液相色谱仪维护-周长明

1、液相色谱仪使用与维护液相色谱仪使用与维护 周长明 仝禹 2006年11月17日2l液相色谱仪工作原理l液相色谱仪日常维护l液相色谱仪故障诊断l色谱柱的使用及保养l液相色谱仪期间核查3液相色谱仪工作原理色谱原理色谱原理色谱法：利用样品组分在两相间分配系数色谱法：利用样品组分在两相间分配系数 不同而进行分离的技术不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的液体流动相：携带样品流过整个系统的液体固定相：静止不动的一相，化学键合型固固定相：静止不动的一相，化学键合型固 定相定相4色谱分离过程流流动动相相Temporal course5高效液相色谱分析过程 高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统

2、、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。 分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。6高效液相色谱法的特点l 高效液相色谱法法高效液相色谱法法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)与经典液相色谱法的区别是填与经典液相色谱法的区别是填料颗

3、粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。l HPLC 有以下特点：有以下特点：l 高压高压-压力可达压力可达1530MPa。l 高速高速-流速为流速为0.00110.000 ml/min。l 高效。在一根柱中同时分离成份可达高效。在一根柱中同时分离成份可达100 种。种。l 高灵敏度高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达紫外检测器灵敏度可达0.01ng。荧光和电化学。荧光和电化学检测

4、器可达检测器可达0.1pg。7HPLC 的图形结果色谱图的图形结果色谱图色谱图色谱图: :色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图的曲线图, ,其纵坐标为信号强度其纵坐标为信号强度, ,横坐标为保留时间横坐标为保留时间. .8液相色谱图相关术语（液相色谱图相关术语（1）9液相色谱图相关术语（液相色谱图相关术语（2）10液相色谱图相关术语（液相色谱图相关术语（3）11液相色谱图相关术语（液相色谱图相关术语（4）上一页12液相色谱仪日常维护液相色谱仪日常维护吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器检测器上一页13日常维护日常维护14在线脱气机日常

5、维护在线脱气机日常维护15在线脱气机日常维护在线脱气机日常维护工作原理工作原理16在线脱气机日常维护在线脱气机日常维护何时需要使用在线脱气机何时需要使用在线脱气机17在线脱气机日常维护在线脱气机日常维护使用在线脱气机须知使用在线脱气机须知l 溶剂溶剂棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。l 避免使用下述可腐蚀钢铁的避免使用下述可腐蚀钢铁的 溶剂：溶剂：碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)。高浓度无机酸，如硝酸、硫酸.可能含有过氧化物的色谱醇醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。这些在

6、 使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物。含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液。18在线脱气机日常维护在线脱气机日常维护 防止堵塞溶剂过滤器防止堵塞溶剂过滤器 污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命，并且影 响泵的运行。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液 (pH 4 至 7) 中尤其如此。下 列建议将会延长溶剂过滤器的使用寿命并维持泵的运行。 使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液 建议不超过两天。 如果应用许可，在溶剂中加人0.00010.001 M的叠氮化钠。 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。

7、用氩气或氦气置换流动相上层的空气。19在线脱气机日常维护在线脱气机日常维护Question?1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？如何简单判断脱气机脱气是否正常？2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？否堵塞？20Question?1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？如何简单判断脱气机脱气是否正常？打开打开Purge阀，设定泵的流速阀，设定泵的流速2ml/min，提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶剂传送管内会产生一小段气过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶剂传送管内会产生一小段气泡，放下过滤

8、头，让此段气泡通过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消泡，放下过滤头，让此段气泡通过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消失或缩小。失或缩小。2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出，此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。在线脱气机日常维护在线脱气机日常维护21四元泵四元泵22四元泵工作原理四元泵工作原理(低压梯度泵系统低压梯度泵系统)23二元泵二元泵ABMixerRes

9、triction CapillaryMixing CapillaryClampDamperSolvent Selection ValveA1A2B1B224二元泵工作原理二元泵工作原理(高压梯度泵系统高压梯度泵系统)DamperPurge valveMixerABInlet valveOutlet valveWasteInlet valveOutlet valve25四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护泵头泵头(Pump Head)结构图结构图26Holding/Lock Screw (PEEK)1234567泵头泵头(Pump Head)结构图结构图四元二元四元二元/ /单元泵

10、日常维护单元泵日常维护27123四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护泵头泵头(Pump Head)结构图结构图28Outlet Ball ValvePurge Valve234567Active Inlet Valve(common to all except 1050)Cartridge 8new style1old style入口主动阀入口主动阀出口单向阀出口单向阀冲洗阀冲洗阀四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护29泵使用须知泵使用须知四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护30更好更好地使用四元泵地使用四元泵将装有溶剂瓶的溶剂箱放在泵上面(或较高处)

11、。当在四元泵上使用盐溶液或有机溶剂时，建议将盐溶液接 在底部的梯度阀口上，将有机溶剂接在上面的梯度阀口上。有机通道最好 在盐溶液通道上面。建议用水定期冲洗所有MCGV通道除去可能在 阀口析出得盐结晶。操作泵之前，用至少两个体积（标准脱气机30ml，对微脱气机10ml）冲洗 真空脱气机,特别是当 泵关闭了一段时间后（例如，过夜），以及在通道中使用挥发性混合溶剂 时。防止溶剂过滤器堵塞及长菌 ，当虑器表面有黑色或黄色污染层说明虑器发生了堵塞，请立即清洗或更换之。定期检查排液阀的虑芯。检查方法：拧开排液阀，以水作流动相，流速5ml/min，若压力大于10bar,则须立即更换。四元二元四元二元/ /单

12、元泵日常维护单元泵日常维护31更好更好地使用泵地使用泵当使用低流速时（不高于0.2ml/min）检查所有1/16英寸接头有无渗漏（用压力测试或漏液测试）。每当更换泵密封垫时 排液阀虑芯也应更换。更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏，并 降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。使用缓冲溶液时，关泵前先用水冲洗系统。当需要长时间使 用0.1摩尔或更高浓度得缓冲液时，最好选用密封垫清洗附件，以减少对密封垫及活塞杆的磨损。更换活塞密封垫后应按照密封垫安装步骤对其进行磨合，但磨合不适用于 正相密封垫。四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护32 当泵头安装有

13、冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10异丙醇，并将其流速调至约20滴/分钟使这溶液流过冲洗装置。 10异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用。不要用其它溶剂代替。 当泵头安装有冲洗附件而不使用，会使密封垫及活塞杆的寿命减短。当泵头安装有冲洗附件而不使用，会使密封垫及活塞杆的寿命减短。四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护33Question?1.如何简单判断比例阀是否内漏？如何简单判断比例阀是否内漏？2.何时应该更换何时应该更换Purge阀内的过滤白头？阀内的过滤白头？3.泵压力不正常可能由那些原因引起？泵压力不正常可能由那些

14、原因引起？四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护34Question?1.如何简单判断比例阀是否内漏？如何简单判断比例阀是否内漏？设定泵使用一个单独通路（设定泵使用一个单独通路（A），），打开打开Purge阀，流速阀，流速5ml/min，提起其他提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。剂是否随着流动，正常时均不应流动。2.何时应该更换何时应该更换Purge阀内的过滤白头？阀内的过滤白头？使用纯水作流动相，打开使用纯水作流动相，打开Purge阀，流速阀，流速5ml

15、/min，观察系统压力，如果超观察系统压力，如果超过过10bar，应该更换。应该更换。3.泵压力不正常可能由那些原因引起？泵压力不正常可能由那些原因引起？气泡，主动阀故障，出口阀故障，密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞，比气泡，主动阀故障，出口阀故障，密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞，比例阀故障，传感器故障，使用比例阀混合时盐浓度太高例阀故障，传感器故障，使用比例阀混合时盐浓度太高四元二元四元二元/ /单元泵日常维护单元泵日常维护35手动进样器手动进样器36手动进样器工作原理手动进样器工作原理37 1. 为了防止虹吸应注意使第五第六号放空管的出口与进样口保持在同一平面.手动进样器日常使用维护手动进样

16、器日常使用维护382. 为了更好的重现性，进样体积最好是样品环的56倍。3. 手动进样器预装Vespel转子垫圈，请参考自动进样章节选择转子垫圈。4. 一定要使用合规格的进样器，规格为外径0.028英寸，长2英寸的平头针。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。手动进样器日常使用维护手动进样器日常使用维护x39手动进样器日常使用维护手动进样器日常使用维护5. 进完样后一定要及时冲洗进样器，特别是用盐或缓冲液作流动相 由于这些溶液会形成结晶从而磨损垫圈。 冲洗方法：冲洗方法： A. 将进样器转至Inject位置，利用液相泵输送高纯水冲洗(这时是冲洗样品环及

17、沟槽）. B.用阀清洗接头和注射器冲洗。40当用注射器及接头清洗时，应注意不要太靠近进样器并戴防护眼镜当用注射器及接头清洗时，应注意不要太靠近进样器并戴防护眼镜,防止溶剂溅入眼睛。防止溶剂溅入眼睛。6. 经常用湿润的软布清洁进样器，特别是进样口周围。7. 请仔细阅读进样器说明书，上面有详细使用及其它信息。手动进样器日常使用维护手动进样器日常使用维护418. 更换转子密封圈。手动进样器日常维护手动进样器日常维护42Question？如何判断手动进样器的密封圈漏？手动进样器日常维护手动进样器日常维护43Answer如何判断手动进样器的密封圈漏？通常结合两方面：1从进样器观察，进样后将针拔出，若从进

18、样口或排空管有液体冒出，显示密封圈磨损。2从结果看：通常有压力不稳定，峰面积或保留时间不稳定和残留严重。手动进样器日常维护手动进样器日常维护44自动进样器自动进样器45自动进样器工作原理自动进样器工作原理46自动进样器工作原理自动进样器工作原理47自动进样器结构自动进样器结构48自动进样器结构自动进样器结构49自动进样器结构自动进样器结构50自动进样器日常维护自动进样器日常维护1.定期检查各传动杆是否足够润滑，必要时先用酒精棉球擦拭干净后再给这些杆涂抹少量液体润滑油，脏的传动杆使阻力增大从而造成自动进样器在取样过程中由于马达过热导致出错。2检查取样爪子的绿色胶套时否损坏，如果是请更换之，否则会

19、使样品放置位置不正确而导致如针，针座等损坏。3用酒精棉签擦拭针座防止灰尘污染堵塞针与针座。4若场地确实灰尘较多，建议购买自动进样器门，棕色门还可以帮助防止见光敏感的样品。515. 更换转子密封圈6. 更换针及针座自动进样器日常维护自动进样器日常维护52自动进样器常见故障自动进样器常见故障漏液漏液 针座磨损针座磨损 转子磨损转子磨损 进样量不准进样量不准 转子磨损转子磨损 计量泵故障计量泵故障 抽样速度太快抽样速度太快机械臂移动故障机械臂移动故障-抓不准样品瓶抓不准样品瓶 传感器故障传感器故障 周围环境差周围环境差 样品瓶不标准样品瓶不标准自动进样器日常维护自动进样器日常维护53Question

20、?1.样品量太少（某些离心处理的样样品量太少（某些离心处理的样品），无法过滤，为了尽量避免品），无法过滤，为了尽量避免堵塞，可以采取什么措施？堵塞，可以采取什么措施？2. 怎样判断自动进样器的转子垫圈怎样判断自动进样器的转子垫圈磨损磨损 自动进样器日常维护自动进样器日常维护54Answer1.样品量太少（某些离心处理的样品），无法过滤，为了尽量避样品量太少（某些离心处理的样品），无法过滤，为了尽量避免堵塞，可以采取什么措施？免堵塞，可以采取什么措施？在自动进样器设置中，适当抬高进样针抽样时的位置在自动进样器设置中，适当抬高进样针抽样时的位置。自动进样器日常维护自动进样器日常维护55Answer

21、2.怎样判断自动进样器的转子垫圈磨损？怎样判断自动进样器的转子垫圈磨损？ 将第四号管（排液的细塑料管）提起，将第四号管（排液的细塑料管）提起，情况下应没有液体滴出，如有则转子情况下应没有液体滴出，如有则转子垫圈磨损。垫圈磨损。 色谱现象：压力不稳，保留时间面积重色谱现象：压力不稳，保留时间面积重现性差，残留严重。现性差，残留严重。自动进样器日常维护自动进样器日常维护56柱温箱器日常维护柱温箱器日常维护571. 连接的管路尽量短，防止热扩散及峰增宽。2. 如果使用小体积分析柱以及流速小于0.2ml/min时建议使用左边 的柱温箱(左边体积较少, 3ul).3. 除非特殊应用，建议将两边温度设置一

22、样。并确保关好前盖。4. 如果是冷凝水导致漏液，建议终止漏液传感器检测功能如果是冷凝水导致漏液，建议终止漏液传感器检测功能柱温箱器日常维护柱温箱器日常维护58Question?1. 如果加热块堵塞怎么办？如果加热块堵塞怎么办？2. 如果是冷凝水导致漏液怎么办？如果是冷凝水导致漏液怎么办？柱温箱器日常维护柱温箱器日常维护59Answer1. 如果加热块堵塞怎么办？如果加热块堵塞怎么办？ 用管线连接泵与加热块出口，开泵进行反冲。用管线连接泵与加热块出口，开泵进行反冲。2. 如果是冷凝水导致漏液怎么办？如果是冷凝水导致漏液怎么办？ 终止漏液传感器检测功能终止漏液传感器检测功能柱温箱器日常维护柱温箱器

23、日常维护60DAD紫外检测器紫外检测器紫外检测器工作原理紫外检测器工作原理可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器61反射镜反射镜1反射镜反射镜2氘灯氘灯光源透镜光源透镜滤光片（钬玻璃滤光片（钬玻璃/遮光）遮光）入射狭缝入射狭缝光栅光栅分光器分光器参比光电二极参比光电二极管管数模转换板数模转换板样品光电二极管样品光电二极管数模转换板数模转换板流通池流通池紫外检测器工作原理紫外检测器工作原理可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器62Question?基线噪音大可能由那些原因引起基线噪音大可能由那些原因引起?紫外检测器日常维护紫外检测器日常维护63Answer基线噪音大可能由那些原因引起基线噪音大可能由

24、那些原因引起 泵压不稳，气泡，色谱柱污染，系统管路污染，流通池污染，泵压不稳，气泡，色谱柱污染，系统管路污染，流通池污染，灯强度不足，光学系统老化或污染，参数设置不合理灯强度不足，光学系统老化或污染，参数设置不合理紫外检测器日常维护紫外检测器日常维护64清洗流动池清洗流动池VWD故障诊断故障诊断,日常维护日常维护65清洗流动池清洗流动池如果流动池被污染可先用以下方法处理:在不连接色谱柱的情况下先用高纯水冲洗20分钟，然后用5硝酸冲洗2小时，最后再用高纯水冲洗至流出液中性即可。如上述方法不行，就需更换流动池的检测窗。上述处理方法也适用于DAD的流动池。VWD故障诊断故障诊断,日常维护日常维护66

25、二级管阵列紫外检测器工作原理二级管阵列紫外检测器工作原理DAD紫外检测器紫外检测器67可变的光进口狭缝系统可变的光进口狭缝系统这一微型狭缝系统是利用硅的机械性能和总体布局微型加工技术以及精确的 制作功能加工而成，它把所需的光学性能狭缝和光栅集中组合到一起， 成为一个简单、紧凑的元件。狭缝宽度直接由仪器上的微处理器来控制，并 可用为设定分析方法的一个实验参数。光栅光栅用一个凹面全息光栅来实现分光和光谱成像， 光栅把入射光束全部分散成组 成它的波长，然后把它反射到二极管阵列上。 二极管阵列二极管阵列二极管阵列由1024个光电二极管和一个位于陶瓷基座上的电路组成，在 190-950nm范围内取样间隔

26、9.5的流动相，以防腐蚀流通池石英窗，避免使用可能析晶的流动相，防止流通池堵塞10. VWD40barDAD120barMWD120barFLD20barRID5barRID、FLD永远是最后一个检测器11. 注意不同厂家接头问题，防止渗漏或毁坏色谱柱和接头HPLC日常维护日常维护总结总结81HPLC常用的色谱柱接头常用的色谱柱接头0.090 in.0.130 in.0.090 in.0.170 in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090 in.0.080 in.Troubleshooting LC Fittings, Part II.J.

27、 W. Dolan and P. Upchurch.LC/GC Magazine 6:788 (1988)HPLC日常维护日常维护总结总结82HPLC日常维护日常维护总结总结毛细管的区分 Blue 0.25 mmColor i.d.Red 0.12 mmGreen 0.17 mm83常见的错误信息及其解决方法常见的错误信息及其解决方法：Shutdown: 表示该模块并无问题，是由于其它模块出现错误而导致它也亮表示该模块并无问题，是由于其它模块出现错误而导致它也亮 红色。比如其它模块漏液或脱气机出错等。红色。比如其它模块漏液或脱气机出错等。Leak: 表示该模块发生漏液，此时无需关机，请检查该模

28、块的漏液传感表示该模块发生漏液，此时无需关机，请检查该模块的漏液传感 器周围是否有液体。器周围是否有液体。如果是如果是，先用纸将之吸干后点击，先用纸将之吸干后点击system on再检再检 查液体从何而来。查液体从何而来。如果不是，如果不是，请与厂家联系，这种情况很可能是请与厂家联系，这种情况很可能是 仪器内部元件有问题。仪器内部元件有问题。液相色谱仪故障诊断液相色谱仪故障诊断841. 色谱柱未拧紧，多数发生再更换柱后。这时柱温箱会显示色谱柱未拧紧，多数发生再更换柱后。这时柱温箱会显示Leak。注意，柱温箱的漏注意，柱温箱的漏液传感器在两加热块之间的中间位置。请用吸水纸确认，因为有时单用眼观察

29、液传感器在两加热块之间的中间位置。请用吸水纸确认，因为有时单用眼观察不易察觉。不易察觉。2. 连接管路两端未拧紧，或连接管路断裂。连接管路两端未拧紧，或连接管路断裂。3. 进样阀漏液，如自动进样器转子垫圈磨损造成漏液。进样阀漏液，如自动进样器转子垫圈磨损造成漏液。4. 泵漏液，开泵后将手伸入泵底部，可感到漏液。泵漏液，开泵后将手伸入泵底部，可感到漏液。5. 冷凝水的形成，如果使用柱温箱的降温功能，可能会有冷凝水生成从而使柱温箱显冷凝水的形成，如果使用柱温箱的降温功能，可能会有冷凝水生成从而使柱温箱显 示漏液。这种情况下可取消柱温箱的检漏功能示漏液。这种情况下可取消柱温箱的检漏功能(在工作站中的

30、在工作站中的 instrument 菜单下选择菜单下选择 more column thermostat 然后选择取消柱温箱的检漏功能然后选择取消柱温箱的检漏功能).6. 流动池漏液。流动池漏液。漏液的主要原因漏液的主要原因：85Lamp current 和和UV lamp ignited failed.可能原因：可能原因：1. 灯已严重老化。请在工作站中的灯已严重老化。请在工作站中的diagnosis界面中查看灯的使用累积时间界面中查看灯的使用累积时间(viewdiagnosisEMF选择检测器选择检测器). 通常普通氘灯能用通常普通氘灯能用1000小时或以上，而长寿命氘灯能用小时或以上，而长

31、寿命氘灯能用2000小时或以上小时或以上.2. 灯连线未接好。灯连线未接好。3. 检测器的主板和或电源损坏。检测器的主板和或电源损坏。注意，更换灯后建议将灯的使用时间回零：注意，更换灯后建议将灯的使用时间回零：在在diagnosis中单击检测器图标，中单击检测器图标，然后选择然后选择show module details 再单击右边的带有扳手的图标选择再单击右边的带有扳手的图标选择maintenance logbook entry，在项目中选择在项目中选择lamp replace,点点ok然后在随后的提示中回答然后在随后的提示中回答yes即可。即可。86系统压力过高。系统压力过高。1 首先拧开

32、排液阀，以纯水作流动相并设流速为5ml/min若压力超过10bar，应先更换排液阀的虑芯。2 若排液阀的虑芯没有堵塞，卸下色谱柱，然后用一两通代替色谱柱，以水作流动相设流速为1ml/min。通常压力不会超过20bar,否则系统可能有堵塞。3 若上述的压力超过20bar,我们可按照从后到前的原则，也就是说先卸下进流动池的连接管接头，开泵后，若压力正常则流动池堵塞若仍不正常可将这段管另一端也卸下，开泵后再观察压力情况。 同样道理，我们就可以找到堵塞的地方。容易堵塞的地方：流动池入口管；自动进样器的针及针座；柱温箱容易堵塞的地方：流动池入口管；自动进样器的针及针座；柱温箱87系统压力过低，不稳定或没

33、液流系统压力过低，不稳定或没液流。1首先拧开排液阀，设流速12ml/min后开泵，观察有无液流，若有再仔细观察液流是否有倒吸现象如不能确定可用量筒测量流速的准确性。2如上述无液流，或流速不准多数为主动阀阀芯或主动阀故障， 或泵有严重漏液。3怎样是大致判断主动阀抑或其阀芯故障？可用以下方法：当泵运转时用手指轻捏主动主体，正常的主动阀能感到有节奏的脉动，如果没有， 主动阀有问题。如果有则可以将主动阀阀芯取出进行超声波清洗，如仍有问题，可更换阀芯。注意，千万不注意，千万不要把整个主动阀放入超声波清洗这样会损坏主动阀要把整个主动阀放入超声波清洗这样会损坏主动阀。4若上述流速准确但拧紧排液阀后压力不稳定

34、，请仔细检查有无漏液。(通常漏液地方：各接口包括色谱柱，泵，进样阀等)88保留时间不稳定保留时间不稳定。1. 首先观察保留时间是否有规律的变化，并同时观察压力是否稳定首先观察保留时间是否有规律的变化，并同时观察压力是否稳定若压力稳定而保留时间呈有规律变化，若压力稳定而保留时间呈有规律变化，多数是色谱柱未平衡好，特别是含有多数是色谱柱未平衡好，特别是含有的流动相，需较长的时间去平衡。的流动相，需较长的时间去平衡。2. 若压力稳定而保留时间无规律变化，若压力稳定而保留时间无规律变化，请检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞。请检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞。再平衡色谱柱足够时间，如仍然不佳，可更换一色

35、谱柱。再平衡色谱柱足够时间，如仍然不佳，可更换一色谱柱。3. 若压力不稳定，若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。89峰面积重现性不好峰面积重现性不好。1. 首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。 若压力不稳定，若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过 高导致盐析，主

36、动阀比例阀内漏，等。高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。 2. 若压力稳定但峰面积呈无规律变化，若压力稳定但峰面积呈无规律变化，请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时 重新配制。检查进样阀是否漏液。等。重新配制。检查进样阀是否漏液。等。 3. 若压力稳定且若压力稳定且峰面积呈规律变化，峰面积呈规律变化，多数为色谱柱未平衡好。多数为色谱柱未平衡好。90基线不稳定基线不稳定。基线漂移：色谱柱未平衡好，柱温未稳定，流动相变化，等。基线噪音： 可能原因是：流动池有气泡，流动 池被污染，对紫外检 测器可将流动池移走即可确认。 色谱柱和或系统受污染。 灯能量

37、不足。 外界因素影响，如电源，温度和湿度，震动，等。91HPLC常见问题及解决办法：压力异常 操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。 A、没有压力显示，没有流动相流动 原因 解决方法l 1、电源问题、 1、接通电源，开机 l 2、保险丝被烧坏 2、更换保险丝 l 3、控制器设定不正 3、a、采取恰当的设定 确或设定失败 b、修理或更换控制器 l 4、柱塞杆折断 4、更换柱塞杆 l 5、泵头内有空气 5、溶剂脱气、启动泵抽出空气 l 6、流动相不足 6、a、补充流动相 b、更换入口滤头 l 7、单向阀损坏 7、更换单向阀 l 8、漏液 8

38、、拧紧或更换手紧接头92B、流动相流动正常，但没有压力显示 原因 解决方法 l 1、仪表损坏 1、更换仪表 l 2、压力传感器损坏 2、更换压力传感器 C、压力持续偏高 原因 解决方法 l 1、流速设定过高 1、调整流速设定 l 2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板 c、更换色谱柱 l 3、流动相使用不当 3、a、使用恰当的流动相 或缓冲盐的结晶沉淀 b、冲洗色谱柱 l 4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱 l 5、进样阀损坏 5、清洗或更换进样阀 l 6、柱温过低 6、提高温度 l 7、控制器失常 7、修理或更换控制器 l 8、保护柱阻塞 8、清洗或更换保护柱

39、l 9、在线过滤器阻塞 9、清洗或更换在线过滤器93 D、压力持续偏低 原因 解决方法 1、流速设定过低 1、调整流速 2、系统漏液 2、确定漏液位置并维修 3、色谱柱选择不当 3、选择恰当的色谱柱 4、柱温过高 4、降低温度 5、控制器失常 5、维修或更换控制器 E、压力波动 原因 解决方法 1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体 2、单向阀损坏 2、更换单向阀 3、泵密封损坏 3、更换泵密封 4、脱气不充分 4、a、溶剂脱气 b、改变脱气方法（使用在线脱气法等） 5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修 6、使用梯度洗脱 6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动94 HPLC常见问

40、题及解决办法：漏液 通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。A、接头处漏液 原因 解决方法l 1、接头松动 1、拧紧 l 2、接头磨损 2、更换 l 3、接头过紧 3、a、拧松，再重新拧紧 b、更换 l 4、接头被污染 4、a、拆下清洗l b、更换 l 5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件 95B、泵漏液 原因 解决方法 l 1、单向阀松动 1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧） b、更换单向阀 l 2

41、、接头松动 2、拧紧接头（不必拧的过紧） l 3、混合器密封损坏 3、a、更换混合器密封 b、更换混合器 l 4、泵密封损坏 4、维修或更换泵密封件 l 5、压力传感器损坏 5、维修或更换压力传感器 l 6、脉冲阻尼器损坏 6、更换脉冲阻尼器 l 7、比例阀损坏 7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换 b、检查手紧接头，损坏的立即更换l 8、放空阀的损坏 8、a、拧紧放空阀 b、更换放空阀96C、进样阀漏液 原因 解决方法 l 1、转子密封损坏 1、重新安装或更换进样阀 l 2、定量环阻塞 2、更换定量环 l 3、进样口密封松动 3、调整 l 4、进样针头尺寸 4、使用恰当的进样针 不合适l 5、

42、废液管中产生虹吸 5、保持废液管高于废液液面 l 6、废液管阻塞 6、更换或疏通废液管D、检测器漏液 原因 解决方法 l 1、流通池垫片损坏 1、a、避免过大的背景压力 b、更换垫片 l 2、流通池窗破碎 2、更换窗口 l 3、手紧接头漏液 3、拧紧或更换 l 4、废液管阻塞 4、更换废液管 l 5、流通池阻塞 5、重新安装或更换97 HPLC常见问题及解决办法：谱图的各种问题 液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。 A、峰拖尾 原因 解决方法 l 1、

43、筛板阻塞 1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板l c、更换色谱柱 l 2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱 l 3、干扰峰 3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱 l 4、流动相PH选择错误 4、调整PH值。对于碱性化合物 低PH值更有利于得到对称峰l 5、样品与填料表面 5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 溶化点发生反应 b、更改色谱柱 98 B、峰前延 原因 解决方法 l1、柱温低 1、升高柱温 l2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂 l3、样品过载 3、降低样品含量 l4、色谱柱损坏 4、见A1、A2 C、峰变形 原因 解决方法 l1、样品过载 1、减少样品载

44、量 D、早出的峰变形 原因 解决方法 l1、样品溶剂选择不恰当 1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂 E、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原因 解决方法 l1、柱外效应 1、a、调整系统连接（使用更短、内径 小的管路） b、使用小体积的流通池 99F、保留时间波动原因 解决方法 l 1、温控不当 1、调好柱温 l 2、流动相组分变化 2、防止变化（蒸发、反应等） l 3、色谱柱没有平衡 3、在每一次运行之前给予足够的 时间平衡色谱柱 G、保留时间不断变化原因 解决方法 l 1、流速变化 1、重新设定流速 l 2、泵中有气泡 2、从泵中除去气泡 l 3、流动相选择不恰当 3、a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相 100H、所有的峰面积都太小 原因 解决方法 l 1、检测器衰减设定过高 1、减少衰减的设定 l 2、检测器时间常数设定太大 2、设定较小的时间常数 l 3、进样量太少 3、增大进样量 l 4、记录仪连接不当 4、使用正确的连接 I、所有的峰面积都太大 原因 解决方法 l 1、检测器衰减设定过低 1、采取较大的衰减 l 2、进样过多 2、减少进样量 l 3、记录仪连接不正