植物源农药的提取分离及结构鉴定修改版

1、植物源农药的提取分离及结构鉴植物源农药的提取分离及结构鉴定定张龙来张龙来Email：2014.10.20 一、基本概念一、基本概念 1、提取提取：利用适当的溶剂或方法，将所：利用适当的溶剂或方法，将所要成分尽可能从原料中完全提出的过程。要成分尽可能从原料中完全提出的过程。 2、分离分离：将提取物中所含的各种成分一：将提取物中所含的各种成分一一分开，并将得到的单体加以精制的过一分开，并将得到的单体加以精制的过程。程。第一节第一节 植物源农药的提取植物源农药的提取 水水 亲水性有机溶剂亲水性有机溶剂 亲脂性有机溶剂亲脂性有机溶剂二、提取方法二、提取方法l超临界流体萃取法（超临界流体萃取法（SFE）

2、l水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法l溶剂提取法溶剂提取法l升华法升华法l压榨法压榨法溶剂溶剂 （一）溶剂提取法一）溶剂提取法 根据天然成分的溶解性不同，选用对根据天然成分的溶解性不同，选用对所需成分溶解度大而对其他成分溶解度小所需成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将所需成分从生物材料中溶解出的溶剂，将所需成分从生物材料中溶解出来的一种提取方法。来的一种提取方法。 溶剂提取是指溶剂进入生物体细胞，溶剂提取是指溶剂进入生物体细胞，溶解或分散其有用物质而变成浸出物的全溶解或分散其有用物质而变成浸出物的全过程。过程。 包括包括浸润、解吸和扩散浸润、解吸和扩散三个阶段。三个阶段。1、溶剂提取法的原理、溶剂

3、提取法的原理选择溶剂依据选择溶剂依据相似相溶相似相溶原理。原理。 浸润：渗透阶段浸润：渗透阶段 溶剂通过细胞壁渗透到细胞中。溶剂通过细胞壁渗透到细胞中。解吸：溶解阶段解吸：溶解阶段 细胞内容物与细胞组织之间有亲和细胞内容物与细胞组织之间有亲和 力，溶剂破除这种亲和力。力，溶剂破除这种亲和力。扩散：置换阶段扩散：置换阶段 利用细胞内的渗透力产生的压差而抽利用细胞内的渗透力产生的压差而抽提出来，用溶剂占领内容物的位置而将内提出来，用溶剂占领内容物的位置而将内容物置换出来。容物置换出来。 扩散过程表达式：扩散过程表达式：dtdxdcDFdsdt: 扩散时间扩散时间F：扩散面积，以粉碎度表示：扩散面积

4、，以粉碎度表示浓度差浓度差dxdcD： 扩散系数扩散系数rNRTD61ds: 在在dt时间内的扩散量时间内的扩散量 2、选择溶剂的要点、选择溶剂的要点 * 对所要成分溶解度大对所要成分溶解度大 * 沸点适中容易回收沸点适中容易回收 * 低毒安全低毒安全 * 廉价廉价 天然产物成分中，萜、甾等大环、稠环化天然产物成分中，萜、甾等大环、稠环化合物极性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等合物极性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等极性溶剂中；酸碱性成分因易溶于水、乙醇等极性溶剂中；酸碱性成分因存在状态不同溶解性不同。存在状态不同溶解性不同。 最常用的溶剂为乙醇。最常用的溶剂为乙醇。 3、溶剂

5、的分类、溶剂的分类 * 强极性溶剂：水强极性溶剂：水 * 亲水性有机溶剂：亲水性有机溶剂： 能与水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）能与水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮） * 亲脂性有机溶剂：亲脂性有机溶剂： 不与水任意混溶，可分层（正丁醇、乙醚、不与水任意混溶，可分层（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、环己烷、石油醚）乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、环己烷、石油醚） 常用溶剂的极性大小顺序：常用溶剂的极性大小顺序： 石油醚石油醚四氯化碳四氯化碳苯苯氯仿氯仿乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯正丁醇正丁醇丙酮丙酮乙醇（甲醇）乙醇（甲醇）Kb K=CU/CL CU、CL为被分离物质在上相和下相中浓度为被分离物质在上相

6、和下相中浓度 1、萃取法、萃取法 利用混和物中各成分在两种互不相溶的溶剂利用混和物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数不同而达到分离的方法。中分配系数不同而达到分离的方法。 根据根据值的大小可决定分离采用的方法值的大小可决定分离采用的方法 100, 简单的一次萃取，可基本分离。简单的一次萃取，可基本分离。10，数次乃至，数次乃至10余次萃取，余次萃取，CCD法法2，100次以上萃取，次以上萃取，DCCC法，法，HSCCC法法1，不能分离，不能分离可以根据可以根据PC法计算法计算值，选择理想的分离条件。值，选择理想的分离条件。 2.沉淀分离法沉淀分离法 根据溶解度的不同，控制溶液条件使溶液中的

7、化根据溶解度的不同，控制溶液条件使溶液中的化合物或离子分离的方法统称为沉淀分离法。方法合物或离子分离的方法统称为沉淀分离法。方法的主要依据是溶度积原理的主要依据是溶度积原理。 根据沉淀剂的不同，沉淀分离也可以分成用无机根据沉淀剂的不同，沉淀分离也可以分成用无机沉淀剂的分离法、用有机沉淀剂的分离法和共沉沉淀剂的分离法、用有机沉淀剂的分离法和共沉淀分离富集法。沉淀分离法和共沉淀分离法的区淀分离富集法。沉淀分离法和共沉淀分离法的区别主要是：沉淀分离法主要使用于常量组分的分别主要是：沉淀分离法主要使用于常量组分的分离（毫克离（毫克 量级以上）；而共沉淀分离法主要使用量级以上）；而共沉淀分离法主要使用于

8、痕量组分的分离（小于于痕量组分的分离（小于1mg/mL）。）。 常用的沉淀分离方法及试剂常用的沉淀分离方法及试剂 1 、无机沉淀剂、无机沉淀剂 氢氧化物、硫化物、其它沉淀剂。氢氧化物、硫化物、其它沉淀剂。 2、有机沉淀剂、有机沉淀剂 草酸、铜试剂、铜铁试。草酸、铜试剂、铜铁试。3.结晶和重结晶结晶和重结晶 在化学里面，热的饱和溶液冷却后，溶质以晶体在化学里面，热的饱和溶液冷却后，溶质以晶体的形式析出，这一过程叫结晶。的形式析出，这一过程叫结晶。 重结晶是将晶体溶于溶剂或熔融以后，又重新从重结晶是将晶体溶于溶剂或熔融以后，又重新从溶液或熔体中结晶的过程。重结晶可以使不纯净溶液或熔体中结晶的过程。

9、重结晶可以使不纯净的物质获得纯化，或使混合在一起的盐类彼此分的物质获得纯化，或使混合在一起的盐类彼此分离。离。 重结晶提纯法的一般过程重结晶提纯法的一般过程 1、溶剂选择、溶剂选择 2、固体物质的溶解、固体物质的溶解 3、杂质的除去、杂质的除去 4、晶体的析出、晶体的析出 5、晶体的收集和洗涤、晶体的收集和洗涤 6、晶体的干燥、晶体的干燥4.膜分离膜分离 利用膜的选择性分离实现料液的不同组分的利用膜的选择性分离实现料液的不同组分的分离、纯化、浓缩的过程称作膜分离分离、纯化、浓缩的过程称作膜分离液膜分离过程分为乳液膜分离过程分为乳化液膜和固定液膜的分化液膜和固定液膜的分离过程；离过程；合成膜的分

10、离过程包合成膜的分离过程包括微过滤、超过滤、反括微过滤、超过滤、反渗透、气体渗透分离、渗透、气体渗透分离、渗透蒸发、渗析及电渗渗透蒸发、渗析及电渗析等过程。析等过程。 二：柱色谱1.吸附柱色谱 吸附分类吸附分类 物理吸附：物理吸附：无选择性吸附，吸附无选择性吸附，吸附-解吸附发生迅速，吸附解吸附发生迅速，吸附剂如剂如硅胶、氧化铝、活性炭硅胶、氧化铝、活性炭等；等；化学吸附：化学吸附：不可逆吸附，如碱性氧化铝对酚酸性成分的不可逆吸附，如碱性氧化铝对酚酸性成分的吸附；酸性硅胶对生物碱的吸附等；吸附；酸性硅胶对生物碱的吸附等；半化学吸附：半化学吸附：聚酰胺聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。对酚酸类、醌

11、类的氢键吸附。 吸附原理：相似相吸吸附原理：相似相吸 影响吸附过程的三要素：影响吸附过程的三要素：吸附剂（固定相）吸附剂（固定相）溶质（被分离物质）溶质（被分离物质）溶剂（洗脱剂、展开剂、流动相）溶剂（洗脱剂、展开剂、流动相） 2、硅胶、氧化铝、硅胶、氧化铝 极性吸附剂极性吸附剂：载样量大，吸附力强：载样量大，吸附力强硅胶硅胶：有中性、酸性之分，适用于各类成分分离。：有中性、酸性之分，适用于各类成分分离。氧化铝：有中性、酸性、碱性之分，不适合于分离氧化铝：有中性、酸性、碱性之分，不适合于分离酸性成分，多用于分离生物碱。酸性成分，多用于分离生物碱。 被分离物质吸附力与结构的关系被分离物质吸附力与

12、结构的关系 被分离物质极性大，吸附力强，难洗脱，被分离物质极性大，吸附力强，难洗脱，Rf值小。值小。 官能团极性大小排列顺序：官能团极性大小排列顺序：-COOH Ar-OH R-OH R-NH2、RNHR、RNRR RCONRR RCHO RCOR RCOOR ROR RH 溶剂（洗脱剂）的极性与洗脱力的关系溶剂（洗脱剂）的极性与洗脱力的关系洗脱剂极性越大，洗脱力越强；洗脱剂极性越大，洗脱力越强； OOHOHCOOHOOOHOHCH3OHOOOHOHCH3O 大黄酸大黄酸大黄素大黄素大黄酚大黄酚酸性最强酸性最强酸性其次酸性其次酸性最弱酸性最弱溶于溶于NaHCO3溶于溶于Na2CO3溶于溶于Na

13、OH 例：从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成分，例：从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成分，根据极性大小推测从硅胶柱上的洗脱顺序。根据极性大小推测从硅胶柱上的洗脱顺序。 名称名称RR黄夹苷黄夹苷ACHO(D-glc)2黄夹苷黄夹苷BCH3(D-glc)2黄夹次苷黄夹次苷ACHOH黄夹次苷黄夹次苷BCH3H黄夹次苷黄夹次苷CCH2OHH黄夹次苷黄夹次苷DCOOHH单乙酰黄夹次苷单乙酰黄夹次苷BCH3H OOOHROOROOROCH3CH3单乙酰黄夹次苷单乙酰黄夹次苷B R = COCH3 , 其它其它R = H 3、 活性炭活性炭-非极性吸附剂非极性吸附剂 吸附力与结构的关系吸附力与结构的关系

14、 分子量大者分子量大者 分子量小者分子量小者芳香族芳香族 脂肪族，活性炭和芳香族均有平面型脂肪族，活性炭和芳香族均有平面型分子的缘故。分子的缘故。含含OH、COOH、NH2多者多者 少者少者 3、活性炭、活性炭-非极性吸附剂非极性吸附剂 溶剂的洗脱力溶剂的洗脱力 吡啶吡啶 15%酚酚/醇醇 7%酚酚/H2O 醇醇 含水醇含水醇 H2O 黄酮、生物碱的富集，糖的分离，脱色等。黄酮、生物碱的富集，糖的分离，脱色等。 应用应用 4、聚酰胺（、聚酰胺（Polyamide） 由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。 H2CNHOCH2H2CCH2H2CCH2NH2COHCH2

15、NHOH2CCH2H2CCH2H2CNCH2OHOOOH分离原理：主要分离原理：主要通过通过酰胺酰胺与与酚、酚、酸、醌酸、醌等化合物等化合物形成氢键形成氢键，吸附，吸附能力取决于氢键能力取决于氢键的强弱。的强弱。 2.分配柱色谱分配柱色谱 液液-液柱色谱法，其固定相和流动相均为液液柱色谱法，其固定相和流动相均为液体，液态固定相又称固定液，被涂渍在惰体，液态固定相又称固定液，被涂渍在惰性材料载体上构成固定相。分配柱色谱法性材料载体上构成固定相。分配柱色谱法的优点是：稳定性高，重现性好，适用样的优点是：稳定性高，重现性好，适用样品的类型广等。品的类型广等。 固定相极性小于流动相固定相极性小于流动相

16、，如，如HPLC反相色谱柱、反相薄层反相色谱柱、反相薄层色谱板。色谱板。固定相固定相：硅胶的硅醇基与烷基结合，如：硅胶的硅醇基与烷基结合，如RP-2、RP-8、RP-18，亲脂性亲脂性：RP-18 RP-8 RP-2流动相流动相（洗脱剂）：（洗脱剂）：MeOH-H2O；CH3CN-H2O洗脱顺序洗脱顺序：分离极性大的成分：分离极性大的成分，极性大者先被洗脱出来，极性大者先被洗脱出来。 固定相的表面修饰固定相的表面修饰 RH-2RH-8RH-18化学修饰硅胶亲水性表面亲脂性表面3.离子交换色谱 离子交换色谱中的固定相是一些带电荷的基团，离子交换色谱中的固定相是一些带电荷的基团， 这些带电基团通过

17、静电相互作用与带相反电荷的这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子，按照质量作用定律，这些离子将与结合在离子，按照质量作用定律，这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。固定相基团带正电固定相上的反离子进行交换。固定相基团带正电荷的时候，其可交换离子为阴离子，这种离子交荷的时候，其可交换离子为阴离子，这种离子交换剂为阴离子交换剂；固定相的带电基团带负电换剂为阴离子交换剂；固定相的带电基团带负电荷，可用来与流动相交换的离子就是阳离子，这荷，可用来与流动相交换的离子就是阳离子，这种离子交换剂叫做阳离子交换剂

18、。种离子交换剂叫做阳离子交换剂。 阴离子交换柱的功能团主要是阴离子交换柱的功能团主要是NH2，及，及NH3 ：阳离子交换剂的功能团主要是：阳离子交换剂的功能团主要是SO3H及及COOH。其中。其中-NH3 离子交换柱及离子交换柱及-SO3H离子交换剂离子交换剂属于强离子交换剂，它们在很广泛的属于强离子交换剂，它们在很广泛的pH范围内都范围内都有离子交换能力；有离子交换能力；-NH2及及-COOH 离子交换柱属于离子交换柱属于弱离子交换剂，只有在一定的弱离子交换剂，只有在一定的pH值范围内，才能值范围内，才能有离子交换能力。离子交换色谱主要用于可电离有离子交换能力。离子交换色谱主要用于可电离化合

19、物的分离，例如，氨基酸自动分析仪中的色化合物的分离，例如，氨基酸自动分析仪中的色谱柱，多肽的分离、蛋白质的分离，核苷酸、核谱柱，多肽的分离、蛋白质的分离，核苷酸、核苷和各种碱基的分离等。苷和各种碱基的分离等。 4、凝胶层析、凝胶层析（Gel Penetration Chromatography, GPC） 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 交联葡聚糖是由一定平均分子量的葡聚糖和交联葡聚糖是由一定平均分子量的葡聚糖和交联剂（一般为环氧氯丙烷）以醚桥的形式互相交联剂（一般为环氧氯丙烷）以醚桥的形式互相交联形成的三维空间网状结构高分子材料，是水交联形成的三维空间网状结构高分子材料，是水不溶性的白色球状颗粒，酸性

20、环境能水解，碱中不溶性的白色球状颗粒，酸性环境能水解，碱中稳定。稳定。 在样品通过一定孔径的凝胶固定相时，由于在样品通过一定孔径的凝胶固定相时，由于流经路径的不同，使不同相对分子量的组分得以流经路径的不同，使不同相对分子量的组分得以分离的方法。分离的方法。 表面有孔隙，其大小决定于聚糖与交联剂表面有孔隙，其大小决定于聚糖与交联剂的配比及反应条件。的配比及反应条件。 商品型号即按凝胶的交联度大小分类，并商品型号即按凝胶的交联度大小分类，并以吸水量来表示，英文字母以吸水量来表示，英文字母G代表葡聚糖凝胶，代表葡聚糖凝胶，后面的数字表示每克凝胶吸水量，再乘以后面的数字表示每克凝胶吸水量，再乘以10的

21、的值，值，G-25的吸水量为每克的吸水量为每克2.5ml。 交联度大交联度大网状结构越紧密网状结构越紧密孔隙越小孔隙越小吸吸水膨胀越少。水膨胀越少。 型号型号吸水量吸水量（ml/g）床体积床体积（ml/g）分离范围分离范围最小溶胀时间最小溶胀时间肽与蛋白质肽与蛋白质多糖多糖室温室温沸水沸水G-101.023小于小于700小于小于70031G-151.52.53.5小于小于1500小于小于150031G-252.54610005000100500062G-505.091115003万万5001万万62G-757.5121530007万万10005万万243G-100101520400015万万1

22、00010万万485G-150152030500040万万100015万万725G-200203040500080万万100020万万725凝胶的型号与使用范围凝胶的型号与使用范围 层析原理层析原理 绝大部分在水溶液中进行，凝胶颗粒在适当绝大部分在水溶液中进行，凝胶颗粒在适当溶剂中浸泡，待充分膨胀后装入层析柱，加样后溶剂中浸泡，待充分膨胀后装入层析柱，加样后用同一溶液洗脱。在洗脱过程中，较小的分子渗用同一溶液洗脱。在洗脱过程中，较小的分子渗入凝胶，较大的分子随溶液流动，分子量小的物入凝胶，较大的分子随溶液流动，分子量小的物质（阻滞作用大）可通过凝胶网孔进入粒子内部，质（阻滞作用大）可通过凝胶网

23、孔进入粒子内部，然后扩散出来，故流程长，移动速度慢，后流出然后扩散出来，故流程长，移动速度慢，后流出色谱柱，分子量大的物质沉凝胶粒子间孔隙，随色谱柱，分子量大的物质沉凝胶粒子间孔隙，随洗脱液移动，流程短，移动速度快，先流出色谱洗脱液移动，流程短，移动速度快，先流出色谱柱。柱。 不同的化合物由于其大小差异，在流经不同的化合物由于其大小差异，在流经GPC柱时，不同柱时，不同分子量的化合物流经体积不同（大分子不能或难以进入凝胶分子量的化合物流经体积不同（大分子不能或难以进入凝胶网格结构的内部，直接从凝胶颗粒之间穿过，保留时间短；网格结构的内部，直接从凝胶颗粒之间穿过，保留时间短；而小分子恰恰相反，保

24、留时间较长）而得以分离而小分子恰恰相反，保留时间较长）而得以分离 。 常用术语常用术语Vt 床体积，凝胶装柱以后，柱床所占的体积。床体积，凝胶装柱以后，柱床所占的体积。Vo外水体积，柱床内存在于凝胶外面的水相外水体积，柱床内存在于凝胶外面的水相体积。体积。Vi内水体积，凝胶颗粒内部所含的水相体积。内水体积，凝胶颗粒内部所含的水相体积。Vg凝胶本身体积。凝胶本身体积。相互关系：相互关系：Vt= Vo+ Vi+ VgVe洗脱体积，自样品加入时算起，至流出组洗脱体积，自样品加入时算起，至流出组分最大浓度出现时，所流出的体积分最大浓度出现时，所流出的体积 。 同一类型化合物，洗脱特征与组分分子量同一类

25、型化合物，洗脱特征与组分分子量有关。有关。 Ve=K1-K2logM 说明不同组分流经凝胶柱时，按分子量大小说明不同组分流经凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的，洗脱体积小，最先流出，顺序流出，分子量大的，洗脱体积小，最先流出，当条件固定时，当条件固定时，Ve重现性很好。重现性很好。 按此特性可测大分子物质的分子量。按此特性可测大分子物质的分子量。 用已知分子量的物用已知分子量的物质分别相继上柱（质分别相继上柱（5mg），），流出液按每管流出液按每管24ml收集，收集，通过硫酸蒽酮显色，再经通过硫酸蒽酮显色，再经紫外检测，分别求得洗脱紫外检测，分别求得洗脱体积体积Ve。再用蓝色葡聚糖。再

26、用蓝色葡聚糖测出柱床的外水体积测出柱床的外水体积Vo，按按Ve /Vo与分子量对数关与分子量对数关系作图，得标准曲线，最系作图，得标准曲线，最后将待测物质分子量用少后将待测物质分子量用少水溶解上柱，在同样条件水溶解上柱，在同样条件下测定下测定Ve，根据，根据Ve/Vo，查标准曲线，测得物质分查标准曲线，测得物质分子量。子量。 局限性：局限性： 1、要有标准样。、要有标准样。 2、不同的待测物质、不同的待测物质要有不同的标准样。要有不同的标准样。 操作技术：操作技术：溶胀：溶胀：不同凝胶溶胀时间不一样，不同凝胶溶胀时间不一样，G-100室温下最室温下最小水化时间小水化时间72h，除微颗粒。目的：

27、充分吸水，各，除微颗粒。目的：充分吸水，各孔隙舒张，以利于物质分子通过。孔隙舒张，以利于物质分子通过。 装柱：装柱：柱内加少量洗脱液，排除底部气泡，然后将柱内加少量洗脱液，排除底部气泡，然后将凝胶浆倒入，让其自然沉降，打开出口，柱床表面凝胶浆倒入，让其自然沉降，打开出口，柱床表面不再下沉即紧密。装好的柱应不含气泡，柱床表面不再下沉即紧密。装好的柱应不含气泡，柱床表面平坦。平坦。 平衡：平衡：用用3倍床体积洗脱液让柱平衡流动倍床体积洗脱液让柱平衡流动2-3天，天，至流速恒定。至流速恒定。 加样：加样：平衡后，床表面应有平衡后，床表面应有12cm的洗脱液，的洗脱液，用吸管沿柱壁加入，打开出口，当上

28、面液体刚用吸管沿柱壁加入，打开出口，当上面液体刚好全部渗入柱内时，滴加洗脱液，注意不能振好全部渗入柱内时，滴加洗脱液，注意不能振动床表面。动床表面。 上样品要体积小，浓度大，这样峰形好。上样品要体积小，浓度大，这样峰形好。 洗脱：洗脱：一般用水和电解质溶液，如酸、碱、盐的一般用水和电解质溶液，如酸、碱、盐的溶液及缓冲溶液。加入溶液及缓冲溶液。加入5cm以上洗脱液时，可接高以上洗脱液时，可接高位瓶中的洗脱液，位瓶中的洗脱液， 洗脱分阶段洗脱和梯度洗脱洗脱分阶段洗脱和梯度洗脱收集：收集：分部收集器收集。分部收集器收集。 检出：检出：蛋白质、核苷酸、多肽用紫外光谱仪在蛋白质、核苷酸、多肽用紫外光谱仪

29、在280nm、260nm、230nm测吸光度值，以样品体积测吸光度值，以样品体积（或管数）为横座标，吸光度为纵座标，画出洗脱（或管数）为横座标，吸光度为纵座标，画出洗脱曲线。曲线。 5、大孔树脂柱色谱、大孔树脂柱色谱 大孔吸附树脂的吸附实质为一种物体高度分散或大孔吸附树脂的吸附实质为一种物体高度分散或表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象，这种吸附性能是由于范德华引力或生成，这种吸附性能是由于范德华引力或生成氢键氢键的的结果。同时由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对结果。同时由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用。通过上述这分子

30、大小不同的物质具有筛选作用。通过上述这种吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不种吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。的。 吸附树脂的表面发生吸附作用后，会使树脂吸附树脂的表面发生吸附作用后，会使树脂表面上溶质的浓度高于溶剂内溶质的浓度，其结表面上溶质的浓度高于溶剂内溶质的浓度，其结果引起体系内放热和自由能的下降果引起体系内放热和自由能的下降。 大孔吸附树脂按其极性大小和所选用的单体分子大孔吸附树脂按其极性大小和所选用的

31、单体分子结构不同，可分为非极性、中极性和极性三类。结构不同，可分为非极性、中极性和极性三类。 （1）非极性大孔吸附树脂）非极性大孔吸附树脂 非极性大孔吸附树脂是由非极性大孔吸附树脂是由偶极矩偶极矩很小的单体聚合很小的单体聚合制得的不带任何功能基，孔表的疏水性较强，可制得的不带任何功能基，孔表的疏水性较强，可通过与小分子内的疏水部分的作用吸附溶液中的通过与小分子内的疏水部分的作用吸附溶液中的有机物，最适于极性溶剂中吸附非极性物质，也有机物，最适于极性溶剂中吸附非极性物质，也称为芳香族吸附剂，例如苯乙烯、二乙烯苯聚合称为芳香族吸附剂，例如苯乙烯、二乙烯苯聚合物。物。 （2）中等极性大孔吸附树脂）中

32、等极性大孔吸附树脂 中等极性大孔吸附树脂是含酯基的吸附树脂，且中等极性大孔吸附树脂是含酯基的吸附树脂，且多功能团的甲基丙烯酸酯作为交联剂。其表面兼多功能团的甲基丙烯酸酯作为交联剂。其表面兼有疏水和亲水两部分。既可极性溶剂中吸附非极有疏水和亲水两部分。既可极性溶剂中吸附非极性物质，又可由非极性溶剂中吸附极性物质，也性物质，又可由非极性溶剂中吸附极性物质，也称为脂肪族吸附剂，例如聚丙烯酸酯型聚合物。称为脂肪族吸附剂，例如聚丙烯酸酯型聚合物。 （3）极性大孔吸附树脂）极性大孔吸附树脂 极性大孔吸附树脂是指含酰胺基、极性大孔吸附树脂是指含酰胺基、氰基氰基、酚羟基、酚羟基等含氮、等含氮、氧氧、硫极性功能

33、基的吸附树脂，它们通、硫极性功能基的吸附树脂，它们通过过静电静电相互作用吸附极性物质，如丙烯酰胺。相互作用吸附极性物质，如丙烯酰胺。6.亲和色谱亲和色谱 亲和色谱也称为亲和层析，是一种利用固定相的亲和色谱也称为亲和层析，是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某

34、一分子，也可以用用来从混合物中纯化或浓缩某一分子，也可以用来去处或减少混合物中某一分子的含量。来去处或减少混合物中某一分子的含量。 纸色谱（纸色谱（PC），也叫纸分配色谱（），也叫纸分配色谱（PPC，Paper Partition Chromatography） )1 ()1 ()1(1)1(1fafbfbfafbfbfafaBARRRRRRRRKK (为纸色谱定数为纸色谱定数) Rfa、Rfb为为A、B两物质在两物质在PC上的上的Rf值值 pH值值 对于酸性、碱性和两性化合物，对于酸性、碱性和两性化合物，pH值可以改值可以改变它们的存在状态（游离型、解离型），分配比变它们的存在状态（游离型、解离型），分配比受受pH的影响。的影响。 HA + H2O = A- + H3O+3HAOHAKapKa= pH - logA-/HApH = pKa + logA-/HAHA达到达到99%解离时，解离时，pH = pKa + 2HA达到达到99%游离时，游离时，pH = pKa - 2 2) 酸碱性成分的分离酸碱性成分的分离-pH梯度萃取法梯度萃取法 按酸碱性强弱的不同分离酸性、碱性、中按酸碱性强弱的不同分离酸性、碱性、中性物质，改变性物质，改变pH值使酸碱成分呈不同状态。值使酸碱成分呈不同状态。 如中药大黄中的大