道蛋白5（AQP5） 介导。 静息状态下，AQP5 弥散分布在细胞浆中。 激活毒蕈碱乙酰胆碱 受体可以引起大鼠腮腺中 AQP5 从细胞浆转位到细 胞顶膜，增加唾液的分泌量 ；在放射性损伤的唾液腺中可检测到 AQP5 的表达量降低 ；向犬肾上 皮细胞系 （ MSCK） 中转染重组 AQP5 可以增加水分泌 。 提示：增加 AQP5 含量或诱导 AQP5 发生胞膜转位能促进 唾液腺细胞的水转

8、运Page 13调控水通道蛋白介导的跨细胞转运n 我们在原代培养的乳兔下颌下腺细胞中，激活 辣椒素受体不仅可以上调 AQP5的表达，还可引起 AQP5从胞浆向胞膜的转位 。n 在转染了 AQP5 质粒的人下颌下腺细胞系 （ ）中，辣椒素刺激可增加细胞膜上 AQP5 的含量，并且这种作用可被 所阻断 。 此外，在家兔自体下 颌下腺移植术后早期低分泌的腺体中， AQP5 和蛋白的含量均显著降低， AQP5 的膜分布受到破坏并向胞浆中弥散，而局部皮肤涂抹辣椒素霜剂可 增加移植腺体的 AQP5 表达总量及胞膜 AQP5 的表达 结论：激活辣椒素受体可以调控激活辣椒素受体可以调控AQP5AQP5的表达和

9、分布，这可能是辣椒的表达和分布，这可能是辣椒素受体促进下颌下腺水分泌的重要分子机制素受体促进下颌下腺水分泌的重要分子机制Page 14激活辣椒素受体调控下颌下腺分泌的机制n 增加细胞内 Ca2+浓度 n 调控水通道蛋白介导的跨细胞转运n 调控紧密连接蛋白介导的旁细胞转运 Page 15 3.调控紧密连接蛋白介导的旁细胞转运n 紧密连接 是物质经旁细胞途径转运的结构和功能基础，广泛存在于所有上皮细胞 间连接的最顶端。n 紧密连接是由多种跨膜蛋白和胞浆蛋白构成的复合物，其中跨膜蛋白主要包括闭合 素（occludin)、claudin 家族分子（） 以 及黏附连接分子 (JAM）， 而胞浆蛋白主要由

10、闭锁小带蛋白（ZO13家族分子组成。 紧密连接中的胞浆蛋白作为桥梁连接跨膜蛋白和细胞骨架蛋白 （主要是纤维状肌动蛋白 F-action），从而形成跨膜蛋 白-胞浆蛋白-细胞骨架蛋白的网状结构 。跨膜蛋 白-胞浆蛋白-细胞骨架蛋白的网状结构 Page 16n 在原代培养的乳兔下颌下腺细胞中，辣椒素可 以选择性上调紧密连接分子 ZO-、claudin- 和- mRNA 和蛋白的表达，但不影响 claudin- 和-的表达；n 辣椒素还可引起细胞骨架蛋白 -actin从细 胞浆向细胞膜周的重新分布 n 在家兔自体下颌下腺移植术后 处于“ 休眠期” 的腺体中，可观察到紧密连接的宽度明显缩小，紧密连接的

11、结构发生 破坏，紧密连接分子 ZO-、claudin- 和- mRNA 和蛋白的表达量明显降低，-actin 在腺泡顶侧膜上的 表达量降低；而术后应用辣椒素治疗能够改善紧密连接的超微结构，上调上述 个紧密连接蛋白的表 达，并且恢复腺泡顶侧膜周 -actin 的含量Page 17n 在家兔下颌下腺组织中，辣椒素能够引起相对分子质 量为000的示踪分子异硫氰荧光素（FITC） 标记的右旋糖酐（ FITC-dextran）从腺泡基底侧经旁细胞途径进入腺泡腔内， 但对相对分子质量较大的0000 的 FITC-dextran 的通透无影响，提示激活辣椒素受体能够增加下颌下腺旁细胞途径的通透性Page 1

12、8 调控下颌下腺分泌的其他可能机制n 下颌下腺实质中除了腺泡细胞和导管细胞外，还包括肌上皮细胞和成纤维细胞等n 已有研究认 为，肌上皮细胞既具有上皮细胞的特性也具有平滑 肌细胞的一些特性，其收缩和舒张可能在腺体唾液 的排泄中发挥重要的作用n 在下颌下 腺肌上皮细胞中也存在辣椒素受体的表达，给予分 离的下颌下腺组织块进行辣椒素刺激，可以增加肌 上皮细胞中重要的收缩蛋白 的磷酸化，预孵 育 可阻断这一现象 。 该结果初步提示，激活 辣椒素受体引起的促分泌作用可能还与 介导 的肌上皮细胞收缩有关Page 19供应下颌下腺的血流量也是影响分泌的一个重 要因素n 当气温较低或者不运动时， 移植下颌下腺的分泌量相对较低，而局部热敷、体力 活动以及气温较高等情况下，移植下颌下腺的分泌 明显增加，推测下颌下腺的分泌量还与血流量有 关。 我们在家兔自体下颌下腺移植模型中采用彩色 多普勒仪证实，局部应用辣椒素霜剂可引起移植腺 体的血流量增加，这可能也是激活辣椒素受体促 分泌的一个机制。Page 20存在问题及今后工作的展望n 已有文献报道，磷酸化的 是其功能性形式 。 此外，最近研究发现， 在唾液腺细胞顶 膜上的分布还可细化分为脂筏区和非脂 筏区，只有在脂筏区内表达的 才具有水通道的功能 ，因此，受辣椒素受体调控 的 是否发生了磷酸化修饰，以及辣椒素受体 是否对 在微功能区中的分布有调控作