IGF基因启动子甲基化状态实用教案

1、研究(ynji)背景 肝细胞癌(HCC)是与慢性(mn xng)病毒感染密切相关 流行病调查，我国目前约9 300万乙肝病毒携带者，约4 000万丙型肝炎病毒感染者。 预后差，5年生存率约11%。第1页/共19页第一页，共20页。原癌基因激活(j hu)抑癌基因失活肝癌(n i)第2页/共19页第二页，共20页。DNA 甲基化原理(yunl)DNA甲基化主要(zhyo)发生在CpG二核苷序列的胞嘧啶上第3页/共19页第三页，共20页。胰岛素样生长因子胰岛素样生长因子（IGF-）uIGF-是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原，在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。u IGF-在胎肝和新生

2、儿肝脏中基因有大量表达,但出生后基因迅速降低直至关闭(gunb),肝细胞癌变时IGF2 呈胚胎性过量表达,并具有强烈的致有丝分裂剂作用,参与肿瘤细胞增生及分化。第4页/共19页第四页，共20页。第5页/共19页第五页，共20页。IGF-基因启动子与基因表达(biod)的关系E1 E2 E3E4E5E6 E7 E8E9P1P2P3P4人P2第6页/共19页第六页，共20页。IGF-信号途径(tjng)与肝癌IGF- IRSSHCPI3KAktRasRafMAPKIGF-RProliferation Survival MetastasisIGF- IGF- 第7页/共19页第七页，共20页。 实验

3、(shyn)目的 本研究动态观察(gunch)鼠肝细胞癌变过程中IGF-基因启动子甲基化状态改变及其与IGF-基因表达的关系； 同时分析人不同肝组织中IGF-基因启动子甲基化状态及与临床病理学特征之间的关系，探讨IGF-启动子甲基化状态改变在HCC形成中的作用机制。 第8页/共19页第八页，共20页。材料(cilio)和方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性Sprague-Dawley（SD）鼠诱发肝细胞癌变，通过病理组织学方法（HE染色）观察肝细胞形态学动态变化； 以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测鼠IGF-基因P2甲基化状态；以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测鼠外周血和肝组

4、织IGF-基因的蛋白表达水平； 以MSP检测人类(rnli)肝细胞癌、癌旁以及正常肝脏组织IGF-基因P3甲基化状态。 第9页/共19页第九页，共20页。图1 诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（HE染色200）A：正常；B：早期；C：中期(zhngq)；D：晚期结果(ji gu)与讨论第10页/共19页第十页，共20页。图2 癌变(i bin)过程中鼠IGF-P2 CpG岛甲基化状态电泳分析M：甲基化；U：非甲基化；1：正常肝；2：变性肝；3：癌前肝；4：癌变(i bin)肝；5：部分甲基化第11页/共19页第十一页，共20页。表1 诱癌过程中IGF-P2甲基化状态的动态(dngti)观察

5、第12页/共19页第十二页，共20页。表2 诱癌过程(guchng)中鼠血和肝IGF-表达水平的定量分析1、Pearson相关显示(xinsh)，鼠肝和血IGF-蛋白浓度呈正相关（r，P）2、Spearman相关显示(xinsh)，IGF-P2去甲基化与外周血（rs，P ）和鼠肝蛋白浓度均呈正相关（rs，P）第13页/共19页第十三页，共20页。图3 人肝癌组织(zzh)IGF-基因P3CpG岛甲基化电泳图谱U: 非甲基化；M：甲基化；T: 癌；NT：癌旁；N: 正常肝；m: marker第14页/共19页第十四页，共20页。表3 人肝癌(n i)组织中IGF-基因P3甲基化率比较 第15页/

6、共19页第十五页，共20页。表4 癌旁组织(zzh)IGF-P3甲基化的临床病理学特征第16页/共19页第十六页，共20页。结 论1. 随着肝细胞癌变，IGF-基因启动子的甲基化率逐步降低，甲基化状态的改变贯穿肝细胞癌变过程，这有助于探讨肝癌发病机制。2. IGF-基因启动子的去甲基化状态改变与蛋白表达水平呈现显著正相关(xinggun)，基因的去甲基化调控基因表达上调而导致蛋白水平增高，参与肝细胞癌变。3. IGF-II启动子CpG岛甲基化程度与HBV感染与否密切相关(xinggun)，而这对于HBV相关(xinggun)肝细胞癌发生的监测/预测具有潜在的应用前景。第17页/共19页第十七页，共20页。第18页/共19页第十八页，共20页。感谢您的观看(gunkn)！第19页/共19页第十九页，共20页。NoImage内容(nirng)总结研究背景。第2页/共19页。胰岛素样生长因子（IGF-）。IGF-是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原，在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。IGF-在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量(dling)表达,但出