第三章 中药制剂的检查1

1、第四章第四章 中药制剂的检查中药制剂的检查 江西中医学院药学系江西中医学院药学系中药制剂的检查内容与要求n杂质的概念、分类、来源杂质的概念、分类、来源n杂质的限量计算杂质的限量计算n重金属检查原理及注意点重金属检查原理及注意点n砷盐检查原理及砷盐检查原理及KI、酸性酸性SnCl、HgBr试纸的作用试纸的作用n中药制剂的检查项目：干燥失重、水分中药制剂的检查项目：干燥失重、水分灰分、酸不溶灰分灰分、酸不溶灰分n中药制剂的特殊杂质检查原则中药制剂的特殊杂质检查原则掌握掌握熟悉熟悉 中药制剂的检查包括：中药制剂的检查包括： 制剂通则检查制剂通则检查 一般杂质检查一般杂质检查 特殊杂质检查特殊杂质检查

2、 微生物限度检查微生物限度检查第一节第一节 中药制剂中的杂质检查中药制剂中的杂质检查 一、杂质及其来源一、杂质及其来源药品的杂质药品的杂质 是指药物中存在的是指药物中存在的危害人体健康危害人体健康或或影响药物质量影响药物质量的物质的物质. . 杂质检查杂质检查 是药物纯度评价的一项重要内容是药物纯度评价的一项重要内容. .一杂质的概念一杂质的概念 二二杂质的分类杂质的分类 一般杂质一般杂质 指在自然界中分布广泛指在自然界中分布广泛, ,在多在多种药材的种药材的采集采集、收购收购、加工加工以及以及制剂的生制剂的生产产或或贮存贮存过程中容易引入的杂质过程中容易引入的杂质. .特殊杂质特殊杂质 指某

3、一些中药制剂中单独存在指某一些中药制剂中单独存在的杂质，是在的杂质，是在制备过程制备过程或或储存储存中根据中根据其其来源来源、生产工艺生产工艺及及药品性质药品性质可能引入的可能引入的杂质。杂质。 生产制备过程引入生产制备过程引入贮存过程中引入贮存过程中引入三三杂质的来源杂质的来源中药材原料中引入中药材原料中引入杂质限量杂质限量 在不影响药物在不影响药物疗效疗效、稳定稳定性性及及不发生毒副作用不发生毒副作用的前提下的前提下, ,药物药物中所含杂质的中所含杂质的最大允许量最大允许量. .百分表示百分表示( %)百万分表示百万分表示( ppm)限量表示方限量表示方 法法二、杂质限量检查二、杂质限量检

4、查%100=样品量样品量杂质的最大允许量杂质的最大允许量杂质限量杂质限量%100=SCVL标准对照法标准对照法 （用一定量的杂质对照品溶液）（用一定量的杂质对照品溶液）三、杂质限量的计算三、杂质限量的计算610SCV)ppm(L= 若用若用ppm表示杂质限量表示杂质限量则：则：注意注意: 单位是否统一单位是否统一 供试品是否有稀释供试品是否有稀释 表示方法表示方法%或或ppm举例举例：阿胶砷盐检查法：阿胶砷盐检查法：取本品取本品2.02.0g g，加氢氧化钙加氢氧化钙1 1g g，混合，加少量水，搅匀，干燥后先用混合，加少量水，搅匀，干燥后先用小火烧灼小火烧灼 使炭化，再在使炭化，再在500-

5、600500-600炽灼使炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸完全灰化，放冷，加盐酸 3 3mlml与适量的水与适量的水使溶解成使溶解成3030mlml，分取溶液分取溶液1010mlml，加盐酸加盐酸4 4ml ml 与水与水1414mlml，依法检查（附录依法检查（附录 F F），），含砷含砷量不得过百万分之量不得过百万分之 三。三。 精密量取标准砷溶液（每精密量取标准砷溶液（每1 1mlml相当于相当于1 1gg的的AsAs）2 2mlml 610SCV)ppm(L=L = 2 L = 2 1 1 10 /(2.0 10 /(2.0 10/30)10/30) = 3 ppm = 3 ppm6 n灵

6、敏度法灵敏度法 在供试品溶液中加入试剂，在一定条在供试品溶液中加入试剂，在一定条件下，观察有无正反应出现。件下，观察有无正反应出现。例：肉桂油中重金属检查例：肉桂油中重金属检查 取本品取本品1010mlml，加水加水1010mlml与盐酸与盐酸1 1 滴，滴，振摇后，通硫化氢气使饱和，水层与油振摇后，通硫化氢气使饱和，水层与油层均不得变色。层均不得变色。 第二节第二节 一般杂质检查方法一般杂质检查方法1.重金属的概念重金属的概念重重金属金属 是指在实验条件下能与是指在实验条件下能与硫代硫代乙酰胺乙酰胺或或硫化钠硫化钠作用生成不溶性硫化作用生成不溶性硫化物而显色的金属杂质物而显色的金属杂质. 如

7、：如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等等. 重金属存在，影响药物的稳定性重金属存在，影响药物的稳定性及安全性及安全性. 铅易在体内积蓄中毒铅易在体内积蓄中毒,以以Pb为代表为代表.重重金金属属检检查查法法 H2PbSHSHPb22 （一）基本原理：（一）基本原理： SHCONHCH5 . 3pHOHCSNHCH223223原理：原理： 在弱酸性在弱酸性 (pH3.5 醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液)条件下，硫代乙酰胺水解条件下，硫代乙酰胺水解,产生产生H2S,与微量与微量重金属离子重金属离子(以以Pb2+为代表为代表)生成黄色到棕黑生成黄色到棕黑色的硫化物混悬

8、液色的硫化物混悬液（硫代乙酰胺法）硫代乙酰胺法） 在碱性介质中在碱性介质中,以以Na2S与微量重金属离与微量重金属离子生成不溶性的硫化物（子生成不溶性的硫化物（硫化钠法硫化钠法）重重金金属属检检查查法法2 操作方法操作方法比色放置硫代乙酰胺水22ml TS25ml2ml )buff(pH3.5水、醋酸盐样品样品管乙管乙管同上标准液（一定量） 对照管甲管甲管第一法：适用于供试品不经有机处理，适用于供试品不经有机处理，在酸在酸性溶液中显色的重金属检查性溶液中显色的重金属检查（二）检查方法：（二）检查方法：重重金金属属检检查查法法丙管丙管供试品溶液供试品溶液标准铅溶液标准铅溶液+同上同上显色显色结果

9、观察结果观察对照管样品管样品管样品管不得深于不得深于对照管对照管重重金金属属检检查查法法 颜色比较颜色比较甲管甲管 乙管乙管 丙管丙管 合格合格否则，第二法否则，第二法重重金金属属检检查查法法 操作操作 缓缓炽灼缓缓炽灼 放冷放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供试品供试品 炭化炭化 加热加热 HNO3 500-600H2SO4 除尽除尽 放冷放冷 完全灰化完全灰化 蒸干蒸干HCl 2ml 水水15ml 中性中性 按硫代乙酰胺按硫代乙酰胺 蒸干蒸干 氨试液氨试液 法检查法检查注意：注意：做空白试验做空白试验 适用于供试品需炽灼破坏，取遗留残渣适用于供试品需炽灼破坏，取遗留残渣经处理在酸性溶液中

10、显色的重金属检查经处理在酸性溶液中显色的重金属检查第二法第二法第三法第三法硫化钠法硫化钠法 适用于难溶于稀酸但能溶解于适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查碱性溶液的药物中重金属的检查. .原理原理在碱性介质中在碱性介质中,以以Na2S为显色剂为显色剂, 使使Pb2+与与S2-作用生成作用生成PbS 的混悬液的混悬液, 与一与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较较, 不得更深不得更深.重重金金属属检检查查法法 方法灵敏度方法灵敏度Pb2+标准溶液标准溶液10 g/ml （使用不超过一使用不超过一周）周） 取用量为取用量为2ml时，时，加加硫代

11、乙酰硫代乙酰胺所显颜色最适合于目视法观察胺所显颜色最适合于目视法观察（三）注意事项（三）注意事项重重金金属属检检查查法法 pH在在3.03.5时时, 呈色较完全呈色较完全.硫代乙酰胺加入量以硫代乙酰胺加入量以2ml 呈色最深呈色最深最佳显色时间最佳显色时间2分钟分钟 溶液的溶液的pH对于金属离子与硫化对于金属离子与硫化氢呈色影响较大氢呈色影响较大.(25ml供试液中有供试液中有2ml醋酸缓冲液醋酸缓冲液) 反应条件反应条件重重金金属属检检查查法法 供试品溶液有颜色时的处理供试品溶液有颜色时的处理 . 稀焦糖溶液调节稀焦糖溶液调节 . 指示剂调节指示剂调节重重金金属属检检查查法法 其他离子的干扰

12、其他离子的干扰干扰：干扰：弱酸性溶液中弱酸性溶液中Fe3+氧化氧化H2S析出析出S,产生混浊影响检查产生混浊影响检查.a.供试品中微量高价供试品中微量高价Fe3+存在存在排除：排除：加入加入抗坏血酸抗坏血酸或或盐酸羟胺盐酸羟胺使使Fe3+还原为还原为Fe2+.重重金金属属检检查查法法 b. 空白处理：空白处理： 为消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，为消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，当当 盐酸用量盐酸用量 1.0 ml 氨试液氨试液 2.0 ml . 除另有规定外，对照溶液应取同样量试液除另有规定外，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。蒸干后，依法检查。重重金金属属检检查查法法 c.供试品

13、为铁盐（大量的供试品为铁盐（大量的Fe3+） Fe3+在在HCl溶液中能形成配位化合物溶液中能形成配位化合物用乙醚提取用乙醚提取 Fe3+HCl HFeCl62-（黄色）黄色）水层加氨试液调至碱性水层加氨试液调至碱性,残存的残存的Fe3+可用可用KCN掩蔽掩蔽, 按硫化钠法检查按硫化钠法检查. 如：枸橼酸铁铵的重金属检查枸橼酸铁铵的重金属检查重重金金属属检检查查法法a. HNO3处理后处理后,必须蒸干除尽必须蒸干除尽NO.b. 炽灼温度严格控制：炽灼温度严格控制：500-600中药制剂中重金属检查的前处理中药制剂中重金属检查的前处理重重金金属属检检查查法法 c. 药物本身能生成不溶性硫化物药物

14、本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽剂消除干扰加入掩蔽剂消除干扰其他：其他：a. 标准铅溶液的稀释配制标准铅溶液的稀释配制b. 硫化钠棕色瓶中保存可硫化钠棕色瓶中保存可1-2个月个月重重金金属属检检查查法法砷砷盐盐检检查查法法 (一一) 古蔡氏法古蔡氏法 (二二) 二乙基二硫代甲酸银法二乙基二硫代甲酸银法 （Ag-DDC法）法） (一一) 古蔡氏法（古蔡氏法（Gutzeit）1. 原原 理理金属金属锌锌与与酸酸作用产生新作用产生新生态的生态的氢氢与药物中与药物中微量砷盐反应微量砷盐反应生生成具挥发性的成具挥发性的砷化氢砷化氢,遇遇溴化汞试纸溴化汞试纸产生黄色至棕色的产生黄色至棕色的砷斑砷斑,与同条件

15、下与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较较,测得供试品得含砷限度测得供试品得含砷限度.砷砷盐盐检检查查法法反应式如下：OH3Zn3AsHH9Zn3AsO22333棕色（量大）323As(HgBr)3HBr3HgBrAsH黄色（量少）223)HgBr(AsHHBr2HgBr2AsH棕色棕色黄色黄色2操作操作加锌粒加锌粒2g, 立即将装妥的导气管立即将装妥的导气管 B 密塞与密塞与 A 瓶瓶, 置置25-40 水浴中水浴中, 反应反应45分钟分钟, 取出溴化汞取出溴化汞试纸试纸, 比较砷斑比较砷斑.供试品标准液KI T.S.酸性SnCl2T.S.As3+ZnHCl

16、AsH3过Pb(AC)2棉花遇HgBr2试纸砷斑 比较 导气管导气管B中装入醋酸铅棉球中装入醋酸铅棉球再于旋塞再于旋塞C的平面上放一片溴化汞试纸的平面上放一片溴化汞试纸样品、对照品分别置于检砷瓶中样品、对照品分别置于检砷瓶中, 加盐酸加盐酸5ml与水与水21ml, 再加再加2.5% %碘化钾试液碘化钾试液5ml 与与0.3%酸性氯化亚锡试液酸性氯化亚锡试液5滴滴, 在室温放置在室温放置10分钟分钟2.2.装置装置检砷瓶检砷瓶A导气管导气管B 具孔塞具孔塞CABC砷砷盐盐检检查查法法 3. 讨讨 论论1)试剂的作用试剂的作用a. KI的作用的作用还原剂：还原剂：As5+As3+ 五价砷生成五价砷

17、生成AsH3的反应速度比三的反应速度比三价砷速度慢价砷速度慢, 加入加入 KI 使五价砷还原为使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应三价砷后再与活泼氢反应, 以增大以增大AsH3的生成速度的生成速度.OHIAsOHIAsO22333422砷砷盐盐检检查查法法砷砷盐盐检检查查法法 还原剂还原剂(表现在表现在3方面方面). 将五价砷还原为三价砷将五价砷还原为三价砷(As5+As3+)OHSnAsOH2SnAsO2433234b.酸性SnCl2的作用 SnIISn4222新生态氢H 2ZnH2Zn2233HH 2 AsHAs2424ZnIZnI进而促进进而促进AsH3不断不断生成生成稳定的络离子稳定的

18、络离子. 将将KI被氧化生成的被氧化生成的I2再还原为再还原为I-砷砷盐盐检检查查法法砷砷盐盐检检查查法法 （气泡）233HH2AsHAsHHHZnH2阻碍酸与锌粒反应阻碍酸与锌粒反应Zn超电压超电压0.70Sn超电压超电压0.50SnCl2. SnCl2与与Zn粒表面形成粒表面形成Zn-Sn齐齐 起去极化作用起去极化作用,使氢气均匀而使氢气均匀而连续地发生连续地发生.砷砷盐盐检检查查法法 c. .PbAcPbAc2 2棉花的作用棉花的作用 排除硫化物的干扰排除硫化物的干扰(1(1mgSmgS2- 2- ) ) （黑色，干扰）HgSHgBrSHH2S222果留在棉花上，不干扰结 2HAcPbS

19、H2SPbAc2砷砷盐盐检检查查法法 d.HgBrd.HgBr2 2试纸的作用试纸的作用 HgBrHgBr2 2试纸与试纸与AsHAsH3 3作用生成砷斑作用生成砷斑. . 注意事项注意事项a.标准砷溶液标准砷溶液规定取规定取2 ml (1 g /ml) b.Zn粒的大小及用量粒的大小及用量 大小：能通过大小：能通过1号筛号筛（8502000 m） 用量：约用量：约2g.c.反应温度：反应温度： 2540 反应时间：反应时间：45分钟分钟 砷砷盐盐检检查查法法a. 供试品是硫化物供试品是硫化物,亚硫酸盐亚硫酸盐,硫代硫酸盐硫代硫酸盐（色斑，干扰试验） Hg,HgSHgBrSO,SHHOS,SO

20、,S222232232（不干扰）243232232SOOHNOOS,SO,S排除方法：加入浓硝酸处理排除方法：加入浓硝酸处理 干扰物的排除干扰物的排除砷砷盐盐检检查查法法Fe3+能消耗还原剂能消耗还原剂(KI、SnCl2), 并能氧并能氧化砷化氢化砷化氢.排除方法排除方法：先加酸性先加酸性SnCl2试液使试液使 Fe3+ Fe2+砷砷盐盐检检查查法法b. 供试品是铁盐供试品是铁盐(Fe3+)c. 共价键结合的砷化物共价键结合的砷化物排除方法排除方法：进行有机破坏进行有机破坏 酸破坏法或碱破坏法酸破坏法或碱破坏法砷砷盐盐检检查查法法 碱破坏法碱破坏法a 加入氢氧化钙加入氢氧化钙 500-600

21、C灼烧灼烧 例：酚磺酞例：酚磺酞b 加入无水碳酸钠碱融（环状有机加入无水碳酸钠碱融（环状有机酸碱金属）酸碱金属） 例：苯甲酸钠例：苯甲酸钠砷砷盐盐检检查查法法酸破坏法酸破坏法 加稀硫酸与溴化钾加稀硫酸与溴化钾 例：葡萄糖中砷盐检查例：葡萄糖中砷盐检查 (二二) 二乙基二硫代氨基甲酸银法二乙基二硫代氨基甲酸银法 (Ag-DDC法法) silver diethyldithiocarbamateAgSSCNC2H5C2H5 本法不仅用于砷盐的限量检查本法不仅用于砷盐的限量检查, 而而且可用作微量砷盐的含量测定且可用作微量砷盐的含量测定.1. 原原 理理 第一步第一步：同古蔡氏法生成同古蔡氏法生成砷化

22、氢砷化氢 第二步第二步：砷化氢还原砷化氢还原Ag-DDC溶液溶液,产生产生红色红色的的胶态胶态银银. 目视比色法目视比色法 仪器分析仪器分析 510nm三、铅、镉、砷、汞、铜的检查三、铅、镉、砷、汞、铜的检查n原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法n电感耦合等离子体质谱法。电感耦合等离子体质谱法。四、铁盐的检查四、铁盐的检查方法：硫氰酸盐法方法：硫氰酸盐法原理：原理： 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子, ,与与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较。颜色进行比较。Fe3+

23、 6SCN-HClFe(SCN)63-（硫氰酸铁络离子）操作：操作：4ml25mld.HCl 30%硫氰酸铵硫氰酸铵过硫酸铵过硫酸铵50mgH2O50mlH2O 样样品品标准溶液标准溶液2) 最佳比色浓度最佳比色浓度a. 仪器分析线性范围仪器分析线性范围5 90 g Fe3+ /50mlb. 目视比色浓度范围目视比色浓度范围1050 g Fe3+ /50ml讨论：讨论：1) 标准铁溶液标准铁溶液硫酸铁铵硫酸铁铵(含硫酸含硫酸) 浓度浓度 10 gFe3+/ml五、干燥失重测定法：五、干燥失重测定法： （水分和挥发物质水分和挥发物质）1、常压恒温干燥法（、常压恒温干燥法（烘干法烘干法）2、干燥剂

24、干燥法、干燥剂干燥法(受热易分解或挥发的样品受热易分解或挥发的样品)3、减压干燥法（、减压干燥法（熔点低，受热不稳定及较难熔点低，受热不稳定及较难赶除水分的样品赶除水分的样品） 恒重恒重 六、水分测定法：六、水分测定法：1、烘干法（不含或少含挥发性成分）、烘干法（不含或少含挥发性成分）2、甲苯法（含挥发性成分）、甲苯法（含挥发性成分）3、减压干燥法（含挥发性成分的贵重药品）、减压干燥法（含挥发性成分的贵重药品）4、气相色谱法（外标法）、气相色谱法（外标法）供试品、甲苯、玻璃珠供试品、甲苯、玻璃珠水分水分甲苯甲苯甲苯法甲苯法水分测定管水分测定管直型冷凝管直型冷凝管短颈圆底烧瓶短颈圆底烧瓶2112

25、2112)(22)(WWttWWttRRRRR=n = 16（tR/W）2 水水 峰计大于峰计大于3000 乙醇峰计大于乙醇峰计大于200n = 5.54（tR/W1/2）2 气相色谱法（外标法）气相色谱法（外标法）大于大于2水峰水峰RSD不得大于不得大于2.0%七、炽灼残渣检查法七、炽灼残渣检查法 缓缓炽灼缓缓炽灼 放冷放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供试品供试品 炭化炭化 加热加热 700-800H2SO4 除尽除尽 完全灰化完全灰化残渣将用于重金属测定时炽灼温度残渣将用于重金属测定时炽灼温度应控制在应控制在500-600八、灰分、酸不溶性灰分检查八、灰分、酸不溶性灰分检查n总灰分：限

26、制中药中的泥沙和其他总灰分：限制中药中的泥沙和其他杂质杂质n酸不溶性灰分：限制中药中的泥沙酸不溶性灰分：限制中药中的泥沙等杂质等杂质例例：黄芪总灰分不得过黄芪总灰分不得过5.0%,酸不溶性酸不溶性灰分不得过灰分不得过1.0% 第三节第三节 中药制剂的特殊杂质检查中药制剂的特殊杂质检查n特殊杂质检查特殊杂质检查：按照制剂的生产或储按照制剂的生产或储存过程中，根据其存过程中，根据其来源来源、生产工艺生产工艺及及药品的性质药品的性质有可能引入的杂质进有可能引入的杂质进行检查行检查 检查原则检查原则：利用药品和杂质的利用药品和杂质的理化性质理化性质及及生理作用生理作用的差异，采用的差异，采用物理的物理

27、的、化化学学的、的、药理药理的、的、微生物微生物的方法来检查。的方法来检查。举例：举例： 1 1、土大黄苷的检查土大黄苷的检查： 取本品（取本品（大黄大黄）粉末）粉末0.20.2g g，加甲醇加甲醇2 2ml,ml,温浸温浸1010分钟，放冷，取上清液分钟，放冷，取上清液 1010l,l,点于滤纸上，以点于滤纸上，以4545乙醇展开，取出，乙醇展开，取出，晾干，放置晾干，放置1010分钟，置分钟，置紫外光灯紫外光灯(365(365nm) nm) 下下检视，不得显持久的亮紫色荧光。检视，不得显持久的亮紫色荧光。 2. 西洋参中人参的检查西洋参中人参的检查 西洋参样品西洋参样品 人参对照药材人参对

28、照药材 薄层色谱法薄层色谱法 不得显对照药材同样斑点不得显对照药材同样斑点人参：人参： 取人参对照药材取人参对照药材 1 1g g，照照 鉴别鉴别 项下对照药材溶液制备项下对照药材溶液制备的方法制成对照药材溶液。照的方法制成对照药材溶液。照 薄层色谱法薄层色谱法( (附录附录 B)B)试验，试验，吸取吸取 鉴别鉴别 项下的供试品溶液和上述对照药材溶液各项下的供试品溶液和上述对照药材溶液各2 2l l，分分别点于同一硅别点于同一硅 胶胶 G G薄层板上，以氯仿薄层板上，以氯仿- -甲醇甲醇- -水水(13:7:2)5(13:7:2)51010放置放置1212小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾

29、干小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干, ,喷喷 以以1010硫酸乙醇溶液，在硫酸乙醇溶液，在105105加热至斑点显色清晰，分加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯别置日光及紫外光灯(365(365nm)nm)下检视。供试品色谱下检视。供试品色谱 中，不得中，不得显与对照药材完全相一致的斑点。显与对照药材完全相一致的斑点。 3. 双酯型生物碱双酯型生物碱：毒性大，是乌头有大毒的：毒性大，是乌头有大毒的主要有效成分。乌头炮制过程中，双酯型主要有效成分。乌头炮制过程中，双酯型生物碱发生水解除去酯基后无毒性。生物碱发生水解除去酯基后无毒性。 3+n 制川乌中酯型生物碱的检查制川乌中酯型生物碱

30、的检查 高效液相色谱法高效液相色谱法n 附子理中丸中乌头碱的限量检查附子理中丸中乌头碱的限量检查 薄层色谱法薄层色谱法 第四节第四节 农药残留量的检查农药残留量的检查n常用农药按化学结构可分为：常用农药按化学结构可分为： 有机氯类有机氯类：六六六、：六六六、DDT 有机磷类有机磷类: 三硫磷、氯硫磷三硫磷、氯硫磷 苯氧羧酸类苯氧羧酸类 氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类 二硫代氨基甲酸酯类二硫代氨基甲酸酯类 无机农药无机农药 植物性农药植物性农药 其他其他一、供试品的制备n残留农药的提取残留农药的提取 根据农药的种类选取溶剂和提取方法根据农药的种类选取溶剂和提取方法常用溶剂常用溶剂：丙酮、乙腈、苯、氯仿

31、、二氯：丙酮、乙腈、苯、氯仿、二氯甲烷甲烷常用方法常用方法：索氏提取法、振荡提取法：索氏提取法、振荡提取法 n样品的纯化样品的纯化 常用步骤：常用步骤：LLP柱层析分离柱层析分离 二、检测方法：色谱法二、检测方法：色谱法 注意事项：注意事项：1、尽快分析、保存好、尽快分析、保存好2、避光，注意容器和包装材料、试剂、避光，注意容器和包装材料、试剂干扰干扰3、防止损失、防止损失气相色谱法n层析柱层析柱 常用玻璃柱或弹性石英毛细管柱；固常用玻璃柱或弹性石英毛细管柱；固定相常用非极性的或中等极性的溶液；单体一般定相常用非极性的或中等极性的溶液；单体一般为为8080100100目目n检测器检测器 有有机

32、氯农药常机氯农药常用电子捕获检测器用电子捕获检测器ECDECD；有机磷农药常用火焰光度检测器有机磷农药常用火焰光度检测器FPDFPD、氮磷检测器、氮磷检测器NPDNPD或质谱检测器或质谱检测器MSDMSDn固定液固定液 n担体担体n柱温柱温 程序升温，温度范围一般为程序升温，温度范围一般为100 100 300 300 n载气载气 高纯氮（高纯氮（99.9999.99），流量为），流量为5050150ml/min150ml/min高效液相色谱法：高效液相色谱法： 常用常用十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，色谱柱，甲醇甲醇- -水水或或乙腈乙腈- -水水作为流动相，检测器选用作为流

33、动相，检测器选用紫外紫外或或荧光检测荧光检测器器。 有机氯农药残留量检查有机氯农药残留量检查 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 弹性石英毛细管柱弹性石英毛细管柱SE-54(SE-54(或或DB-1701) DB-1701) 、电子捕获检测器，进样口、电子捕获检测器，进样口温度：温度：230230，检测器温度：，检测器温度：300300，不分流进样，程序升温，不分流进样，程序升温 对照品储备液对照品储备液 六六六（六六六（BHCBHC）-，-，-，-BHC-BHC，滴滴涕（，滴滴涕（DDTDDT）PP-PP-DDEDDE，-DDD-DDD，-DDT-DDT，OP-DDTOP-DD

34、T及五氯硝基苯（及五氯硝基苯（PCNBPCNB）+ +石油醚（石油醚（60-9060-90）分别制成每分别制成每1ml1ml约含约含4-54-5g g的溶液的溶液 混合对照品储备液的制备混合对照品储备液的制备 对照品储备液对照品储备液0.5ml 10ml0.5ml 10ml 混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备 取混合对照品储备液制成每取混合对照品储备液制成每1L1L含含0 0g g、1 1g g、5 5g g、1010g g、5050g g、100100g g、500500g g浓度系列。浓度系列。 有机氯农药残留量检查有机氯农药残留量检查 供试品溶液制备供试品溶液制备供试品研细，称取适

35、量（相当于药材供试品研细，称取适量（相当于药材2g2g），置），置100ml100ml具塞锥形瓶中，具塞锥形瓶中，+ +水水20ml20ml浸泡过夜，浸泡过夜，+ +丙酮丙酮40ml40ml，称定，超声处理，称定，超声处理30min30min，放冷，用，放冷，用丙酮补足减失的重量，丙酮补足减失的重量，+ +氯化钠约氯化钠约6g6g及及二氯甲烷二氯甲烷30ml30ml，称定，超声处，称定，超声处理理15min15min，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层，将有机相迅速，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层，将有机相迅速移入装有适量移入装有适量无水硫酸钠无水硫酸钠的的100ml100ml具塞锥形

36、瓶中，放置具塞锥形瓶中，放置4 4小时。精密小时。精密量取量取35ml35ml，于，于4040水浴减压浓缩至近干，加少量石油醚（水浴减压浓缩至近干，加少量石油醚（60609090）如前反复操作至）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（，用石油醚（60-9060-90）溶解并转移至溶解并转移至10ml10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（具塞刻度离心管中，加石油醚（60609090）至）至5ml5ml。+ +硫酸硫酸1ml1ml，振摇，振摇1 1分钟，离心（分钟，离心（30003000转转/ /分）分）1010分钟。精密量取分钟。精密量取上清液上清液2ml2ml置具刻度的浓

37、缩瓶，连接旋转蒸发器，置具刻度的浓缩瓶，连接旋转蒸发器， 4040（或用氮（或用氮气）将溶液气）将溶液浓缩浓缩至适量，精密稀释至至适量，精密稀释至1ml 1ml ，即得。，即得。 测定测定有机磷农药残留量检查有机磷农药残留量检查色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验：弹性石英毛细管柱：弹性石英毛细管柱DB-17MS(DB-17MS(或或HP-5)HP-5)、氮磷检测器，进样口温度：、氮磷检测器，进样口温度：230230，检测器温度：，检测器温度：300300，不分流进样，程序升温，不分流进样，程序升温对照品储备液对照品储备液 ：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、：对硫磷、甲基对硫磷

38、、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷，用乙酸乙酯，制成每敌畏、乙酰甲胺磷，用乙酸乙酯，制成每1ml1ml约含约含100100g g的溶的溶液液混合对照品储备液的制备混合对照品储备液的制备：对照品储备液：对照品储备液1ml 20ml1ml 20ml混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备：取混合对照品储备液制成每：取混合对照品储备液制成每1ml1ml含含0.10.1g g、0.50.5g g、1 1g g、2 2g g、5 5g g浓度系列。浓度系列。 有机磷农药残留量检查有机磷农药残留量检查供

39、试品溶液制备供试品溶液制备 供试品研细，称取适量（相当于药材供试品研细，称取适量（相当于药材5g5g），），+ +无水硫酸钠无水硫酸钠5g5g，+ +乙酸乙酯乙酸乙酯50-100ml50-100ml，冰浴超声处理，冰浴超声处理3min3min，放置，取上层，放置，取上层液滤过，药渣加液滤过，药渣加乙酸乙酯乙酸乙酯30-50ml30-50ml，冰浴超声处理，冰浴超声处理3min3min，放，放置，滤过，合并滤液，置，滤过，合并滤液， 4040减压浓缩至干，减压浓缩至干，+ +乙酸乙酯乙酸乙酯5ml5ml，使溶解。精密量取使溶解。精密量取1ml1ml，加到，加到活性炭小柱活性炭小柱（120-400

40、120-400目，目，0.25g0.25g），置多功能真空样品处理器上，用正己烷），置多功能真空样品处理器上，用正己烷- -乙酸乙酯乙酸乙酯（1:11:1）5ml5ml洗脱洗脱。洗脱液置氮吹仪上浓缩至近干。洗脱液置氮吹仪上浓缩至近干。+ +乙酸乙酯乙酸乙酯1ml1ml，溶解。，溶解。 测定测定有机磷农药残留量检查有机磷农药残留量检查1-1-敌敌畏敌敌畏 2-2-速灭速灭磷磷3-3-久效磷久效磷 4-4-甲拌甲拌磷磷5-5-巴胺磷巴胺磷 6-6-二嗪二嗪农农7-7-乙嘧硫磷乙嘧硫磷8-8-甲基嘧啶硫磷甲基嘧啶硫磷9-9-甲基对硫磷甲基对硫磷10-10-稻瘟净稻瘟净 11-11-水胺水胺硫磷硫磷1

41、2-12-氧化喹硫磷氧化喹硫磷13-13-稻丰散稻丰散 14-14-甲甲喹硫磷喹硫磷15-15-克线磷克线磷 16-16-乙乙硫磷硫磷十六种有机磷农药的气相色谱图十六种有机磷农药的气相色谱图拟除虫菊酯类农药残留量检查：拟除虫菊酯类农药残留量检查：气相色谱法气相色谱法 色谱条件与系统适用性试验：弹性石英毛细管柱色谱条件与系统适用性试验：弹性石英毛细管柱SE-54SE-54或或DB-5DB-5，电子捕获检测器。进样口温度，电子捕获检测器。进样口温度270270，检测器温度，检测器温度330330。选最佳的分流比。程序升温：理论塔板数按溴氰菊酯。选最佳的分流比。程序升温：理论塔板数按溴氰菊酯峰计算应

42、不低于峰计算应不低于1 110105 5，两个相邻色谱峰的分离度应大于，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.51.5。 对照品储备液的制备：氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯适对照品储备液的制备：氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯适量，用石油醚量，用石油醚(60(6090)90)分别制成每分别制成每1mL1mL约含约含20202525g g。 混合对照品储备液的制备：对照品储备液混合对照品储备液的制备：对照品储备液1ml 10ml1ml 10ml。混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备 量取混合对照品储备液，制成每量取混合对照品储备液，制成每1L1L分别含分别含0 0g g、4 4g g、8 8g g、40

43、40g g、200200g g的溶液。的溶液。供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取样约取样约l l2g2g；精密称定，置；精密称定，置100mL100mL具塞锥形瓶，加石油具塞锥形瓶，加石油醚醚(60(6090)-90)-丙酮丙酮(4:1)(4:1)混合溶液混合溶液30mL30mL，超声处理，超声处理1515分钟，分钟，滤过，药渣再重复上述操作滤过，药渣再重复上述操作2 2次后，合并滤液。滤液加入适量次后，合并滤液。滤液加入适量无水硫酸钠脱水后，于无水硫酸钠脱水后，于40404545减压浓缩至近干，用少量减压浓缩至近干，用少量石油醚石油醚(60(6090)90)反复操作至丙酮除净，残渣加适量石

44、油反复操作至丙酮除净，残渣加适量石油醚醚(60(6090)90)溶解，置混合小柱上，用石油醚溶解，置混合小柱上，用石油醚(60(6090)-90)-乙醚乙醚(4:1)(4:1)混合溶液混合溶液90mL90mL洗脱，收集洗脱液。于洗脱，收集洗脱液。于40404545减压浓缩至近干，再用石油醚减压浓缩至近干，再用石油醚(60(6090)390)34mL4mL重复重复操作至乙醚除净，用石油醚操作至乙醚除净，用石油醚(60(6090)90)溶解转移至溶解转移至5mL5mL量瓶量瓶中，并稀释至刻度。中，并稀释至刻度。 测定法测定法 分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的分别精密吸取供试品溶液和与之相对

45、应浓度的混合对照品溶液各混合对照品溶液各1 1L L，分别连续进样，分别连续进样3 3次，取次，取3 3次平均值。次平均值。按外标法计算。按外标法计算。黄曲霉素的检查黄曲霉素：黄曲霉素：极强的毒性和致癌性；极强的毒性和致癌性； 在紫外线照射下，能发出荧光；在紫外线照射下，能发出荧光； 耐热，在耐热，在280时发生裂解；时发生裂解； 低浓度时易受紫外线破坏，被氧化或遇碱被破低浓度时易受紫外线破坏，被氧化或遇碱被破坏；坏； 性质：性质：不溶于水，溶于油及氯仿、丙酮、甲醇不溶于水，溶于油及氯仿、丙酮、甲醇 测定方法：测定方法：HPLC、荧光分析法、免疫分析法荧光分析法、免疫分析法等等 高效液相色谱法

46、高效液相色谱法 原理：原理：黄曲霉毒素经衍生后得到能产生强荧光的物质，可黄曲霉毒素经衍生后得到能产生强荧光的物质，可 用荧光检测器进行检测。用荧光检测器进行检测。 衍生的方法：柱前三氟乙酸（衍生的方法：柱前三氟乙酸（TFATFA）衍生，柱后碘衍）衍生，柱后碘衍生和柱后过溴化溴化吡啶（生和柱后过溴化溴化吡啶（PBPBPBPB）衍生）衍生 本法灵敏度为本法灵敏度为0.2g0.2g/kg/kg 注意：注意：（1 1）应有相应的安全防护措施，并不要污染环境。）应有相应的安全防护措施，并不要污染环境。（2 2）残留有黄曲霉毒素的废液或残渣的玻璃器皿，应置）残留有黄曲霉毒素的废液或残渣的玻璃器皿，应置于专

47、用贮存容器（装有于专用贮存容器（装有10%10%次氯酸钠溶液）内，浸泡次氯酸钠溶液）内，浸泡2424小时小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。荧光分析法荧光分析法 黄曲霉毒素黄曲霉毒素B B1 1 - -香豆素钠盐香豆素钠盐 （荧光）（荧光） （无荧光）（无荧光） 激发波长激发波长360nm360nm，发射波长，发射波长450nm450nm免疫化学分析法免疫化学分析法 酶连免疫法（酶连免疫法（ELISAELISA）NaOHNaOHHClHCl第六节第六节 二氧化硫残留量测定法二氧化硫残留量测定法一、蒸馏滴定法一、蒸馏滴定法 （中国药典中国药典方法）方法） A

48、A为为1000mL1000mL两颈圆底烧瓶；两颈圆底烧瓶；B B为竖式回流冷凝管；为竖式回流冷凝管；C C为为( (带刻度带刻度) )分液漏斗；分液漏斗；D D为连接氮气流入口；为连接氮气流入口；E E为二氧化硫气为二氧化硫气体导出口。体导出口。 测定法测定法 取药材细粉约取药材细粉约10g10g，精密称定，置两颈圆底，精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水烧瓶中，加水300300400mL400mL和和6mol/L6mol/L盐酸溶液盐酸溶液lOmLlOmL，连接刻，连接刻度分液漏斗，并导入氮气至瓶底，连接回流冷凝管，在冷度分液漏斗，并导入氮气至瓶底，连接回流冷凝管，在冷凝管的上端凝管的上端E E

49、口处连接导气管，将导气管插入口处连接导气管，将导气管插入250mL250mL锥形瓶锥形瓶底部。锥形瓶内加水底部。锥形瓶内加水125mL125mL和淀粉指示液和淀粉指示液1mL1mL作为吸收液，作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌。加热两颈烧瓶内的溶液至沸，置于磁力搅拌器上不断搅拌。加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸约并保持微沸约3 3分钟后开始用碘滴定液分钟后开始用碘滴定液(0.01 mol/L)(0.01 mol/L)滴定，滴定，至蓝色或蓝紫色持续至蓝色或蓝紫色持续2020秒钟不褪，并将滴定的结果用空白秒钟不褪，并将滴定的结果用空白试验校正。试验校正。 供试品中二氧化硫残留量供试品中二氧化

50、硫残留量(mg/g)= (mg/g)= WC1000032. 0)VV(0 V V为供试品消耗碘滴定液的体积，为供试品消耗碘滴定液的体积，mLmL； V V0 0为空白消耗碘滴定液的体积，为空白消耗碘滴定液的体积，mLmL； C C为碘滴定液浓度，为碘滴定液浓度，0.01mol/L0.01mol/L； W W为供试品的重量，为供试品的重量，g g； O.032O.032为每为每1mL1mL碘滴定液碘滴定液(1 moL/L)(1 moL/L)相当的二氧化硫的相当的二氧化硫的质量，质量，g g。 Monier Williams Monier Williams改良法（韩国）：改良法（韩国）： 原理为

51、：中药材蒸馏出的原理为：中药材蒸馏出的S0S02 2被被3%3%过氧化氢溶液氧化成硫过氧化氢溶液氧化成硫酸后，在微量滴定管中用酸后，在微量滴定管中用0.0lmol/L0.0lmol/L氢氧化钠溶液滴定。由氢氧化钠溶液滴定。由氢氧化钠溶液的消耗量可计算出氢氧化钠溶液的消耗量可计算出S0S02 2的量。的量。二、四氯汞钠二、四氯汞钠- -副玫瑰苯胺比色法副玫瑰苯胺比色法 利用样品中的亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合利用样品中的亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫色络合物，在物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫色络合物，在分光光度计上与标准系列比较定量。分

52、光光度计上与标准系列比较定量。三、离子色谱法三、离子色谱法四、示波极谱法四、示波极谱法 第七节第七节 树脂残留物检查树脂残留物检查残留溶剂测定：气相色谱法残留溶剂测定：气相色谱法一、色谱柱一、色谱柱1. 1. 毛细管柱毛细管柱（1 1）非极性色谱柱）非极性色谱柱 固定液为固定液为100%100%的二甲基聚硅氧烷的二甲基聚硅氧烷 （2 2）极性色谱柱）极性色谱柱 固定液为聚乙二醇（固定液为聚乙二醇（PEG-20MPEG-20M）（3 3）中极性色谱柱）中极性色谱柱 固定液为（固定液为（35%35%）二苯基）二苯基- -（65%65%）甲基聚硅氧）甲基聚硅氧烷、（烷、（50%50%）二苯基）二苯基

53、- -（50%50%）二甲基聚硅氧烷、）二甲基聚硅氧烷、（35%35%）二苯基）二苯基- -（65%65%）二甲基聚硅氧烷、（）二甲基聚硅氧烷、（14%14%）氰丙基苯基氰丙基苯基- -（85%85%）二甲基聚硅氧烷、（）二甲基聚硅氧烷、（6%6%）氰丙）氰丙基苯基基苯基- -（94%94%）二甲基聚硅氧烷等。）二甲基聚硅氧烷等。（4 4）弱极性色谱柱）弱极性色谱柱 固定液为（固定液为（5%5%）苯基）苯基- -（95%95%）甲基聚硅氧烷、）甲基聚硅氧烷、（5%5%）二苯基）二苯基- -（95%95%）二甲基硅氧烷共聚物的毛细）二甲基硅氧烷共聚物的毛细管柱等。管柱等。 以直径为以直径为0.1

54、80.180.25mm0.25mm的二乙烯苯的二乙烯苯- -乙基乙烯乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料为固定相。苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料为固定相。2. 2. 填充柱填充柱二、系统适用性试验二、系统适用性试验 1. 1. 用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于一般不低于50005000；填充柱的理论板数一般不低于；填充柱的理论板数一般不低于10001000。 2. 2. 色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于应大于1.51.5。 3. 3. 以内标法测定时，对照品

55、溶液连续进样以内标法测定时，对照品溶液连续进样5 5次，所得待次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSDRSD）应不大于）应不大于5%5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSDRSD应不大于应不大于10%10%。三、供试品溶液的制备三、供试品溶液的制备 1. 1. 顶空进样顶空进样 除另有规定外，精密称取供试品除另有规定外，精密称取供试品0.10.11g1g；常以水为溶；常以水为溶剂；非水溶性药物，可采用剂；非水溶性药物，可采用N,N-N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂

56、；选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测或其他适宜溶剂；选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，定。根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。其浓度应满足系统定量测定的需要。2. 2. 溶液直接进样溶液直接进样 精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要度应满足系统定量测定的需要四、对照品溶液的制备四、对照品溶液的制备 精密称取各

57、品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液；与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液； 以水作溶剂，先将待测有机溶剂溶解在以水作溶剂，先将待测有机溶剂溶解在50%50%二甲基亚砜二甲基亚砜或或N,N-N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。 如为限度检查，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶如为限度检查，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；液的浓度； 如为定量测定，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量如为定量测定，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶

58、液的浓度；通常对照品溶液色谱峰面积不宜超确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的2 2倍。必要时，倍。必要时，应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。五、测定法五、测定法1. 1. 第一法第一法 （毛细管柱顶空进样等温法）（毛细管柱顶空进样等温法） 色谱条件：色谱条件： 柱温一般为柱温一般为4040100100；常以氮气为载气，流速为每；常以氮气为载气，流速为每分钟分钟1.01.02.0mL2.0mL；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70708585，顶空瓶平衡时间为顶空瓶平衡时间为30306060分钟；进样口温度为分钟；进样口温度为200200；如采；如采用火焰离子化检测器（用火焰离子化检测器（FIDFID），温度为），温度为250250。 测定法：测定法： 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2 2次，次，测定待测峰的峰面积。测定待测峰的峰面积。适用于需检查有机溶剂的数量不多，且极性差异较小时。适用于需检查有机溶剂的数量不多，且极性差异较小时。2. 2. 第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法）第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法）适用于需检查的有机溶剂数量较多，