QN-CSFH-101 尼泊金甲酯、丙酯测试方法(rev 8 ) 2

1、 修订号Rev. ：81 目的与范围 Scope and Purpose用HPLC测定大宝化妆品中尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇的含量.This method is applicable to the determination of Phenoxyethanol, Methyl Paraben and Propyl Paraben by HPLC in Dabao products.2 特殊安全防范措施 Unusual Safety Precautions根据化学试剂的材料安全数据表来进行相应的安全操作与防护。Use Material Safety Data Sheets (MSDS) rega

2、rding the safe handling of chemicals specified.3 方法原理 Principle of method通过采用梯度洗提，用HPLC和C-18反相色谱柱将尼泊金酯和苯氧乙醇从样品中和其它组份相互分离开。用外标法进行定量。Phenoxyethanol and Parabens are separated from each other as well as from other components in the sample by gradient elution HPLC using a C-18 reverse phase column. The

3、components are detected using an UV detector 254 nm and quantitated by a method of external standardization.4 基本方程式 Fundamental Equations无 None5 干扰因素Interferences任何和尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇具有相同保留时间的化合物都可能产生干扰。Under the conditions prescribed, the method is selective/specific and no interferences areevident6 精确度

4、与准确度 Precision无None7 仪器 Equipment7.1 装备紫外检测器的液相色谱 HPLC with UV Detector7.2 色谱柱 Columns： Hypersil ODS 250*4.6mm 5m 30105-254630（other products） Prodigy 5 m ODS3 100A (250 X 4.6 mm) Cat no： OOG-4097-E0（大宝眼袋霜Dabao Eye Bag Cream (F# WJ238-40394)）7.3 0.45m PVDF或者类似型号针头式过滤器 Filters, 0.45 m PTFE filters or

5、 equivalent7.4 HPLC进样瓶 Auto sampler vials7.5 50毫升，100毫升容量瓶 50ml， 100ml volumetric flask7.6 2毫升，5毫升移液管 2ml，5ml pipet8 试剂Reagents8.1 去离子水Purified water (Milli Q) or equivalent8.2 乙腈（HPLC级）HPLC Grade Acetonitrile or equivalent8.3 甲醇（HPLC级）Methanol HPLC Grade or equivalent8.4 冰醋酸（AR）Acetic acid AR Grade

6、 or equivalent8.5 尼泊金甲酯 标准物质，有已知含量和失效期Methyl paraben, Reference standard with known purity.8.6 尼泊金丙酯 标准物质，有已知含量和失效期Propyl paraben, Reference standard with known purity.8.7 苯氧乙醇 标准物质，有已知含量和失效期2-phenoxyethanol, Reference standard with known purity.9 标准溶液配制Standard Preparation9.1 准确称取如下标准物质至100ml的容量瓶中，

7、准确至0.1毫克。Into a single 100 ml volumetric flask, weigh each of the following尼泊金甲酯Methyl Paraben 0.05g尼泊金丙酯Propyl Paraben 0.03g苯氧乙醇 Phenoxyethanol 0.13g9.2 用甲醇溶解并稀释至刻度并混合均匀。(储备液)Dilute to volume with Methanol (8.3) and mix thoroughly (Stock standard)9.3 移取5.0ml储备液于50毫升容量瓶中，用甲醇稀释至刻度并混合均匀（工作标液）。Pipet 5.

8、0 ml of the diluted standard in to a 50 ml volumetric flask, dilute to volume with Methanol and mix thoroughly (Working standard)9.4 通过0.45m针头式过滤器过滤工作标准样品于HPLC样品瓶中，弃去前1-2ml滤液。Filter approximately 2-3 ml through a 0.45m PVDF filter (7.3) in to an autosampler vial. Discard the first 1-2 ml through the

9、 filter .Finally collect the filtrate in autosampler vial for analysis.9.5 重复10.1-10.3配制另一个标准样品-核实标准样品。Prepare a check standard by repeating steps 9.1 through 9.410 样品配制Sample Preparation 注Note: 含有单一组成的产品，使样品的浓度与标准溶液的浓度匹配。For the products containing single component match the concentration of sample

10、 with standard. 含有苯氧乙醇、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯或者苯氧乙醇和尼泊金甲酯或者尼泊金甲酯和丙酯的组合的产品，使样品中尼泊金甲酯的的浓度与标准溶液的浓度匹配。For the products containing combinations of Phenoxyethanol, Methyl Paraben, Propyl Paraben or Phenoxyethanol and Methyl Paraben or Methyl Paraben and Propyl Paraben match the concentration of sample with Methyl Pa

11、raben standard. 含有苯氧乙醇和尼泊金丙酯的组合的产品使样品中苯氧乙醇的的浓度与标准溶液中的浓度匹配。For the products containing combination of Phenoxyethanol and Propyl Paraben match the concentration of sample with Phenoxyethanol standard. 大宝清爽保湿防晒露F# LY243-41232, 称取0.9g样品至50ml容量瓶。For Dabao UV Lotion, F# LY243-41232 weigh 0.9 g of sample i

12、n to a 50 ml volumetric flask.10.1 准确称取0.8g样品于50ml容量瓶中。Weigh, 0.8 g of sample in to a 50 ml volumetric flask.10.2 加入约10ml甲醇，超声波振荡至样品完全分散，用甲醇稀释至刻度。Add approximately 10 ml of Methanol to the flask and stopper. Sonicate and shake vigorously until the sample is completely dispersed and no globules of pr

13、oduct remain. Dilute to volume with Methanol and mix thoroughly. 10.3 通过0.45um过滤膜过滤工作标准样品于HPLC样品瓶中，弃去前1-2ml滤液。Filter approximately 2-3 ml through a 0.45 m PTFE filter in collect the filtrate in auto sampler vial for analysis. Discard the first 1-2ml filtrate. 10.4 重复11.1-11.3配制一个平行测试样品。Repeat 11.1-1

14、1.3 to prepare a parallel sample.11 运行参数Operating Conditions101111.1 大宝SOD蜜（F#WJ238-40365）和大宝眼袋霜(F# WJ238-40394,F# WJ238-40366)Operating conditions for Dabao SOD Milk (F# WJ238-40365) Dabao Eye Bag Cream (F# WJ238-40394) and Dabao Eye Bag Cream (F# WJ238-40366)检测波长Wave length： 254nm柱温Oven temperatur

15、e： 25进样量Injection volume： 20l流动相组成Mobile phase gradient: A=去离子水750ml+250ml乙腈+2ml冰醋酸 B=100%乙腈A = Purified water 750 ml + 250 ml Acetonitrile + 2 ml Acetic acid DegasB = 100% Acetonitrile流速Flow rate: 1.0ml/min运行时间Run time： 25 min时间程序Gradient table:步骤Step时间（分钟）time (min)流速(ml/min)Flow rate(ml/min)A（%）B

16、（%）10.01.09010215.01.09010318.01.01090420.01.01090522.01.09010625.01.0901011.2 其他产品For Other finished products Typical Instrument settings:检测波长Wave length： 254nm 柱温Oven temperature： 40进样量Injection volume： 20l流动相组成Mobile phase gradient： A=去离子水750ml+250ml乙腈+2ml冰醋酸 B=100%乙腈 A = Purified water 750 ml +

17、250 ml Acetonitrile + 2 ml Acetic acid B = 100% Acetonitrile流速Flow rate: 1.0ml/min运行时间Run time： 25min时间程序Gradient table：步骤step时间（分钟）time/min流速(ml/min)flow rate(ml/min)A（%）B（%）10.01.0100026.01.0100038.01.05545415.01.01585520.01.01585622.01.01000725.01.0100011.3 大宝眼角皱纹蜜(F# LY086-26283, F# LY086-26311)

18、和大宝眼霜(F# LY086-26284) Operating conditions for Dabao Eye Wrinkle Milk (F# LY086-26283) , Dabao Eye Cream(F# LY086-26284) and Dabao Eye Wrinkle Cream (F# LY086-26311)Typical Instrument settings :波长Wave length： 254 nm流速Flow rate： 1.0 ml / min柱温Oven temperature： 25C运行时间Run time ： 35 min进样体积Injection vo

19、lume： 20 l流动相组成Mobile phase gradient :Where A = 100% Acetonitrile B = Purified water 750 ml + 250 ml Acetonitrile + 2 ml Acetic acid Mixed well and degas时间梯度Gradient table步骤step时间（分钟）time/min流速(ml/min)flow rate(ml/min)A（%）B（%）10.01.00100224.01.02080325.01.09010430.01.09010531.01.00100635.01.0010012

20、步骤Procedure:12.1 让仪器按照11设定的参数运行约60分钟直到获得稳定的基线。 Allow the instrument to run for approximately 60 minutes under the conditions of11 until a stable baseline is obtained.12.2 首先进一次空白(流动相/溶剂)，以确定系统是否受到污染，并采取措施来解决发现的问题。Inject a blank (mobile phase/solvent) to evaluate the system for any contamination.Take

21、 necessary actions to resolve any observed issues. 12.3 运行参照标准溶液以确定每个组分的保留时间。苯氧乙醇和尼泊金酯的峰应获得基线分离。Inject the Reference Standard to determine the retention times of each of thecomponents. The benzyl alcohol, phenoxyethanol and parabens peaks should havebaseline resolution.12.4 参考标准溶液再进样五次并计算峰面积的系统适应性和响

22、应因子。五次进样峰面积的相对标准偏差不能超过2.0%。Inject the Reference Standard five additional times and measure the peak area tocalculate system suitability and response factor. The relative standard deviation(RSD) for benzyl alcohol, phenoxyethanol and parabens peaks should not exceed 2.0% for the five injections.12.5

23、复核标准溶液进样二次并计算响应因子。五个参考标准溶液响应因子的均值与两个复核标准溶液的平均响应因子之商必须在98%102%以内。Inject the Check Standard twice and measure the peak area to calculate the response factor. The response factor generated by the average of the five Reference Standard injections and the two Check standard injections must agree within (

24、98-102 %).12.6 每个样品进样一次，并用参考标准样品和复核标准样品的响应因子的平均值来计算样品含量。Inject each sample once and use local bracketing of the Reference Standardinjections to calculate samples.12.7 每间隔10个或者少于10个测试样品进一次参考标准样品，并且在测试结束时再进一次参考标准样品。整个测试过程中参考标准样品的系统适应性的相对标准偏差不能大于3.0%。Inject the Reference Standard every ten or less samp

25、le injections and at the end ofthe run. The global RSD for the complete set of standard injections should notexceed 3.0%.12.8 最后，用甲醇和水冲洗仪器和色谱柱。At the end of the run, flush the instrument and column with water and methanol.13 计算Calculations: 13.1 样品中尼泊金酯、苯氧乙醇的含量: Parabens and Phenoxyethanol content i

26、n sample: 13.2 平均值 偏差 14 本测试方法由TM-000955 Estimation of Benzyl Alcohol , Parabens, Phenoxyethanol and Phenonip XB by HPLC Method翻译。This document is translated from TM-000955. 本附件共1页，第1页 Page 1 of 1大宝化妆品中尼泊金甲酯、丙酯测试记录 测试编号_ 测试日期_ 液相色谱仪编号：_天平编号：_色谱柱编号： _ _甲醇编号：_ A相乙腈编号：_ B相乙腈编号：_ 冰醋酸编号：_准确称取以下标准品(精确至0.1

27、mg) 于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度后混合均匀(储备液)，取5.0ml溶液A于50ml容量瓶中，用甲醇稀释到刻度（工作标准溶液），将工作标准溶液通过0.45m过滤膜过滤HPLC进样瓶中。用同样的方法配制另一个标准溶液（核实标准溶液）。尼泊金甲酯 批号：_，含量： %，有效期：_ 。Std1： g ；Std2： g尼泊金丙酯 批号：_，含量： %，有效期：_。Std1： g ；Std2： g标准样品一色谱图码:_, 标准样品二色谱图页码:_, 校正表页码为： 。 称取样品 (精确至0.1mg ) 于50ml容量瓶中，用甲醇分散后稀释到刻度混合均匀，通过0.45m过滤膜过滤于HPL

28、C进样瓶中，按照QN-CSFH-101方法进行测定。 样品名称：_，批号：_ _称样量1：_g ，色谱图号_。称样量2：_g ，色谱图号_。 测试结果1：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _% 测试结果2：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _%平均值：尼泊金甲酯%= _% %， 尼泊金丙酯%= _% %两测试结果偏差为：尼泊金甲酯： %尼泊金丙酯： %样品名称：_，批号：_ _称样量1：_g ，色谱图号_。称样量2：_g ，色谱图号_。 测试结果1：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _% 测试结果2：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _%平均值：尼泊金甲酯%= _% %， 尼泊

29、金丙酯%= _% %两测试结果偏差为：尼泊金甲酯： %尼泊金丙酯： %样品名称：_，批号：_ _称样量1：_g ，色谱图号_。称样量2：_g ，色谱图号_。 测试结果1：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _% 测试结果2：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _%平均值：尼泊金甲酯%= _% %， 尼泊金丙酯%= _% %两测试结果偏差为：尼泊金甲酯： %尼泊金丙酯： %计算公式：=标准样品的质量(克) Wsa=样品的质量（克） Asa=样品峰面积 As=标准品峰面积 =/AS的平均 检验者/日期： 复核者/日期：北 京 大 宝 化 妆 品 有 限 公 司文件名称Subject：尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇测试方法Test method for Methyl Paraben, Propyl Paraben and Phenoxyethanol 共9页，第7页 Page 7 of 9 编号Code：QN-CSFH-101 修订号Rev.：8附件二Appendix 2：大宝化妆品中尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇测试记录 Methyl Paraben, Pro