动物实验技术

1、1 动物实验技术动物实验技术 讲授：刘学旭2医学实验动物学医学实验动物学前言前言一个一个 、两个、两个中心中心 主题主题3一个中心一个中心标准化标准化4标准化标准化动物动物标准化标准化实验实验标准化标准化5实验动物动物动物实验实验两个主题两个主题6动物标准化动物标准化饲养管理饲养管理 （生产）（生产）营营 养养 基础基础疾病预防疾病预防 根本根本选种选种,育种育种 关键关键质量控制质量控制遗传控制遗传控制微生物微生物,寄生虫控制寄生虫控制环境控制环境控制营养控制营养控制7实验标准化实验标准化实验条件实验条件实验技术实验技术8动物实验动物实验 通过生物学手段，研究动物实验过程中的反通过生物学手段

2、，研究动物实验过程中的反应、表现、发生、发展规律以及有关的技术问题应、表现、发生、发展规律以及有关的技术问题,并将结果推论到人的过程。并将结果推论到人的过程。 9动物实验技术动物实验技术： 研究动物实验所需的各种条件、方法、技术，以保证取得科学的、完整的、先进的实验结果。10动物实验的要求动物实验的要求.1、科学性、科学性2、经济性、经济性3、伦理性、伦理性11科学性科学性要求要求 标准化的动物标准化的动物 标准化的实验条件标准化的实验条件 标准化的操作规程标准化的操作规程12经济性经济性要求要求 动物动物的选择的选择实验方法实验方法的选择的选择13伦理性伦理性要求要求动物福利动物福利3R原则

3、原则14 第一讲第一讲 实验前的准备实验前的准备内容内容:1、实验条件的准备、实验条件的准备2、实验技术的准备、实验技术的准备3、实验动物的准备、实验动物的准备15第一节第一节 动物实验条件的准备动物实验条件的准备一一 动物饲养条件的准备动物饲养条件的准备 动物实验过程中，需要一个观察动物动物实验过程中，需要一个观察动物反应的饲养场所，既反应的饲养场所，既动物观察室动物观察室。不同等级。不同等级的动物实验，需要不同环境条件的动物观察的动物实验，需要不同环境条件的动物观察室。室。 16（一）（一）普通动物实验观察室环境设施条普通动物实验观察室环境设施条件要求件要求 环境特点环境特点:1、开放系统

4、、开放系统2、环境和微生物控等级较低、环境和微生物控等级较低3、不能完全控制传染因子、不能完全控制传染因子。17（二）（二）清洁动物实验观察室环境设施条件要求清洁动物实验观察室环境设施条件要求 环境特点环境特点： 1、屏障或半屏屏障或半屏障系统障系统 2、所有实验用品所有实验用品经灭菌处理经灭菌处理 3、实验人员进出要严格按屏障系统操作规程实验人员进出要严格按屏障系统操作规程操作操作必需设备：必需设备：超净工作台超净工作台18 (三）三）SPF级以上动物实验观察室环境设级以上动物实验观察室环境设施条件要求施条件要求 环境特点环境特点： 1、屏障系统或隔离系统。、屏障系统或隔离系统。2、所有实验

5、用品经严格灭菌处理。所有实验用品经严格灭菌处理。 3、实验人员要严格按隔离系统操作规程操作。实验人员要严格按隔离系统操作规程操作。19清洁级和清洁级和SPF级动物实验饲养设施级动物实验饲养设施1、屏障系统饲养室、屏障系统饲养室2、空气层流架和、空气层流架和IVC系统系统3、有过滤帽的饲养盒、有过滤帽的饲养盒20二、实验场地的准备二、实验场地的准备实验操作室实验操作室动物手术室动物手术室细胞培养室细胞培养室其他特殊观察室其他特殊观察室21三三、实验药品、试剂的准备实验药品、试剂的准备22四、实验器械的准备四、实验器械的准备实验器械准备得充分、适当，有助于实验实验器械准备得充分、适当，有助于实验的

6、顺利完成。的顺利完成。不同类型、部位的实验使用的实验器械种不同类型、部位的实验使用的实验器械种类、数量不尽一致。类、数量不尽一致。实验器械包括完成实验所需要的检测仪器、实验器械包括完成实验所需要的检测仪器、实验时动物的固定器械、动物外科手术器实验时动物的固定器械、动物外科手术器械械.23 （一）（一） 实验仪器设备根据实验的目的、实验仪器设备根据实验的目的、要求、内容不同而不同。要求、内容不同而不同。实验前应检查实验前应检查是否准备就绪。是否准备就绪。24(二二) 常用动物外科手术器械常用动物外科手术器械（三）手术器械的消毒（三）手术器械的消毒 1、煮沸灭菌法、煮沸灭菌法、 2、 高压蒸气灭菌

7、法高压蒸气灭菌法 3、化学药品灭菌法。、化学药品灭菌法。25（四）敷料、手术巾、手术衣、帽、口（四）敷料、手术巾、手术衣、帽、口 罩的消毒罩的消毒26 五五. 手术人员的准备手术人员的准备 为了保证为了保证无菌无菌手术的进行手术的进行,手术人手术人员应作一系列的无菌的准备。不管做什么员应作一系列的无菌的准备。不管做什么等级动物的手术，都应该遵循无菌手术的等级动物的手术，都应该遵循无菌手术的基本原则。基本原则。 （一）手术所需人数（一）手术所需人数 （二）（二） 更衣更衣 （三）（三） 手、臂的清洁和消毒手、臂的清洁和消毒 27第二节第二节 动物实验技术的准备动物实验技术的准备一一 动物实验理论

8、知识的准备动物实验理论知识的准备（一）了解实验用动物的基础知识（一）了解实验用动物的基础知识 实验用动物包括实验动物、家畜家禽及实验用动物包括实验动物、家畜家禽及部分野生动物。特别是要熟悉动物的部分野生动物。特别是要熟悉动物的生物学生物学特性，解剖生理结构特性，解剖生理结构，这对开展动物实验研，这对开展动物实验研究是十分有益的。究是十分有益的。28（二）掌握动物实验的基础知识和（二）掌握动物实验的基础知识和基本技能基本技能 动物实验是一项系统的工作，涉及各种实验技术、实验方法、实验手段、以及相关的技术标准。29二二 、实验技能的准备、实验技能的准备 全程预试验：全程预试验：演习整个实验过程演习

9、整个实验过程局部预试验：局部预试验：训练技术难点训练技术难点预试验预试验.30 第三节第三节 实验动物的选择实验动物的选择 实验动物的选择实验动物的选择是是医学研究中首要考医学研究中首要考虑的问题。选择恰当与否关系到课题的质虑的问题。选择恰当与否关系到课题的质量，经费开支，研究途径及方法的简繁，量，经费开支，研究途径及方法的简繁，甚至影响到课题的成败及研究结果的正确甚至影响到课题的成败及研究结果的正确性。性。31一一 选择原则选择原则（一）相似性原则（一）相似性原则 在医学研究中选用那些生物学特性和解在医学研究中选用那些生物学特性和解剖生理特点与人类相似的实验动物更具有实际剖生理特点与人类相似

10、的实验动物更具有实际意义。意义。321、结构和功能的相似性、结构和功能的相似性 在可能的情况下，尽量选用那些在可能的情况下，尽量选用那些生物学生物学特性特性和和解剖生理特解剖生理特点与点与人类相似人类相似的实验动物的实验动物。一般说来，实验动物愈高等，进化程度愈。一般说来，实验动物愈高等，进化程度愈高，其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈高，其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类。接近人类。332、年龄状态的相似性、年龄状态的相似性 实验动物的寿命与人具有很大的差异实验动物的寿命与人具有很大的差异，但都可以找到与人的生长发育阶段相对，但都可以找到与人的生长发育阶段相对应的时期。应的时期。34

11、3、群体分布的相似性、群体分布的相似性 人类群体属于人类群体属于自然分布自然分布群体类型。在群体类型。在以群体为研究对象的课题中，要考虑选择以群体为研究对象的课题中，要考虑选择与人类群体与人类群体基因型基因型及及表现型表现型分布类型相似分布类型相似的动物。的动物。35 生态或健康状况的相似性生态或健康状况的相似性 在动物的在动物的遗传、环境和营养控制相遗传、环境和营养控制相同同的情况下，其的情况下，其微生物控制和健康状况微生物控制和健康状况对实验的影响就非常重要。对实验的影响就非常重要。 一般无菌动物是饲养在一般无菌动物是饲养在超常生态超常生态环环境条件的动物，用于一些特殊的研究。境条件的动物

12、，用于一些特殊的研究。 SPF动物和清洁动物是饲养在动物和清洁动物是饲养在健康生健康生态态环境条件下的动物，用于多数科学研环境条件下的动物，用于多数科学研究。究。 36 5. 疾病特点的相似性疾病特点的相似性 实验动物有许多实验动物有许多自发或诱发性疾病自发或诱发性疾病能能局部或全部局部或全部地反映与人类类似的疾病过程和地反映与人类类似的疾病过程和特点，可用于研究相关的人类疾病。特点，可用于研究相关的人类疾病。 37 操作实感的相似性操作实感的相似性 体型大的动物用于体型大的动物用于外科手术外科手术或或教学示教教学示教中比体型小的动物在中比体型小的动物在操作实感更接近人类。操作实感更接近人类。

13、小香猪38（二）特殊性原则（二）特殊性原则 1、动物解剖、生理的特殊性、动物解剖、生理的特殊性 不同种系的动物的不同种系的动物的解剖生理特征解剖生理特征既有既有共性又共性又存在差异存在差异，充分利用这些共性和差异，并符合，充分利用这些共性和差异，并符合实验目的要求，是保证实验成功的关键。实验目的要求，是保证实验成功的关键。392、对刺激反应的特殊性、对刺激反应的特殊性 不同种系的实验动物对相同因素的不同种系的实验动物对相同因素的刺激反刺激反应既有共同性的一面，也存在一些特殊反应应既有共同性的一面，也存在一些特殊反应，同样的刺激对一些动物敏感，但对另外一些动同样的刺激对一些动物敏感，但对另外一些

14、动物可能不敏感。物可能不敏感。因此在实验研究中选用那些有因此在实验研究中选用那些有特殊反应、对实验研究敏感的动物作为实验对特殊反应、对实验研究敏感的动物作为实验对象，也是保证实验成功的重要因素。象，也是保证实验成功的重要因素。40（三）标准化原则（三）标准化原则 标准化原则标准化原则是指动物实验中选择与课题是指动物实验中选择与课题研究的目的、内容、水平相匹配的标准化研究的目的、内容、水平相匹配的标准化的实验动物。的实验动物。只有选用经微生物、寄生虫只有选用经微生物、寄生虫学、遗传学、环境及营养控制的标准化实学、遗传学、环境及营养控制的标准化实验动物，才能排除生物因素、遗传因素、验动物，才能排除

15、生物因素、遗传因素、环境及营养因素对实验结果的干扰。环境及营养因素对实验结果的干扰。41（四）规格化原则（四）规格化原则 规格化原则规格化原则是指选择与实验要求一致是指选择与实验要求一致的动物规格。的动物规格。动物的规格是指对动物在动物的规格是指对动物在年龄年龄、体重体重、性别性别、生理及健康状况生理及健康状况等量和质的等量和质的规定。同种动物不同的规格对外界刺激的反规定。同种动物不同的规格对外界刺激的反应存在差异应存在差异。421、 不同的动物年龄，有不同的生物学不同的动物年龄，有不同的生物学特性，对实验刺激的反应也随着年龄的不特性，对实验刺激的反应也随着年龄的不同而有明显变化同而有明显变化

16、。2 标准化的健康实验动物的体重与标准化的健康实验动物的体重与年龄一般呈正相关，选择动物时，可按体年龄一般呈正相关，选择动物时，可按体重选择。重选择。年龄年龄 体重体重433 同种动物不同性别对外界刺激的反应不同种动物不同性别对外界刺激的反应不一致。因此，一般而言，实验若对动物性别无一致。因此，一般而言，实验若对动物性别无特殊要求，则宜选用雌雄各半。以避免由性别特殊要求，则宜选用雌雄各半。以避免由性别差异造成的差异。差异造成的差异。4 、 动物不同的生理状态，机动物不同的生理状态，机体对某些刺激的反应有较大的差异体对某些刺激的反应有较大的差异。性别性别 生理和健康状况生理和健康状况 44（五）

17、（五） 经济性原则经济性原则 经济原则经济原则是指在不影响实验质量的前提下，是指在不影响实验质量的前提下，尽量选用容易获得、价格便宜和饲养经济的动物。尽量选用容易获得、价格便宜和饲养经济的动物。45二二 常用试验中动物的选择常用试验中动物的选择46 毒理学研究中的选择毒理学研究中的选择 在试验品毒性试验研究中，选择何种实在试验品毒性试验研究中，选择何种实验动物取决于验动物取决于该动物对试验品的反应，以及该动物对试验品的反应，以及试验品在该动物体内的吸收、分布、代谢和试验品在该动物体内的吸收、分布、代谢和排泄与人类的异同程度。排泄与人类的异同程度。因此，作动物实验因此，作动物实验时，选择动物应当

18、注意以下几个方面的问题时，选择动物应当注意以下几个方面的问题。471、不同种属的动物对试验品的毒性反应有质、不同种属的动物对试验品的毒性反应有质 与量的区别。同一试验品对不同种属动物与量的区别。同一试验品对不同种属动物 的毒性反应是有差异的，甚至有本质的不的毒性反应是有差异的，甚至有本质的不 同。同。因此在毒理研究中，选择动物时，应因此在毒理研究中，选择动物时，应 至少选择两种动物进行实验且种属差异越至少选择两种动物进行实验且种属差异越 大越好。一般应选择一种啮齿类动物和一大越好。一般应选择一种啮齿类动物和一 种大动物。种大动物。482、通常情况下，动物的进化程度愈高，、通常情况下，动物的进化

19、程度愈高， 对试验品毒性反应愈敏感。对试验品毒性反应愈敏感。493、在选择动物规格方面，选择未成年的动、在选择动物规格方面，选择未成年的动 物、雌雄各半较为合适（对年龄有物、雌雄各半较为合适（对年龄有 特殊要求的除外）。特殊要求的除外）。生长期动物对毒生长期动物对毒 性反应比老年动物敏感。动物的性性反应比老年动物敏感。动物的性 别不同对试验品的毒性反应存在差异。别不同对试验品的毒性反应存在差异。50二二 实验动物的购入实验动物的购入 在动物实验的各项准备工作中，动物的购在动物实验的各项准备工作中，动物的购入是一个重要的环节。在购入动物前，应确入是一个重要的环节。在购入动物前，应确定购入动物的定

20、购入动物的种类、品系、规格、数量及动种类、品系、规格、数量及动物微生物控制等级物微生物控制等级等。购入动物时应注意以等。购入动物时应注意以下几个方面的问题。下几个方面的问题。511、购入或领取动物前，应检查各项准备、购入或领取动物前，应检查各项准备工作是否就绪，如饲养动物的工作是否就绪，如饲养动物的器具、器材器具、器材是否准备好，饲养室的是否准备好，饲养室的卫生和消毒卫生和消毒情况；情况；此外，还应检查动物的此外，还应检查动物的笼卡、实验记录本、笼卡、实验记录本、垫料、饲料、秤垫料、饲料、秤等实验必须品是否准备好。等实验必须品是否准备好。52 2、购入动物时，应向供应单位及时索取、购入动物时，

21、应向供应单位及时索取动物的动物的遗传背景、微生物背景、质量合格遗传背景、微生物背景、质量合格证、动物的年龄、体重证、动物的年龄、体重等资料。等资料。533、购入动物时，无论运输距离的远近，都、购入动物时，无论运输距离的远近，都应考虑运输环境的应考虑运输环境的温度、湿度、饮食以及温度、湿度、饮食以及途中污染和窒息死亡途中污染和窒息死亡等问题。等问题。544、购入清洁级以上的动物，应采用带有空、购入清洁级以上的动物，应采用带有空气过滤膜的气过滤膜的无菌运输罐无菌运输罐或或带过滤帽的笼盒带过滤帽的笼盒运输，严格检查其密封状况。运输，严格检查其密封状况。555 、新购进的动物不能直接进入动物实验室，、

22、新购进的动物不能直接进入动物实验室， 应将动物应将动物雌雄分开雌雄分开，并分笼在，并分笼在隔离隔离区饲养区饲养 一段时间，以便动物得以恢复体能并适应一段时间，以便动物得以恢复体能并适应 新的环境。新的环境。566、无论购入何种实验动物，都应同时、无论购入何种实验动物，都应同时 购入相应数量的购入相应数量的饲料和垫料。饲料和垫料。57三、动物模型准备三、动物模型准备58（一）（一） 概念概念 人类疾病动物模型人类疾病动物模型是指医学研究中建立的具有人类疾病表现的动物实验对象和相关材料。 使用动物模型动物模型是当代生物学、医学、生物学、医学、药学药学研究中一种便于认识客观事物的实验方法和手段。通过

23、模型的研究可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不容易排除的因素，以观察模型的反应。59 （二二）使用动物模型的意义使用动物模型的意义 1、 避免在人身上进行实验所带来的避免在人身上进行实验所带来的 风险。风险。 如：如：外伤、中毒、肿瘤和辐射病等。外伤、中毒、肿瘤和辐射病等。 602、应用动物模型可以随时复制的特、应用动物模型可以随时复制的特 点，得到平时临床上不易见到的疾点，得到平时临床上不易见到的疾 病。病。 如：如： 放射病、毒气中毒、烈性传放射病、毒气中毒、烈性传 染病、战伤等。染病、战伤等。613、用动物提供的模型可以克服人类某些疾病、用动物提供的模型可以克服人类某些疾病的潜伏期

24、长，病程长和发病率低的缺点。的潜伏期长，病程长和发病率低的缺点。 潜伏期长的疾病潜伏期长的疾病：肿瘤、慢性气管炎、动肿瘤、慢性气管炎、动 脉粥样硬化、遗传病等。脉粥样硬化、遗传病等。 发病率低的疾病发病率低的疾病：免疫性、代谢性、内分免疫性、代谢性、内分 泌和血液病等。泌和血液病等。624、 可以严格控制实验条件，排除各种干可以严格控制实验条件，排除各种干扰。扰。 临床上疾病较复杂，影响因素多，如：身临床上疾病较复杂，影响因素多，如：身患患多种疾病、病人的年龄、性别、体重、遗传多种疾病、病人的年龄、性别、体重、遗传、生活地区和规律，营养状况、生活地区和规律，营养状况等各不相同。等各不相同。 动

25、物复制的疾病模型，可以选择相同动物复制的疾病模型，可以选择相同品种、品品种、品系、性别、年龄、体重，以及相同的质量控制系、性别、年龄、体重，以及相同的质量控制和饲养条件等。和饲养条件等。635、 样品收集方便。样品收集方便。 收集动物疾病模型的样品不受时间和收集动物疾病模型的样品不受时间和条件的限制，可根据实验需要随时采集条件的限制，可根据实验需要随时采集。64 （三）三） 动物模型的分类动物模型的分类1、 按产生的原因分类按产生的原因分类.（1）诱发性或实验性动物模型）诱发性或实验性动物模型 （Experimental Animal Models）（2）自发性动物模型）自发性动物模型 （Sp

26、ontaneous Animal Models）（3）转基因和基因敲除动物模型）转基因和基因敲除动物模型(Transgenic animal,gene knock-out animal)(Transgenic animal,gene knock-out animal)65诱发性或实验性动物模型诱发性或实验性动物模型： 是指实验者使用物理的、化学的和生物是指实验者使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物造成动物组织、器官的致病因素作用于动物造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病时的功能、代谢障碍或形态结构方面的病变。时的功能、代谢障碍或

27、形态结构方面的病变。 . . 机械损伤、放射线损伤、气压、手术等机械损伤、放射线损伤、气压、手术等 化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧 伤、某种有机成分的增加或减少导致营养伤、某种有机成分的增加或减少导致营养 性疾病等。性疾病等。 细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等 。 物理因素物理因素 :化学因素化学因素 ：生物因素生物因素 ：复合因素复合因素 ： 多种因素诱导多种因素诱导.67自发性动物模型：自发性动物模型： 是指在自然情况下所形成的疾病模型或者经是指在自然情况下所形成的疾病模型或者经有意识的人工处置发生的疾病，并能稳定遗传有

28、意识的人工处置发生的疾病，并能稳定遗传给后代的疾病模型。包括人工培育的突变系和给后代的疾病模型。包括人工培育的突变系和近交系的各种疾病模型。近交系的各种疾病模型。 如：无胸腺裸鼠、高血压大鼠、肥胖症小鼠如：无胸腺裸鼠、高血压大鼠、肥胖症小鼠等。等。68 需要指出：需要指出：1、以上两种动物模型各有其、以上两种动物模型各有其优缺点优缺点。其优。其优 缺点只是缺点只是相对的相对的。2、很多疾病模型可用、很多疾病模型可用不同方式获得。不同方式获得。693、不同方法复制的动物模型在、不同方法复制的动物模型在发病机理发病机理和和 疾病内在特征疾病内在特征方面存在着各自的特点。方面存在着各自的特点。4、大

29、部分自发性动物模型是通过人为、大部分自发性动物模型是通过人为定向定向 培育培育而成的，与人类自然发生的疾病在而成的，与人类自然发生的疾病在 很多方面很多方面有差异有差异。70转基因和基因敲除动物模型：转基因和基因敲除动物模型： 转基因动物：转基因动物：是指用基因工程技术将外源目的基是指用基因工程技术将外源目的基因通过因通过生殖细胞或早期胚胎生殖细胞或早期胚胎导入胚胎染色体基因组内，导入胚胎染色体基因组内，使之稳定整合并能传给后代的一类动物。使之稳定整合并能传给后代的一类动物。 基因敲除动物：基因敲除动物：是指用相应的分子生物学技术将是指用相应的分子生物学技术将结构已知但功能未知的基因去除，或用

30、其他序列相近结构已知但功能未知的基因去除，或用其他序列相近的基因将其取代的一类动物的基因将其取代的一类动物。712、 按实验所用对象分类按实验所用对象分类.（1）整体动物模型）整体动物模型（2） 离体器官，组织动物模型离体器官，组织动物模型（3）细胞株动物模型）细胞株动物模型72 （四）（四） 动物模型的设计原则动物模型的设计原则 1、 相似形相似形 人类疾病动物模型应尽可能地相似人类疾病动物模型应尽可能地相似于人类疾病。于人类疾病。 如：大鼠的自发性高血压。如：大鼠的自发性高血压。 复制动物模型时，应注意动物的选择复制动物模型时，应注意动物的选择732、 重复性重复性 理想的动物模型应该是可

31、以重复的。理想的动物模型应该是可以重复的。 保证动物模型具有重复性的措施保证动物模型具有重复性的措施. （1）选用标准化的实验动物）选用标准化的实验动物（2）选用标准化的实验设施）选用标准化的实验设施（3）保证复制因素的一致性）保证复制因素的一致性743、 可靠性可靠性 复制的动物模型应可靠地反映人类疾病，复制的动物模型应可靠地反映人类疾病，疾病的主要症状和体征明显，不能出现与实疾病的主要症状和体征明显，不能出现与实验无关的疾病。验无关的疾病。 注意动物的注意动物的选择选择和动物的和动物的质量质量754、 适用性和可控性适用性和可控性 疾病模型应尽量考虑在今后临床上的应用和疾病模型应尽量考虑在

32、今后临床上的应用和便于控制其发展，以利于研究。便于控制其发展，以利于研究。如：雌激素终止大、小鼠早期妊娠的模型无实如：雌激素终止大、小鼠早期妊娠的模型无实 用性。用性。 动物动物+制模因子制模因子=结果散发或死亡结果散发或死亡 无法控无法控 制模型的发展方向和速度，无价值。制模型的发展方向和速度，无价值。 765、 易行性和经济性易行性和经济性 复制动物模型应尽量做到方法简单、复制动物模型应尽量做到方法简单、容易，合乎经济的原则。容易，合乎经济的原则。77（五（五 ） 影响动物模型制作的因素影响动物模型制作的因素78 1、致模因素对动物模型复制的影响：、致模因素对动物模型复制的影响： 致摸因素

33、的剂量及在相关动物上的反应致摸因素的剂量及在相关动物上的反应影响动物模型的复制。影响动物模型的复制。 因此造模时应注意因此造模时应注意.（1）致模因素的选择）致模因素的选择 （2） 致模因素的剂量致模因素的剂量（3）致模因素与模型的相关信息致模因素与模型的相关信息792、动物因素对动物模型复制的影响、动物因素对动物模型复制的影响 （1）动物种类的影响动物种类的影响（2） 动物品系的影响动物品系的影响 （3） 年龄和体重的影响年龄和体重的影响（4）性别因素的影响）性别因素的影响（5） 生理状态和健康因素影响生理状态和健康因素影响80动物种类的影响：动物种类的影响： 不同种的动物存在许多不同的特点

34、，动不同种的动物存在许多不同的特点，动物种类选择不当将影响动物模型的复制物种类选择不当将影响动物模型的复制。 81动物品系的影响：动物品系的影响： 同种不同品系的动物对致模因素的反应不同种不同品系的动物对致模因素的反应不一致一致。82年龄和体重的影响：年龄和体重的影响： 动物的寿命差异较大，解剖生理特征和动物的寿命差异较大，解剖生理特征和反应随年龄而明显变化，一般幼龄动物比反应随年龄而明显变化，一般幼龄动物比成年动物敏感，成年动物敏感，应根据实验要求，选择相应根据实验要求，选择相应年龄的动物复制模型（健康动物年龄与应年龄的动物复制模型（健康动物年龄与体重有相关性）。体重有相关性）。83性别因素

35、的影响：性别因素的影响： 同种、同品系，不同性别的动物，对同种、同品系，不同性别的动物，对某些反应不一致。某些反应不一致。84生理状态和健康因素影响生理状态和健康因素影响: 动物处在不同的生理状态和不同的健康状动物处在不同的生理状态和不同的健康状况对致模因素的反应差异很大。况对致模因素的反应差异很大。 如：如：肝功能衰竭肝功能衰竭动物模型，不能选用患严动物模型，不能选用患严重重球虫病球虫病的家兔，因球虫病影响肝功能。的家兔，因球虫病影响肝功能。 85 3、实验技术因素对动物模型复制的影实验技术因素对动物模型复制的影 响响 （1）实验季节）实验季节 不同季节，动物对某些反应可能不一不同季节，动物

36、对某些反应可能不一致，对跨季节的动物模型实验可能产生影致，对跨季节的动物模型实验可能产生影响。响。 86（2）昼夜不同的影响）昼夜不同的影响 实验动物的实验动物的体温、血糖、基础代谢体温、血糖、基础代谢的、的、内分泌等随昼夜的不同呈有节律的变化，内分泌等随昼夜的不同呈有节律的变化，在复制模型时要注意昼夜不同对模型的影在复制模型时要注意昼夜不同对模型的影响。响。87（3）麻醉深度的影响）麻醉深度的影响 不同的不同的麻醉药麻醉药、剂量剂量对动物麻醉效对动物麻醉效果有差异，这种差异会影响模型的复制。果有差异，这种差异会影响模型的复制。88（4）手术技巧的影响）手术技巧的影响 手术熟练，将减少对动物的

37、刺激手术熟练，将减少对动物的刺激，损伤和出血能提高模型的成功率。损伤和出血能提高模型的成功率。89（5）实验给药的影响）实验给药的影响 给药给药途径途径、剂量剂量和和熟练程度熟练程度不同会不同会对造模产生影响。对造模产生影响。90（6）对照组对造模的影响）对照组对造模的影响 对照是检测模型是否成功的重要手对照是检测模型是否成功的重要手段。段。914、环境、营养因素对复制动物模型的影响环境、营养因素对复制动物模型的影响 环境因素环境因素是影响造模及其实验结果的重要因素，是影响造模及其实验结果的重要因素，居住条件居住条件、光照光照、噪声噪声、氨浓度氨浓度、温度温度、湿度湿度、气气流速度流速度等任何

38、一项都不容忽视等任何一项都不容忽视. 营养因素营养因素对复制动物模型，特别是长期实验，对复制动物模型，特别是长期实验，影响显著，应予以重视。造模过程中应注意给水量影响显著，应予以重视。造模过程中应注意给水量充分和给予符合卫生标准的饮水。充分和给予符合卫生标准的饮水。92（六）动物模型的制作（六）动物模型的制作1、制模前的准备工作。、制模前的准备工作。2、制模动物的选择。、制模动物的选择。3、制模材料的选择。、制模材料的选择。4、制模方法的确定。、制模方法的确定。5、制模环境的确定。、制模环境的确定。 准备就绪，开始制模准备就绪，开始制模。93 实验准备工作就绪，接下来开始实验准备工作就绪，接下

39、来开始作动物实验，下堂课讲实验过程中的作动物实验，下堂课讲实验过程中的基本技术和方法。基本技术和方法。94第三讲第三讲 动物实验中的基本技术和方法动物实验中的基本技术和方法95 第一节第一节实验动物的抓取与固定实验动物的抓取与固定 抓取与固定抓取与固定是动物实验的一项基本技术，是动物实验的一项基本技术，其目的是使动物保持在安静的状态下，顺利地进行其目的是使动物保持在安静的状态下，顺利地进行各项实验。各项实验。不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。同种动物不同实验目的、实验内容，抓取与固定同种动物不同实验目的、实验内容，抓取与固定方法也可以不同。方法也可

40、以不同。不同实验者的操作习惯上也存在差异。不同实验者的操作习惯上也存在差异。96一、小鼠一、小鼠（一）、抓取（一）、抓取 用右手用右手拇指和食指的拇指和食指的指腹抓住尾部指腹抓住尾部中央提起或用中央提起或用两手捧起。两手捧起。97（二）、固定（二）、固定1、徒手固定、徒手固定（1）将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。（2）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。 98（3）翻转抓住颈背部的左手，右手拉）翻转抓住颈背部的左手，右手拉住鼠尾再用住鼠尾再用 左手的小指压住尾根部，使左手的小指压住尾根部，使整个小鼠呈

41、一条直线。整个小鼠呈一条直线。992、固定板（器）固定、固定板（器）固定 （1）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。 （2）准备一个）准备一个15-20cm，边缘钉有，边缘钉有5个钉子个钉子 的方木板。的方木板。 （3）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子 上，在上颚切上，在上颚切 齿处用细绳齿处用细绳 固定在木版前方的钉子上。固定在木版前方的钉子上。100 固定板固定适用于大多数动物手术。固定板固定适用于大多数动物手术。 小鼠固定器适用于尾静脉注射。小鼠固定器适用于尾静脉注射。101二、大鼠和地鼠二、大鼠和地鼠（一）抓取（一）抓

42、取 1、 周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一样抓住尾部提起。样抓住尾部提起。 1022、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作 。103注意：注意： 操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手套；操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手套；不能捉提尾尖，也不能长时

43、间将大鼠悬在空中。不能捉提尾尖，也不能长时间将大鼠悬在空中。 104（二）固定（二）固定1、徒手固定：、徒手固定：对体重对体重较小的大鼠可用拇指、较小的大鼠可用拇指、食指捏住大鼠耳部及颈食指捏住大鼠耳部及颈部皮肤，余下三指紧捏部皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤，置于掌心，住背部皮肤，置于掌心，调整好大鼠在手中的姿调整好大鼠在手中的姿势即可进行实验操作。势即可进行实验操作。如：灌胃、腹腔注射、如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等肌肉注射、皮下注射等实验实验 。1052、固定板固定：、固定板固定：方法与小鼠固定板固定相同，方法与小鼠固定板固定相同， 只是需选择更大一些的固定板。只是需选择更大一些的

44、固定板。3、固定器（盒）固定：固定器（盒）固定：方法与小鼠固定器（盒）方法与小鼠固定器（盒） 固定相同，只是固定器较小鼠的大。固定相同，只是固定器较小鼠的大。同样适用同样适用 于大鼠尾静脉注射。于大鼠尾静脉注射。 106三、豚鼠三、豚鼠（一）抓取（一）抓取 抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以用左手大把抓起。用左手大把抓起。107 注意：注意： 豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易造豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易造成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越

45、握越紧，在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越握越紧，否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。 108（二）固定（二）固定1、徒手固定：、徒手固定：用左手的食指和中指放在豚鼠用左手的食指和中指放在豚鼠颈背部两侧，拇指和无名指放在肋部，分别用手指颈背部两侧，拇指和无名指放在肋部，分别用手指挟住左右前肢抓起，然后反转左手，用右手的拇指挟住左右前肢抓起，然后反转左手，用右手的拇指和无名指挟住右后肢，用中指和无名指挟住左后肢，和无名指挟住右后肢，用中指和无名指挟住左后肢，使鼠体成为一条直线。使鼠体成为一条直线。1092、固定板（器）固定：、固定板（器）固定：与大、小鼠，豚鼠固

46、与大、小鼠，豚鼠固定板固定基本一致。定板固定基本一致。 110四、实验兔四、实验兔（一）抓取（一）抓取 抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。 111 注意：注意： 家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，也不能用单手只抓颈背部皮肤。也不能用单手只抓颈背部皮肤。 112（二）固定（二）固定1、徒手固定：、徒手固定：用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另用一只手抓住兔的

47、颈背部皮肤，另一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。113 也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳，也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳，大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将兔大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将兔固定。固定。此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及经口此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及经口给药。给药。1142、固定盒固定、固定盒固定 ：此固定方法适用于头、耳部位实此固定方法适用于头、耳部位实验。验。1153、固定板（台）固定、固定板（台）固定 ：此固定方法可使兔俯此固定方法可使兔俯卧、仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手

48、卧、仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术及其它实验操作。术及其它实验操作。 116五、实验犬五、实验犬（一）抓取（一）抓取 对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带制的长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带或粗绳缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈或粗绳缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈部，防止脱落部，防止脱落 。 注意：注意： 狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击性。对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。性。对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要

49、适中。在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要适中。 117（二）固定（二）固定 实验台固定：实验台固定：用特制的长柄铁钳夹住犬的颈用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上，部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上，再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。并将并将犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、背部位的实验。背部位的实验。 118119 不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的基

50、本基本原则是原则是：1.保证实验人员的安全。保证实验人员的安全。2.防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。 因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定动物的抓取与固定方法。动物的抓取与固定方法。120第二节第二节 实验动物的编号与标记实验动物的编号与标记动物实验时，当使用的动物数或实验分组数大于动物实验时，当使用的动物数或实验分组数大于1时，需要对动物个体间或组间区别开来，就需进时，需要对动物个体间或组间区别开来，就需进行编号与标记

51、。因此编号与标记的行编号与标记。因此编号与标记的目的目的就是动物个就是动物个体与组别的识别。体与组别的识别。SD大鼠121 标记的方法很多，良好的标记方法应满标记的方法很多，良好的标记方法应满足：足：号码清楚、持久、简便易认和适用，不影响号码清楚、持久、简便易认和适用，不影响实验结果，对动物的刺激小，标记物对动物无毒实验结果，对动物的刺激小，标记物对动物无毒性。性。编号方法无定法，原则是使实验者能够识别编号方法无定法，原则是使实验者能够识别动物个体和组别。现介绍几种常用的标记和编号动物个体和组别。现介绍几种常用的标记和编号方法。方法。122染色法染色法（一）染色法：（一）染色法：是用化学试剂在

52、动物身体明是用化学试剂在动物身体明显部位如被毛、四显部位如被毛、四 肢等处进行涂染，以涂染肢等处进行涂染，以涂染的部位或颜色来区别的部位或颜色来区别 不同个体、组别，是动不同个体、组别，是动物实验中最常用、最容易掌握的方法。物实验中最常用、最容易掌握的方法。123家兔针刺法家兔针刺法（二）针刺法：（二）针刺法：用用人工针刺的方法，在动物无体毛或明显部位人工针刺的方法，在动物无体毛或明显部位 ，如耳、面，如耳、面鼻和四肢部位，拔去被毛，人工针刺鼻和四肢部位，拔去被毛，人工针刺 号码，刺后涂以酒精黑墨即可。号码，刺后涂以酒精黑墨即可。此方此方 法适用于兔及大、中型动物。法适用于兔及大、中型动物。1

53、24（三）打耳孔法：（三）打耳孔法：用动物编号的耳孔机直接在动物耳朵上打孔或打成缺口编号用动物编号的耳孔机直接在动物耳朵上打孔或打成缺口编号，也可用剪刀将耳缘成缺口，根据孔或缺口的位置、数量来标记，也可用剪刀将耳缘成缺口，根据孔或缺口的位置、数量来标记 动物个体的方动物个体的方法。法。常用于实验猪的标记。常用于实验猪的标记。125（四）标签号牌法：（四）标签号牌法：用塑料、金属或木等材料制成号牌固用塑料、金属或木等材料制成号牌固 定在动物身体某定在动物身体某一部位或饲养圈、笼上，以标识动物个体、组别的方法。一部位或饲养圈、笼上，以标识动物个体、组别的方法。如耳标签、戴项圈如耳标签、戴项圈、戴脚

54、圈等。常用于大、戴脚圈等。常用于大 动物的标记。动物的标记。126第三节实验动物的给药途径与方法第三节实验动物的给药途径与方法实验动物的给药方法主要有：实验动物的给药方法主要有：注射法和胃肠给药注射法和胃肠给药法两种，此外还有用于皮肤的涂布给药法和用于呼法两种，此外还有用于皮肤的涂布给药法和用于呼吸道的吸入给药法。吸道的吸入给药法。 裸鼠127一一. 注射分为：注射分为： 皮内注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、静脉注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、关节腔注射和心内注射。腰椎内注射、关节腔注射

55、和心内注射。 在实验过程中，应根据实验目的、动物种类在实验过程中，应根据实验目的、动物种类、药物类型选择给药途径和方法，若是临床前药物、药物类型选择给药途径和方法，若是临床前药物的动物实验，给药方法应与人的给药途径一致。的动物实验，给药方法应与人的给药途径一致。128129130131二二.胃肠给药法分为胃肠给药法分为： 自动口服给药自动口服给药 灌胃给药灌胃给药 直肠给药。直肠给药。132 表表 常用动物一次灌胃能耐受的最大容积常用动物一次灌胃能耐受的最大容积*动物种类动物种类 体重（体重（g） 最大容积最大容积小鼠小鼠 30 1.0 25-30 0.8 20-24 0.5大鼠大鼠 300

56、8.0 250-300 6.0 200-249 4.0-5.0 100-199 3.0豚鼠豚鼠 300 6.0. 250-300 4.0-5.0家兔家兔 3500 200 2500-3500 150 2000-2400 100猫猫 3000 100-150 2500-3000 50-80犬犬 10,000-15,000 200-500133134第四节第四节实验动物血液和尿液的采集实验动物血液和尿液的采集一一 动物血液的采集方法动物血液的采集方法 实验动物血液的采集方法有很多。实验动物血液的采集方法有很多。（一）（一） 按采血部位不同可分为：按采血部位不同可分为： 眼部采血、耳部采血、心脏采血

57、、大血管采眼部采血、耳部采血、心脏采血、大血管采血及尾部采血等。血及尾部采血等。 小香猪135（二）按采血使用的手段不同可分为：（二）按采血使用的手段不同可分为： 鼠尾刺血、剪尾采血、眼眶静脉丛采血、鼠尾刺血、剪尾采血、眼眶静脉丛采血、心脏采血、断头采血、颈静（动）脉采血、腹主心脏采血、断头采血、颈静（动）脉采血、腹主动（静）脉采血、耳缘剪口采血、耳静脉采血、动（静）脉采血、耳缘剪口采血、耳静脉采血、后肢外侧小隐静脉、前肢内侧皮下头静脉采血、后肢外侧小隐静脉、前肢内侧皮下头静脉采血、翼下采血等。翼下采血等。 采血时，应根据动物的种类，检验项目、采血时，应根据动物的种类，检验项目、方法及需采血量

58、确定采血的部位和方法。方法及需采血量确定采血的部位和方法。136137138139140表表 常用动物的最大安全采血量常用动物的最大安全采血量动物种类动物种类 最大安全采血量最大安全采血量 （ml） 最小致死采血量（最小致死采血量（ml） 小鼠小鼠 0.1 0.3 大鼠大鼠 1 2 豚鼠豚鼠 5 10 家兔家兔 10 40 狗狗 50 300 猴猴 15 60141 二、二、 尿液采集尿液采集（一）、一）、 代谢笼采集代谢笼采集 代谢笼的特点是能代谢笼的特点是能将动物排泄的大小便分开，达到采集尿液的将动物排泄的大小便分开，达到采集尿液的目的。目的。此法常用于大鼠、小鼠、豚鼠、兔等此法常用于大鼠

59、、小鼠、豚鼠、兔等中小型动物的尿液采集。中小型动物的尿液采集。（二）、导尿法采集（二）、导尿法采集 在动物的尿道或输尿在动物的尿道或输尿管内插一根塑料导管采集尿液。管内插一根塑料导管采集尿液。此法适用于此法适用于兔、犬、猫等。兔、犬、猫等。142第五节实验动物的麻醉方法第五节实验动物的麻醉方法 实验动物的麻醉实验动物的麻醉就是用物理或化学的方法，就是用物理或化学的方法，使动物全身或局部暂时痛觉消失或迟钝，以利于实使动物全身或局部暂时痛觉消失或迟钝，以利于实验操作。验操作。比格犬143（一）全身麻醉：（一）全身麻醉：指麻醉药通过呼吸道吸入，静脉、肌肉或腹腔注射，使动物指麻醉药通过呼吸道吸入，静脉

60、、肌肉或腹腔注射，使动物产生短时间的意识丧失，痛觉消失，肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制产生短时间的意识丧失，痛觉消失，肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。现象。分为吸入麻醉和注射麻醉。分为吸入麻醉和注射麻醉。1吸入麻醉吸入麻醉 指挥发性麻醉剂经动物呼吸道吸入体内从而产生麻醉效果的方法指挥发性麻醉剂经动物呼吸道吸入体内从而产生麻醉效果的方法。常见的吸入麻醉剂有乙醚。常见的吸入麻醉剂有乙醚。一一麻醉类型及方法麻醉类型及方法 实验动物的麻醉分为实验动物的麻醉分为全身麻醉全身麻醉和和局局部麻醉两种部麻醉两种类型。类型。144 （1） 步骤与方法：步骤与方法： 1） 准备容器准备容器:小型实