实验生理科学：动物实验的基本操作技术

1、动物实验的基本操作技术动物实验的基本操作技术课程内容课程内容1.1. 动物的饲养动物的饲养（ mainly by self-study mainly by self-study ）2.2. 动物的管理动物的管理 ( mainly by self-study )( mainly by self-study )3.3. 动物实验操作规范动物实验操作规范 ( key point )( key point )4.4. 科研经验分享科研经验分享 ( key point )( key point )一、一、 饲饲 养养v1 1、饲料、饲料v 1.11.1饲料的一般要求饲料的一般要求v 饲料应写明供应单位饲

2、料应写明供应单位, ,而且供应单位必须而且供应单位必须取得实验动物配合饲料生产取得实验动物配合饲料生产许可证许可证；v 饲料应清洁饲料应清洁干净、新鲜干净、新鲜、无杂质、无杂质、无异味、无霉变无异味、无霉变、无发酵、无虫蛀、无发酵、无虫蛀及鼠咬。不得加入抗生素、驱虫剂、防腐素、色素、促生长剂以及激及鼠咬。不得加入抗生素、驱虫剂、防腐素、色素、促生长剂以及激素等添加剂；素等添加剂； v 实验动物饲料中营养成分指标应满足不同动物需求实验动物饲料中营养成分指标应满足不同动物需求( (见见GB14924.3-7-GB14924.3-7-2001)2001)；v 饲料应定期监测，主要包括营养成分的测定和

3、微生物的检测。饲料应定期监测，主要包括营养成分的测定和微生物的检测。v 购买饲料时，需要分清楚购买饲料时，需要分清楚饲料的种类饲料的种类：维持饲料与生产、繁殖饲料。：维持饲料与生产、繁殖饲料。v1.2 1.2 实验动物特殊需求实验动物特殊需求v 小鼠大鼠配合饲料：饲料要求有一定的小鼠大鼠配合饲料：饲料要求有一定的硬度硬度。正常饲育。正常饲育外，通常外，通常定期补充定期补充蛋黄、黄豆等高蛋白物质和葵花子等物蛋黄、黄豆等高蛋白物质和葵花子等物质。可体内合成质。可体内合成c cv 兔配合饲料：对兔配合饲料：对粗纤维粗纤维要求含量高，可适当添加一些青要求含量高，可适当添加一些青绿饲料或干绿饲料，绿饲料

4、或干绿饲料，如大白菜如大白菜。v 豚鼠配合饲料：自身不能合成豚鼠配合饲料：自身不能合成VcVc，需补充，通常通过添加，需补充，通常通过添加青菜来实现，也可在饮水中添加，可同时添加复合青菜来实现，也可在饮水中添加，可同时添加复合VbVb。v 犬配合饲料：犬配合饲料：VaVa需求量大，要求需求量大，要求粗脂肪粗脂肪含量高，通常可以含量高，通常可以补充一些煮熟的动物内脏或脂肪来实现。补充一些煮熟的动物内脏或脂肪来实现。v 实验猴配合饲料：自身不能合成实验猴配合饲料：自身不能合成VcVc，应补充，应补充VcVc，多给一些，多给一些水果、蔬菜及玉米等。水果、蔬菜及玉米等。一、一、 饲饲 养养2 2、饲喂

5、、饲喂v 定时定量定时定量喂养。喂养。 v 专人喂养，以便更好地掌握每个动物群体的食量变化，控专人喂养，以便更好地掌握每个动物群体的食量变化，控制好饲料的用量，做到既制好饲料的用量，做到既不浪费不浪费，又能较好地满足动物正，又能较好地满足动物正常生长发育的需要。常生长发育的需要。3 3、饮水、饮水v 清洁级以上动物饮用水应进行高压灭菌处理或过滤处理，清洁级以上动物饮用水应进行高压灭菌处理或过滤处理，并随时注意水质变化，定期检测水质。并随时注意水质变化，定期检测水质。v 大中动物房舍内应设自动饮水设备，要让每只动物能饮到大中动物房舍内应设自动饮水设备，要让每只动物能饮到足够的水。足够的水。v 屏

6、障动物房需用高压灭菌水或酸化水，也可超滤，但是要屏障动物房需用高压灭菌水或酸化水，也可超滤，但是要注意补充矿物质。注意补充矿物质。一、一、 饲饲 养养1 1、实验动物的一般管理要求、实验动物的一般管理要求v 环境控制环境控制：GB14925.1-2001GB14925.1-2001v 建立建立定期消毒定期消毒制度制度v 建立严格的建立严格的检验检疫检验检疫制度制度v 观察记录：摄食情况、饮水情况、精神状态、粪尿形态、摄食情况、饮水情况、精神状态、粪尿形态、皮肤被毛光泽等皮肤被毛光泽等v 做好疾病的预防与控制，严格隔离治疗。如犬的免疫制度：v 初次免疫（首免）：出生初次免疫（首免）：出生5-65

7、-6周，接种六联苗或七联苗；周，接种六联苗或七联苗；v 二次免疫（二免）：首免二次免疫（二免）：首免2 2周后，接种六联苗或七联苗；周后，接种六联苗或七联苗；v 三次免疫（三免）：二免三次免疫（三免）：二免2 2周后，接种六联苗或七联苗；周后，接种六联苗或七联苗；v 种犬免疫（种犬免疫（1 1岁以上）：每年两次（春、秋）注射疫苗。岁以上）：每年两次（春、秋）注射疫苗。v 如有发文章的需要，可要求动物实验中心提供如有发文章的需要，可要求动物实验中心提供“实验动物质量实验动物质量合格证明合格证明”2 2、实验动物从业人员个人防护要求、实验动物从业人员个人防护要求v 在实验室工作时，必须穿着合适的工

8、作服或防护服。v 在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。v 在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。v 为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。v 严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。v 不得在实验室内穿露脚趾的鞋。v 禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。v 禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。v 在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。1.1 1.1 与

9、国际接轨与国际接轨“3R3R”1)1)减少减少(Reduction)(Reduction)：提高动物质量，减少试验用提高动物质量，减少试验用的动物数量和试验的次数，获得同样多的信息。的动物数量和试验的次数，获得同样多的信息。 2)2)替代（替代（ReplacementReplacement）：）：尽可能采用可以替代实尽可能采用可以替代实验动物的替代物。如：细胞组织培养、计算机模验动物的替代物。如：细胞组织培养、计算机模拟、物理、化学方法、细胞芯片拟、物理、化学方法、细胞芯片 3)3)优化（优化（RefinementRefinement）：）：人道主义管理，提倡实验人道主义管理，提倡实验动物福利

10、保护，严禁粗暴对待或虐待实验动物，动物福利保护，严禁粗暴对待或虐待实验动物，减少动物在实验过程中的痛苦与不安。减少动物在实验过程中的痛苦与不安。 1.1.实验动物的选择实验动物的选择1.2 1.2 实验动物选择原则实验动物选择原则1 1）从微生物学和寄生虫学标准去选择实验动物。从微生物学和寄生虫学标准去选择实验动物。 目的：使实验研究处于没有或很少外源干扰的情况下进目的：使实验研究处于没有或很少外源干扰的情况下进行，使实验结果正确可信。按微生物学和寄生虫学标准选择：行，使实验结果正确可信。按微生物学和寄生虫学标准选择：普通级、清洁级、普通级、清洁级、SPFSPF动物、无菌动物动物、无菌动物2)

11、2)从遗传学的观点来选择实验动物：从遗传学的观点来选择实验动物： 近交系动物、突变系动物近交系动物、突变系动物3)3)从效果上来选择实验动物：从效果上来选择实验动物： 效果比较就是要与人比较，是否接近与人的条件。一般效果比较就是要与人比较，是否接近与人的条件。一般说来实验动物愈高等，进化程度愈高，其功能、代谢、结构说来实验动物愈高等，进化程度愈高，其功能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类。如诱发性动物的高血脂症或动愈复杂，反应就愈接近人类。如诱发性动物的高血脂症或动脉粥样硬化，猴的病变与人相似。脉粥样硬化，猴的病变与人相似。 在不影响实验质量的前提下，应选择在不影响实验质量的前提下，应选择最

12、易获得、最经济、最易饲养管理的动物。的动物。1.1.实验动物的选择实验动物的选择1.1.实验动物的选择实验动物的选择1.3 1.3 具体考虑到：具体考虑到： 种属、品系、个体（性别、年龄、生理状态、健康状种属、品系、个体（性别、年龄、生理状态、健康状况）况） 如半数致死量测定如半数致死量测定-昆明种小鼠昆明种小鼠 雌雄各半雌雄各半 2025g2025g 判断哺乳动物健康状况的外部特征：判断哺乳动物健康状况的外部特征：1.1.一般状态：一般状态：发育良好，眼睛有神，爱活动，反应灵活，食发育良好，眼睛有神，爱活动，反应灵活，食欲良好。欲良好。2.2.头部：眼结膜补充血，瞳孔清晰。眼鼻部均无分泌物流

13、出。头部：眼结膜补充血，瞳孔清晰。眼鼻部均无分泌物流出。呼吸均匀，无罗音，无鼻翼扇动。不打喷嚏。呼吸均匀，无罗音，无鼻翼扇动。不打喷嚏。3.3.皮毛：皮毛清洁柔软而有光泽，无脱毛，无蓬乱现象。皮皮毛：皮毛清洁柔软而有光泽，无脱毛，无蓬乱现象。皮肤无真菌感染表现。肤无真菌感染表现。4.4.腹部：不膨大，肛门区清洁无稀便，无分泌物。腹部：不膨大，肛门区清洁无稀便，无分泌物。5.5.外生殖器：无损伤，无脓痂，无分泌物。外生殖器：无损伤，无脓痂，无分泌物。6.6.爪趾：无溃疡，无结痂。爪趾：无溃疡，无结痂。1.1.实验动物的选择实验动物的选择常见医药学中实验动物的选择常见医药学中实验动物的选择药物及研

14、究方向药物及研究方向常用动物常用动物药物代药物代谢实验谢实验药物排泄试验药物排泄试验大鼠大鼠药物动力学参数测定药物动力学参数测定犬、猴等大动物，可多次采样犬、猴等大动物，可多次采样一般药理研究一般药理研究小鼠、大鼠、猫、狗、性别不限。但观察循环和小鼠、大鼠、猫、狗、性别不限。但观察循环和呼吸系统时一般宜用小鼠和兔呼吸系统时一般宜用小鼠和兔神经系统神经系统的药物的药物 镇静催眠药研究镇静催眠药研究 小鼠，便于分组实验小鼠，便于分组实验 解热药研究解热药研究首选家兔，其对热原质极为敏感首选家兔，其对热原质极为敏感心血管系心血管系统的药物统的药物 抗心律失常药物抗心律失常药物 豚鼠豚鼠 降压药物降压

15、药物 犬、猫、或大鼠犬、猫、或大鼠 呼吸系统呼吸系统的药物的药物 镇咳药筛选镇咳药筛选 豚鼠豚鼠 祛痰药物祛痰药物 雄性小鼠、兔或猫雄性小鼠、兔或猫 消化道系消化道系统统 胃肠解痉药胃肠解痉药 大鼠、豚鼠、家兔大鼠、豚鼠、家兔 催吐药催吐药 犬、猫、鸽犬、猫、鸽 利尿药或抗利尿药研究利尿药或抗利尿药研究 犬、大鼠或兔犬、大鼠或兔 精神药物精神药物研究研究 抗焦虑、抗抑郁药抗焦虑、抗抑郁药 宜选用大、小鼠，长期实验应尽选用雄性，因雄宜选用大、小鼠，长期实验应尽选用雄性，因雄性动物耐受性强性动物耐受性强 2.动动 物物 实实 验验 技技 术术v实验动物的抓取和固定实验动物的抓取和固定v实验动物的编

16、号实验动物的编号v实验动物的麻醉方法实验动物的麻醉方法v实验动物的给药方法实验动物的给药方法v实验动物的液体样品采集方法实验动物的液体样品采集方法 v 实验动物的处死、剖检与取样实验动物的处死、剖检与取样v尸体、废弃物的处理尸体、废弃物的处理 实验前多了解动物可事半功倍实验前多了解动物可事半功倍实验前先查资料，如习性，生理周期实验前先查资料，如习性，生理周期大鼠大鼠v 繁殖快。繁殖快。2 2月龄时性成熟，性周期月龄时性成熟，性周期4 4天左右，妊娠期天左右，妊娠期2020（19192222），哺乳期），哺乳期2121天，每天产仔平均天，每天产仔平均8 8只，为全年、多发只，为全年、多发情性动物

17、。情性动物。v 喜啃咬、夜间活动、肉食，白天喜欢挤在一起休息，晚上喜啃咬、夜间活动、肉食，白天喜欢挤在一起休息，晚上活动大，吃食多，因此白天除实验必须抓取外，一般不要抓活动大，吃食多，因此白天除实验必须抓取外，一般不要抓弄它。食性广泛，喜吃各种煮熟的动物肉。对光照较敏感。弄它。食性广泛，喜吃各种煮熟的动物肉。对光照较敏感。v 性情较凶猛、抗病力强大鼠门齿较长，激恕、袭击抓捕时性情较凶猛、抗病力强大鼠门齿较长，激恕、袭击抓捕时易咬手，尤其是哺乳期的母鼠更凶些，常会主动咬工作人员易咬手，尤其是哺乳期的母鼠更凶些，常会主动咬工作人员喂饲时伸入鼠笼的手。对外环境适应性强，成年鼠很少患病。喂饲时伸入鼠笼

18、的手。对外环境适应性强，成年鼠很少患病。一般情况下侵袭性不强，可在一笼内大批饲养，也一般情况下侵袭性不强，可在一笼内大批饲养，也不会咬人不会咬人 ？ 。v 不能呕吐：因此药理实验时应予注意不能呕吐：因此药理实验时应予注意 v 实验用途广泛实验用途广泛小鼠小鼠v 成熟早，繁殖力强。成熟早，繁殖力强。6 67 7周龄时性成熟，雌性周龄时性成熟，雌性35355050日龄，雄性日龄，雄性45456060日龄；体成熟雌性为日龄；体成熟雌性为65657575日龄，雄性为日龄，雄性为70708080日龄；性周期为日龄；性周期为4 45 5天，天，妊娠期为妊娠期为19192121天；哺乳期为天；哺乳期为202

19、02222天；每胎产仔数为天；每胎产仔数为8 81515只，一年产只，一年产仔胎数仔胎数6 61010胎，属全年、多发情性动物，繁殖率很高，生育期为一年。胎，属全年、多发情性动物，繁殖率很高，生育期为一年。v 体形小，易于饲养管理。一只小鼠出生时体形小，易于饲养管理。一只小鼠出生时1.51.5克左右，哺乳一月后可达克左右，哺乳一月后可达12121515克，哺乳、饲养克，哺乳、饲养1.51.52 2月即可达月即可达2020克以上，可供实验需要，在短时克以上，可供实验需要，在短时间内可提供大量的实验动物。饲料消耗量少，需要的饲养条件也较简单，间内可提供大量的实验动物。饲料消耗量少，需要的饲养条件也

20、较简单，因个体小，可节省饲养场地。因个体小，可节省饲养场地。v 性情温顺，胆小怕惊。小鼠经长期的培育，性情温顺，易于抓捕，不会性情温顺，胆小怕惊。小鼠经长期的培育，性情温顺，易于抓捕，不会主动咬人，但在雌鼠哺乳期间或雄鼠打架时主动咬人，但在雌鼠哺乳期间或雄鼠打架时“捉弄捉弄”则会咬人，一般很少则会咬人，一般很少相互斗架，操作起来很方便，是理想的实验动物。小鼠在罐、盒内饲养时，相互斗架，操作起来很方便，是理想的实验动物。小鼠在罐、盒内饲养时，是很温顺的，但让其到罐外，很快就恢复到处乱窜的野性。雌鼠吃食仔鼠是很温顺的，但让其到罐外，很快就恢复到处乱窜的野性。雌鼠吃食仔鼠与其胆小怕惊有关。与其胆小怕

21、惊有关。v 体小娇嫩，不耐饥饿，不耐冷热，对环境的适应性差，对疾病的抵抗力体小娇嫩，不耐饥饿，不耐冷热，对环境的适应性差，对疾病的抵抗力也差。也差。v 便于提供同胎和不同品系动物便于提供同胎和不同品系动物。可根据实验要求选择不同品系或。可根据实验要求选择不同品系或同胎小鼠做实验，也可选择同一品种（或品系）、同年龄、同体重、同性同胎小鼠做实验，也可选择同一品种（或品系）、同年龄、同体重、同性别的小鼠做实验，由于动物遗传均一，个体差异小，实验结果精确可靠。别的小鼠做实验，由于动物遗传均一，个体差异小，实验结果精确可靠。 家兔家兔v 家兔体小力弱、胆小怕惊、怕热、怕潮，喜欢安静、清洁、家兔体小力弱、

22、胆小怕惊、怕热、怕潮，喜欢安静、清洁、干燥、凉爽的环境，不能忍受污秽的条件。干燥、凉爽的环境，不能忍受污秽的条件。v 食草类单胃动物。饲养原则是以青粗食米为主，精饲料为辅，食草类单胃动物。饲养原则是以青粗食米为主，精饲料为辅，对洁净度要求高，易患腹泻病对洁净度要求高，易患腹泻病。喜欢独居，白天活动少，都处。喜欢独居，白天活动少，都处于假眠或休息状态，夜间活动大，吃食多。有啃木、扒土的习于假眠或休息状态，夜间活动大，吃食多。有啃木、扒土的习惯。惯。青菜不能用自来水洗，可以不洗青菜不能用自来水洗，可以不洗v 食粪癖，喜直接从肛门口吃粪，有时晚上也吃自己白天的粪食粪癖，喜直接从肛门口吃粪，有时晚上也

23、吃自己白天的粪便。因其下段肠管可吸收粪便中消化吸收的粗蛋白和维生素。便。因其下段肠管可吸收粪便中消化吸收的粗蛋白和维生素。如用兔进行营养实验时，应控制其食粪习性，否则会影响实验如用兔进行营养实验时，应控制其食粪习性，否则会影响实验结果。哺乳期仔兔也有吃食兔粪的习性，故在断奶兔粪便中，结果。哺乳期仔兔也有吃食兔粪的习性，故在断奶兔粪便中，可以普遍查出球虫卵囊。可以普遍查出球虫卵囊。v 刺激性排卵类型动物。雌兔每两周发情一次，每次持续刺激性排卵类型动物。雌兔每两周发情一次，每次持续3 34 4天，发情期间，雌兔卵巢内一次能成熟许多卵子，但这些卵子天，发情期间，雌兔卵巢内一次能成熟许多卵子，但这些卵

24、子并不排出，只有经雄兔的交配刺激后隔并不排出，只有经雄兔的交配刺激后隔10101212小时才能排出。小时才能排出。v 颈有减压神经独立分支颈有减压神经独立分支 ，对体温变化十分灵敏。最易产生，对体温变化十分灵敏。最易产生发热反应，而且发热反应典型发热反应，而且发热反应典型豚鼠豚鼠v 喜群居，有尖锐短爪，有抓人，不喜于攀登和跳跃，故可放无盖小水喜群居，有尖锐短爪，有抓人，不喜于攀登和跳跃，故可放无盖小水泥池中进行饲养。习性温顺，胆小易惊，有时发出吱吱的尖叫声，喜干泥池中进行饲养。习性温顺，胆小易惊，有时发出吱吱的尖叫声，喜干燥清洁的生活环境。燥清洁的生活环境。v 嗅觉、听觉较发达，对各种刺激均有

25、极高的反应，如对音响、嗅味和嗅觉、听觉较发达，对各种刺激均有极高的反应，如对音响、嗅味和气温突变等均极敏感，故在空气混浊和寒冷环境中易发生肺炎，并引起气温突变等均极敏感，故在空气混浊和寒冷环境中易发生肺炎，并引起流产，受惊时亦易流产。流产，受惊时亦易流产。v 草食性动物，嚼肌发达而胃壁非常薄，盲肠特别膨大，约占腹腔的草食性动物，嚼肌发达而胃壁非常薄，盲肠特别膨大，约占腹腔的1/31/3容积，粗纤维需要量较家兔还要多，但不如家兔易患腹泻病。容积，粗纤维需要量较家兔还要多，但不如家兔易患腹泻病。v 豚鼠食量较大，对习惯了的食欲旺盛，但对变质的饲料特别敏感，常豚鼠食量较大，对习惯了的食欲旺盛，但对变

26、质的饲料特别敏感，常因此减食或废食，甚至引起流产。对抗菌素也特别敏感，投药后容易引因此减食或废食，甚至引起流产。对抗菌素也特别敏感，投药后容易引起死亡和肠炎，如使用青霉素，不论剂量多大，途径如何，均可引起小起死亡和肠炎，如使用青霉素，不论剂量多大，途径如何，均可引起小肠和结肠炎，甚至使其发生死亡。对青霉素的敏感性比小鼠高肠和结肠炎，甚至使其发生死亡。对青霉素的敏感性比小鼠高10001000倍，倍，故用青霉素治疗时应特别小心。与大鼠和小鼠相反，它夜间少食少动。故用青霉素治疗时应特别小心。与大鼠和小鼠相反，它夜间少食少动。v 豚鼠属于晚成性动物，即母鼠怀孕期较长，为豚鼠属于晚成性动物，即母鼠怀孕期

27、较长，为6363（59597272）天，胚胎）天，胚胎在母体发育完全，出生后即已完全长成，全身被毛，眼张开，耳竖立，在母体发育完全，出生后即已完全长成，全身被毛，眼张开，耳竖立，并已具有恒齿，产后一小时即能站立行走，数小时能吃软饲料，并已具有恒齿，产后一小时即能站立行走，数小时能吃软饲料，2 23 3日日后即可在母鼠护理下一边吸吮母乳，一边吃青饲料或混合饲料，迅速发后即可在母鼠护理下一边吸吮母乳，一边吃青饲料或混合饲料，迅速发育生长。育生长。 v 能耐低氧、抗缺氧，耳窝管敏感，便于做听力实验能耐低氧、抗缺氧，耳窝管敏感，便于做听力实验 一、实验动物的抓取和固定一、实验动物的抓取和固定v抓取动物

28、时先观察抓取动物时先观察v1 1、精神状态、精神状态v2 2、健康状况，毛发是否干净整齐，是否有光泽、健康状况，毛发是否干净整齐，是否有光泽v3 3、性别、性别v4 4、年龄体重是否适合实验、年龄体重是否适合实验一、实验动物的抓取和固定一、实验动物的抓取和固定小鼠小鼠转转拉拉按按抓抓大大 鼠鼠豚鼠豚鼠兔兔兔兔犬犬http:/ 3. 实验动物的麻醉方法实验动物的麻醉方法 （一）常用的麻醉药（一）常用的麻醉药1.1.常用局部麻醉剂：常用局部麻醉剂：普鲁卡因普鲁卡因，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成0.50.51 1；利多卡因利多卡因

29、，此药见效快，组织穿透性好，常用，此药见效快，组织穿透性好，常用1 12 2溶液作为大动物神经干阻滞麻醉，溶液作为大动物神经干阻滞麻醉，也可用也可用0.5溶液作局部浸润麻醉溶液作局部浸润麻醉。2.2.常用全身麻醉剂：常用全身麻醉剂：v 1. 1. 盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮v 2. 2. 乙醚乙醚/ /异氟醚（异氟醚（IsofloraneIsoflorane）v 3. 3. 苯巴比妥钠苯巴比妥钠 此药作用持久此药作用持久, ,应用方便，在普通麻醉用量情况下对于动物呼吸、血压和其应用方便，在普通麻醉用量情况下对于动物呼吸、血压和其它功能无多大影响。它功能无多大影响。v 4. 4.

30、 戊巴比妥钠戊巴比妥钠 此药麻醉时间不很长此药麻醉时间不很长, ,一次给药的有效时间可延续一次给药的有效时间可延续3-53-5小时小时, ,所以十分适合一所以十分适合一般使用要求。般使用要求。v 5. 5. 乌拉坦乌拉坦v 6. 6. 水合氯醛水合氯醛可恢复性较高可恢复性较高 v 7. 7. 舒泰舒泰(Zoletil)三、实验动物的麻醉方法三、实验动物的麻醉方法三、实验动物的麻醉方法三、实验动物的麻醉方法判断麻醉程度的指标判断麻醉程度的指标麻醉注意事项麻醉注意事项 使用全身麻醉剂的注意事项（详细补充）使用全身麻醉剂的注意事项（详细补充）v 1. 1. 麻醉剂的用量，除参照一般标准外，还应考虑个

31、体对除参照一般标准外，还应考虑个体对药物的耐受性不同药物的耐受性不同, ,而且体重与所需剂量的关系也并不是而且体重与所需剂量的关系也并不是绝对成正比的。一般说，衰弱和过胖的动物，其单位体重绝对成正比的。一般说，衰弱和过胖的动物，其单位体重所需剂量较小，在使用麻醉剂过程中，随时检查动物的反所需剂量较小，在使用麻醉剂过程中，随时检查动物的反应情况应情况, ,尤其是采用静脉注射尤其是采用静脉注射, ,绝不可将按体重计算出的用绝不可将按体重计算出的用量匆忙进行注射。量匆忙进行注射。v 2. 2. 动物在麻醉期体温容易下降，要采取动物在麻醉期体温容易下降，要采取保温措施保温措施。v 3. 3. 静脉注射

32、必须缓慢静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张、角膜反射和，同时观察肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应对皮肤夹捏的反应, ,当这些活动明显减弱或消失时，应立当这些活动明显减弱或消失时，应立即停止注射。配制的药液浓度要适中不可过高，以免麻醉即停止注射。配制的药液浓度要适中不可过高，以免麻醉过急；但也不能过低，以减少注入溶液的体积。过急；但也不能过低，以减少注入溶液的体积。v 4. 4. 做慢性实验时，在寒冷冬季，做慢性实验时，在寒冷冬季，麻醉剂麻醉剂在注射前应加热在注射前应加热至动物体温水平。至动物体温水平。麻醉注意事项麻醉注意事项表：常用麻醉剂的用法及剂量表：常用麻醉剂的用法及剂量 四、实验动物

33、的给药方法四、实验动物的给药方法（一）经口给药（一）经口给药（一）经口给药（一）经口给药兔灌胃兔灌胃（二）注射给药法（二）注射给药法1、皮下注射、皮下注射2、皮内注射、皮内注射3、肌肉注射、肌肉注射4、腹腔注射、腹腔注射5、静脉注射、静脉注射6、静脉注射、静脉注射3、犬和猴、犬和猴 多选前肢内侧皮下头静脉或后肢小隐静脉注射。注射前剪多选前肢内侧皮下头静脉或后肢小隐静脉注射。注射前剪去注射部位的被毛，用胶皮带扎紧静脉近端，使血管充盈，去注射部位的被毛，用胶皮带扎紧静脉近端，使血管充盈，从静脉的远端将注射针头平行刺入血管，待有回血后，松从静脉的远端将注射针头平行刺入血管，待有回血后，松开绑带，缓缓

34、注入药液。开绑带，缓缓注入药液。 （三）吸入给药法（三）吸入给药法v 1. 1. 皮肤给药皮肤给药v 2. 2. 脊髓腔内给药：脊髓腔内给药： v 3. 3. 脑内给药：脑内给药： v 4. 4. 直肠内给药：直肠内给药： v 5. 5. 关节腔内给药：此法常用于关节炎的动物模型复制关节腔内给药：此法常用于关节炎的动物模型复制. .（四）（四） 其他给药方法其他给药方法五、实验动物的采血方法五、实验动物的采血方法五、实验动物的采血方法五、实验动物的采血方法五、实验动物的采血方法五、实验动物的采血方法最大安全采血量与最小致死采血量最大安全采血量与最小致死采血量附：实验动物常用采血方法表附：实验动

35、物常用采血方法表采血方法采血方法适用实验动物适用实验动物尾尖采血尾尖采血大、小鼠等大、小鼠等眼眶静脉丛采血眼眶静脉丛采血大、小鼠；沙鼠等大、小鼠；沙鼠等摘眼球采血摘眼球采血大、小鼠；沙鼠等大、小鼠；沙鼠等腹主动脉采血腹主动脉采血大鼠、沙鼠和野鼠等大鼠、沙鼠和野鼠等心脏采血心脏采血适应于多数实验动物适应于多数实验动物耳缘静脉采血耳缘静脉采血兔兔颈动脉采血颈动脉采血适用于中大动物适用于中大动物小隐静脉采血小隐静脉采血犬、猴等中大动物犬、猴等中大动物前肢内侧皮下头静脉前肢内侧皮下头静脉犬、猴等中大动物犬、猴等中大动物股静脉股静脉/ /动脉采血动脉采血犬、猴等中大动物犬、猴等中大动物末梢采血（手指、脚

36、趾等）末梢采血（手指、脚趾等）犬、猴、豚鼠等犬、猴、豚鼠等v 1 1、消化液的采集、消化液的采集 v 2 2、胸水的采集、胸水的采集v 3 3、腹水的采集、腹水的采集v 4 4、脑脊液的采集、脑脊液的采集 v 5 5、尿液的采集、尿液的采集 六、六、 实验动物的体液采集实验动物的体液采集（一）处死（一）处死v 1.1.蛙蛙 类类v常用金属探针插入枕骨大孔常用金属探针插入枕骨大孔, ,破坏脑脊髓的方法处死。破坏脑脊髓的方法处死。v 2.2.大鼠和小鼠大鼠和小鼠v 1. 1. 颈椎脱臼法：颈椎脱臼法：v 2. 2. 断头法：断头法：v 3. 3. 击打法：击打法：v 4. 4. 急性大出血法：急性

37、大出血法：v 5. 5. 药物致死法：吸入一定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使动物致死。药物致死法：吸入一定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使动物致死。v 3.3.猴、狗、兔、豚鼠猴、狗、兔、豚鼠v 1. 1. 空气栓塞法：一般兔、猫等静脉内注入空气栓塞法：一般兔、猫等静脉内注入202040ml40ml空气即可致死。每条狗由前肢或空气即可致死。每条狗由前肢或后肢皮下静脉注入后肢皮下静脉注入8080150ml150ml空气，可很快致死。空气，可很快致死。v 2. 2. 急性失血法：急性失血法：不要让动物活得比死更难受，下手快、狠、准不要让动物活得比死更难受，下手快、狠、准七、实验动物的处死与剖检七

38、、实验动物的处死与剖检（二）尸体外部检查（二）尸体外部检查v营养状况检查：营养状况检查：根据肌肉和皮下脂肪的蓄积、被毛的光泽整洁程度判断。根据肌肉和皮下脂肪的蓄积、被毛的光泽整洁程度判断。v可视黏膜和天然孔道的检查：可视黏膜和天然孔道的检查：检查黏膜是否淤血、出血、黄疸检查黏膜是否淤血、出血、黄疸和溃疡等；检查天然孔道的分泌物、排泄物的性状等。和溃疡等；检查天然孔道的分泌物、排泄物的性状等。v皮肤以及全身性水肿发生情况的检查：皮肤以及全身性水肿发生情况的检查：v尸僵：尸僵：动物死亡后最先出现的状态，四肢僵直。动物死亡后最先出现的状态，四肢僵直。v尸冷：尸冷：动物死亡后尸体温度逐渐降低至环境温度

39、，通常每小时降低动物死亡后尸体温度逐渐降低至环境温度，通常每小时降低1 1 。v尸腐：尸腐：腐败菌增殖，发生腐败分解。腐败菌增殖，发生腐败分解。v 尸体应该尽早剖检，避免尸体腐败后影响结果。尸体应该尽早剖检，避免尸体腐败后影响结果。实验动物的处实验动物的处理理（三）实验动物的剖检、取样（三）实验动物的剖检、取样v1 1、剖检原则：、剖检原则：遵循系统解剖学和局部解剖学要求。遵循系统解剖学和局部解剖学要求。v2 2、取样程序：、取样程序： 先表后里：先取浅表淋巴结和腺体，后取腔体内脏器先取浅表淋巴结和腺体，后取腔体内脏器。 由下到上：打开胸腔和腹腔后由下到上取脏器。打开胸腔和腹腔后由下到上取脏器

40、。 由实质器官到血液丰富的器官：防止出血过多，影响其他脏器。防止出血过多，影响其他脏器。 先重后轻：先取对实验而言重要的器官，后取次要器官。先取对实验而言重要的器官，后取次要器官。 先无菌后开放：如需要做组织微生物培养，取样时优先，并且严格如需要做组织微生物培养，取样时优先，并且严格要求无菌操作，取样完毕后再取其他用途的样品。要求无菌操作，取样完毕后再取其他用途的样品。实验动物的处实验动物的处理理v1 1、受试动物尚未死亡，应采用安乐死处理。、受试动物尚未死亡，应采用安乐死处理。v2 2、动物尸体与废弃物处理：、动物尸体与废弃物处理：v 无毒性受试验物或无重大疫病的动物尸体无毒性受试验物或无重

41、大疫病的动物尸体，集中收集放入集中收集放入尸体袋冷冻，待焚烧处理。尸体袋冷冻，待焚烧处理。v 有毒性受试验物的动物尸体有毒性受试验物的动物尸体，应做毒性消除或中和处理。应做毒性消除或中和处理。v 重大疫病的动物尸体重大疫病的动物尸体，应该在达到相应生物安全的灭菌消应该在达到相应生物安全的灭菌消毒器中进行消毒处理后，再冷冻保存焚烧处理。毒器中进行消毒处理后，再冷冻保存焚烧处理。八、尸体、废弃物的处理八、尸体、废弃物的处理四、科研经验分享四、科研经验分享科研经验分享科研经验分享v组织研究团队，分工明细，各尽所长；组织研究团队，分工明细，各尽所长；v作好详细实验计划；作好详细实验计划；v仔细记录实验

42、过程，认真分析实验结果，坚持每仔细记录实验过程，认真分析实验结果，坚持每天做实验小结；天做实验小结；v密切联系带教老师，定期汇报实验进度；密切联系带教老师，定期汇报实验进度；v摆正心态，明确探索性实验目的；摆正心态，明确探索性实验目的；v尽量多想有可能出现的问题和解决办法；尽量多想有可能出现的问题和解决办法；v“磨刀不误砍柴工磨刀不误砍柴工”：综述：综述+ +预实验预实验+ +正式实验正式实验+ + 论文（初稿、多次修订）论文（初稿、多次修订）科研经验分享科研经验分享v 动物饲养：领取动物要注意的，比如如何选取健康的动动物饲养：领取动物要注意的，比如如何选取健康的动物，如何选取适当年龄的动物，动物年龄划分标准，实物，如何选取适当年龄的动物，动物年龄划分标准，实验室饲养过程安排，选取验室饲养过程安排，选取适合的饲料盒适合的饲料盒，防止动物从饲，防止动物从饲料盒处逃跑，