生物制药erbitux

1、216年6月1日Erbitux（西妥昔单抗） 13生物科学下游技术 上游技术Erbitux展望Erbitux的简介1234目 录 本品可与表达于正常细胞和多种癌细胞表面的表皮皮生长因子（EGF）受体特异性结合，并竞争性阻断EGF和其他配体，如转化生长因子（TGF-）的结合。本品是针对EGF受体的IgG1单克隆抗体，两者特异性结合后，通过对与EGF受体结合的酪氨酸激酶（TK）的抑制作用，阻断细胞内信号转导途径，从而抑制癌细胞的增殖，诱导癌细胞的凋亡，减少基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子的产生。Erbitux的简介Step one在2001年Erbitux的开发药厂ImClone系统公司就提交了临

2、床试验材料到FDA审查，由于资料并不完整，FDA没有进行审查。Step two2003年8月14日，Imclone公司有重新送审了更完整的临床试验材料，结果证实了Erbitux有抑制直结肠癌的生长，延长病人的生存时间。Step threeFDA在2004年批准Erbitux用于结直肠癌扩散病人。Erbitux是第一支单克隆抗体，它可和另一支抗癌药物irinotecan联合使用治疗这类癌症。市场现状Erbitux是一种抗EGFR单克隆抗体，该药为新型靶向抗癌药，业界预计，Erbitux在2014年的销售额将突破12.5亿美元。【临床应用】 本品单用或与伊立替康(irinotecan)联用于表皮生

3、长因子（EGF）受体过度表达的，对以伊立替康为基础的化疗方案耐药的转移性直肠癌的治疗。对于那些被确认有EGFR的表达，而又对伊立替康或伊立替康联合治疗失效的癌症病人，加用Erbitux和伊立替康的联合使用可使肿瘤缩小22.9%，并推迟肿瘤的生长约4.1个月。而单用Erbitux则可肿瘤缩小10.8%，推迟肿瘤的生长约1.5个月扩大适应症：鼻咽癌 , 肺癌适 应 症：结肠直肠癌杂交瘤细胞的制备上游技术 上游技术Step 1 提取杂交瘤细胞系的mRNA，经反转录成cDNAStep 2 用PCR方法扩增VL（轻链可变区）和VH（重链可变区）基因上游技术Step 4 鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因

4、的拼接高效表达载体和宿主细胞的构建：将人鼠嵌合的V-C区基因质粒DNA等量混合，在脂质体介导下共转染到骨髓瘤细胞筛选：转染后用霉酚酸进行筛选，形成集落的细胞即 为共转染细胞，所分泌的抗体为嵌合抗体。Step 3 人抗体恒定区基因的钓取_Step 5Step 6下游技术1、无血清培养法：利用白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺等混合物代替小牛血清。优点：可减少污染又有利于单克隆抗体的纯化2、悬浮培养：非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。优点：增加细胞生长空间，使杂交瘤细胞生长旺盛，单克隆抗体产量也得到提高3、微载体培养：在培养液中加入固体颗粒作为细胞生长载体，增大单位体积的表面积优点：可以充分利用培养液

5、，保持了贴壁细胞的生长特性，还可以进行高密度培养。-分离纯化抗体生产宿主抗体生产宿主优缺点优缺点需去除与宿主相关需去除与宿主相关杂质杂质针对宿主特性的纯针对宿主特性的纯化策略化策略杂交瘤细胞10%小牛血清培养表达量达1g/L，但纯化困难，并有动物源污染风险，无血清培养表达量低培养基内的杂蛋白如血清白蛋白、转铁酶、小牛lgG、脂类用于诊断试剂和治疗单抗，后者纯度要求较高（95.99%）需要多步、多维层析去除宿主杂质、铁蛋白、牛lgG与目标抗体性质接近，污染问题十分显著，可通过优化疏水层析和离子交换层析去除，如白蛋白的量较多，可先用blue sephrose介质结合蛋白。通过阻断EGFR介导的信号转导通路以实现治疗肿瘤的目的成为近年来肿瘤治疗的热点。目前,国外已有多种以EGFR为靶点的抗体药物上市并在肿瘤临床治