植物检疫危险性细菌

1、 植物检疫性病原细菌的检验方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米细菌性枯萎病 Stewarts bacterial wilt of corn 椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing 柑橘黄龙病 Citrus Yellow shoot复习思考题第一节第一节 植物病原细菌检疫检验技术植物病原细菌检疫检验技术 直接检测：直观检验和生长检验 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测1、活菌检测 分离培养法：分离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴别营养培养基、选择培养基或鉴别培养基分离纯化得到的细菌培养基分离纯化得到的细菌 浓缩接种及离体叶检

2、测：浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感病提取液浓缩接种感病植物，观测发病情况。植物，观测发病情况。 例如：浙江大学等在例如：浙江大学等在1 1灭菌水琼脂中加灭菌水琼脂中加757510106 6的苯并咪唑，做平板，加感病植物叶片，的苯并咪唑，做平板，加感病植物叶片，针刺摩擦接种，培养（光、温、湿度），短期针刺摩擦接种，培养（光、温、湿度），短期获得症状。主要应用于水稻细菌性条斑病菌和小获得症状。主要应用于水稻细菌性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。麦细菌性黑颖病菌的检测。2.免疫吸附分离法 原理：结合血清学与平板分离技术，利用原理：结合血清学与平板分离技术，利用与抗原高度亲和性的抗体，来捕

3、获目标细与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。标细菌转移或释放到培养基上生长。 方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸附稀释培养法附稀释培养法常用溶入丙酮的硝酸纤常用溶入丙酮的硝酸纤维素或指甲油作包被维素或指甲油作包被洗涤液使用包被缓冲液洗涤液使用包被缓冲液平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下：平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下：3.噬菌体检验 原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞，在液体原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞，在液体培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变清，

4、在固体平培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变清，在固体平板上培养，则出现许多边缘整齐、透明光亮的噬板上培养，则出现许多边缘整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专化性，利用此特点，可鉴别菌斑。噬菌体具有专化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类。细菌的种类。4.非活菌检测 非活菌检测的方法很多，下表是检测病原细菌常非活菌检测的方法很多，下表是检测病原细菌常用的一些方法，前用的一些方法，前9 9种血清学方法，均属非活菌检种血清学方法，均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定，又能直接用于病种测。它们既能用于病原鉴定，又能直接用于病种或病株，甚至是无症感染组织的检测。或病株，甚至是无症感染组织的检测。5.血清学检验

5、原理：原理： 方法：酶联免疫吸附实验（方法：酶联免疫吸附实验（ELISAELISA）、免疫荧光抗）、免疫荧光抗体法体法 免疫荧光抗体法：将荧光染料（异硫氢酸荧光黄或免疫荧光抗体法：将荧光染料（异硫氢酸荧光黄或罗丹明）与抗体以化学方法接合，再与抗体反应，罗丹明）与抗体以化学方法接合，再与抗体反应，形成有荧光标记的抗体形成有荧光标记的抗体抗原复合物，在荧光显微抗原复合物，在荧光显微镜下，可观察到黄绿色荧光。镜下，可观察到黄绿色荧光。 1878 1878年首先由年首先由burrillburrill描述，在纽约发生，后描述，在纽约发生，后由由ErwinErwin命名，是第一个被确定的植物细菌病害。命名

6、，是第一个被确定的植物细菌病害。主要分布于北美洲于西北欧，中欧、地中海、东南主要分布于北美洲于西北欧，中欧、地中海、东南欧及大洋州和亚洲也有分布。大约欧及大洋州和亚洲也有分布。大约4040多个国家。多个国家。第二节 检疫性病原原核生物一、梨火疫病一、梨火疫病 Fire blight of pear梨火疫病的地理分布梨火疫病的分布范围梨火疫病的分布范围 梨火疫病菌寄主范围很广，能为害梨、苹梨火疫病菌寄主范围很广，能为害梨、苹果、山楂、木旬子、李等多个属果、山楂、木旬子、李等多个属220多多种植物，大部分属蔷薇科种植物，大部分属蔷薇科Pomoideae亚科。亚科。 蔷薇科仁果类果树的一种毁灭性病害

7、。一蔷薇科仁果类果树的一种毁灭性病害。一棵多年生的梨和苹果树发病后可在几星期棵多年生的梨和苹果树发病后可在几星期内死亡内死亡红果、苹果等侵害花、果实、枝条和叶片。侵害花、果实、枝条和叶片。 1 1）花枯萎（）花枯萎（花花器侵入）器侵入）: :侵染后变深褐色，枯萎。侵染后变深褐色，枯萎。2 2）叶片叶片侵入侵入: :从叶缘沿叶脉扩展，先呈水浸状后黑褐从叶缘沿叶脉扩展，先呈水浸状后黑褐色色3 3）嫩稍嫩稍: :先水浸状，后褐色至黑色，向下弯曲呈鱼钩先水浸状，后褐色至黑色，向下弯曲呈鱼钩状状4)4)果实果实侵入侵入：病部褐色凹陷，扩展到全果，潮湿时病：病部褐色凹陷，扩展到全果，潮湿时病 部生粘稠细菌

8、溢，初乳白色，后红褐色。部生粘稠细菌溢，初乳白色，后红褐色。Advanced fire blight on fruit - note bacterial ooze on fruit. 5)5)病枝病枝: :叶片凋萎，幼果僵化，但病叶病果不脱落，叶片凋萎，幼果僵化，但病叶病果不脱落， 远望似火烧状，故称火疫病。远望似火烧状，故称火疫病。 A branch of apple infected by fire blight 6)6)伤口：初期水浸状，后下陷，呈溃疡斑，病健交伤口：初期水浸状，后下陷，呈溃疡斑，病健交界处产生龟裂纹，韧皮部红褐色，有黏液状菌脓。界处产生龟裂纹，韧皮部红褐色，有黏液状菌脓

9、。Fire blight canker in root stock. Bark cut away showing fire blight in root stock. 严重时，病害从严重时，病害从嫩稍很快扩展到嫩稍很快扩展到枝条、主干，直枝条、主干，直至根部，全株死至根部，全株死亡。亡。 Fireblight in nursery stock u主要鉴定特征：主要鉴定特征： 最典型的症状是花、果实和叶片受火疫病菌侵最典型的症状是花、果实和叶片受火疫病菌侵害后，很快变黑褐色枯萎，犹如火烧一般，但仍害后，很快变黑褐色枯萎，犹如火烧一般，但仍挂在树上不落，故此得名。目前国际上将其症状挂在树上不落，故

10、此得名。目前国际上将其症状据受侵害的部位，分成个阶段。据受侵害的部位，分成个阶段。 （1 1）花枯萎：侵染开放的花引起花枯萎。一般发生）花枯萎：侵染开放的花引起花枯萎。一般发生于早春，病菌直接从花器侵入，初为水渍状斑，花基于早春，病菌直接从花器侵入，初为水渍状斑，花基部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可扩展至花梗及花簇部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可扩展至花梗及花簇中其它的花；在温暖潮湿条件下，花梗上有菌脓渗出。中其它的花；在温暖潮湿条件下，花梗上有菌脓渗出。随着枯萎发展，花梗、花等变褐至黑褐色，条件适宜随着枯萎发展，花梗、花等变褐至黑褐色，条件适宜时可继续侵染杀死小枝并形成小溃疡斑。时可继续侵染杀死

11、小枝并形成小溃疡斑。（2 2）溃疡枯萎：前一季越冬溃疡边缘的病菌重新复活）溃疡枯萎：前一季越冬溃疡边缘的病菌重新复活的结果。初症是在复活的溃疡附近的健康树皮组织上的结果。初症是在复活的溃疡附近的健康树皮组织上出现窄的水渍状区，几天后，树皮内部组织出现褐色出现窄的水渍状区，几天后，树皮内部组织出现褐色条斑，随后病菌侵入附近繁殖枝内部并引起萎蔫死亡。条斑，随后病菌侵入附近繁殖枝内部并引起萎蔫死亡。这些枝条特别这些枝条特别是嫩枝与下面是嫩枝与下面谈及的枝枯萎谈及的枝枯萎有明显区别，有明显区别，即在萎蔫之前即在萎蔫之前枝尖芽褪色枝尖芽褪色（黄至桔黄（黄至桔黄色）。色）。（3）枝枯萎：细菌直接侵入前）枝

12、枯萎：细菌直接侵入前 13叶的枝尖，然后叶的枝尖，然后杀死整个枝条及支持枝。初症是枝尖萎蔫，但萎蔫前杀死整个枝条及支持枝。初症是枝尖萎蔫，但萎蔫前不褪色，象拐杖状。条件适宜时，几天内可移动不褪色，象拐杖状。条件适宜时，几天内可移动1530cm，造成整枝死亡，病枝、枝皮、叶通常变黑。，造成整枝死亡，病枝、枝皮、叶通常变黑。潮湿时，枝条上出现菌脓。后期，终芽前出现的枝枯潮湿时，枝条上出现菌脓。后期，终芽前出现的枝枯萎一般不会萎蔫，且仅在枝最上部出现坏死。随着病萎一般不会萎蔫，且仅在枝最上部出现坏死。随着病菌不断深入，并侵染主干，皮层收缩，下陷，形成溃菌不断深入，并侵染主干，皮层收缩，下陷，形成溃疡

13、斑。疡斑。（4）病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞，）病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞，或由风引起的伤口侵入叶片，初叶边坏死，并向或由风引起的伤口侵入叶片，初叶边坏死，并向中脉、中柄、茎扩展，后变黑，通常有菌脓。中脉、中柄、茎扩展，后变黑，通常有菌脓。（5）损伤枯萎和砧木枯萎：这二种比较特殊，前者）损伤枯萎和砧木枯萎：这二种比较特殊，前者主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起，如果实主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起，如果实 很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种EMAL-26、 EMLA-9和和MARK-39砧木。通常是砧木。通常是由感病的接穗

14、在这些砧木上发病后引起，最终成由感病的接穗在这些砧木上发病后引起，最终成溃疡带而杀死树体。溃疡带而杀死树体。 学名：Erwinia amylovora（Burrill）Winslow 异名： Micrococcus amylovorus Burril Bacillus amylovorus (Burrill) Trevisan Bacterium amylovorus (Burrill) Chester 分类地位：原核生物界(Procaryotes),薄壁菌门(Gracilicutes),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)欧文氏菌属(Erwinia)解淀粉欧文氏菌 形态特征：直杆

15、，有荚膜，周生鞭毛，能运动，大形态特征：直杆，有荚膜，周生鞭毛，能运动，大小为小为0.9-1.8 0.6-1.5m，多数单生，有时成双或短，多数单生，有时成双或短时间内时间内3-4个呈链状。革兰氏染色阴性。在蔗糖培养个呈链状。革兰氏染色阴性。在蔗糖培养基上基上27下培养下培养3d，菌落直径，菌落直径34mm，白色至奶，白色至奶油色，半球形隆起，有黏性，表面光滑，边缘整齐，油色，半球形隆起，有黏性，表面光滑，边缘整齐，中心绒环状。中心绒环状。 兼性厌氧，过氧化物酶阳性，氧化兼性厌氧，过氧化物酶阳性，氧化酶阴性，好气条件下利用葡萄糖产酸不产气，厌酶阴性，好气条件下利用葡萄糖产酸不产气，厌氧条件产酸

16、缓慢。明胶碟形液化缓慢。不产生硫氧条件产酸缓慢。明胶碟形液化缓慢。不产生硫化氢，不利用丙二酸盐。葡萄糖酸盐氧化和七叶化氢，不利用丙二酸盐。葡萄糖酸盐氧化和七叶苷水解不稳定。氯化钠浓度高于苷水解不稳定。氯化钠浓度高于2以上时生长延以上时生长延缓，至缓，至67%时则完全抑制。时则完全抑制。 抗青霉素，对氯抗青霉素，对氯霉素、链霉素和土霉素敏感。霉素、链霉素和土霉素敏感。 细菌生长的温度范围细菌生长的温度范围637 ，最适温度，最适温度2527.5，致死温度，致死温度4550，10 min，最适酸碱度，最适酸碱度为为PH6.0。 梨火疫病菌以简单的细胞分裂繁殖，一个细胞梨火疫病菌以简单的细胞分裂繁殖

17、，一个细胞在条件适宜时，天内在寄主植物组织中能达到在条件适宜时，天内在寄主植物组织中能达到109细胞。细胞。 除蛋白酶外，病菌不产任何有助于侵入寄主的除蛋白酶外，病菌不产任何有助于侵入寄主的酶，主要通过胞间组织侵入薄壁组织的病菌产生酶，主要通过胞间组织侵入薄壁组织的病菌产生胞外多糖。胞外多糖在病害发展过程中起重要的胞外多糖。胞外多糖在病害发展过程中起重要的作用，是菌脓的重要成份。作用，是菌脓的重要成份。 菌脓的理化性质随湿度变化而变化，干时皱、菌脓的理化性质随湿度变化而变化，干时皱、硬，大时膨胀易被雨水扩散，中等湿度的菌脓易硬，大时膨胀易被雨水扩散，中等湿度的菌脓易被昆虫、风传播。被昆虫、风传

18、播。u发病规律：发病规律： 病菌在病株病疤边缘组织处越冬，挂在树上病菌在病株病疤边缘组织处越冬，挂在树上的病果也是越冬场所，如果冬季温和，病菌还能的病果也是越冬场所，如果冬季温和，病菌还能在病株树皮上度过，来年早春病菌在上年的溃疡在病株树皮上度过，来年早春病菌在上年的溃疡处迅速繁殖，遇到潮湿、温和的天气，从病部渗处迅速繁殖，遇到潮湿、温和的天气，从病部渗出大量乳白色粘稠状的细菌分泌物，即为当年的出大量乳白色粘稠状的细菌分泌物，即为当年的初侵染源。初侵染源。 u发病规律：发病规律： 通过昆虫、雨滴、风、鸟类以及人的田间操通过昆虫、雨滴、风、鸟类以及人的田间操作将病菌传给健株。作将病菌传给健株。

19、病菌亦通过伤口、自然孔口（气孔、蜜腺、病菌亦通过伤口、自然孔口（气孔、蜜腺、水孔）、花侵入寄主组织，有一定损伤的花、叶、水孔）、花侵入寄主组织，有一定损伤的花、叶、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。幼果和茂盛的嫩枝最易感病。适生性：适生性：胡白石、许志刚. 梨火疫病的进境风险分析，植物保护学报，2001 28（4），303-308 近距离传播：雨水是果园短距离传播的主要因近距离传播：雨水是果园短距离传播的主要因子，其次风亦是中短距离传播的重要因子，往子，其次风亦是中短距离传播的重要因子，往往在沿着盛行风的方向，病原菌以单个菌体或往在沿着盛行风的方向，病原菌以单个菌体或菌脓被风携带到较远距离。除次之外，

20、昆虫对菌脓被风携带到较远距离。除次之外，昆虫对病菌的传播扩散起一定的作用。传病昆虫包括病菌的传播扩散起一定的作用。传病昆虫包括蜜蜂在内有蜜蜂在内有77个属的个属的100多种昆虫，其中密蜂的多种昆虫，其中密蜂的传病距离约为传病距离约为200 400 m 。 远距离传播：主要是感病寄主繁殖材料，包括远距离传播：主要是感病寄主繁殖材料，包括种苗、接穗、砧木、水果、被污染的运输工具、种苗、接穗、砧木、水果、被污染的运输工具、候鸟等。候鸟等。梨火疫病的远距离传播梨火疫病的远距离传播发生条件：发生条件： 受伤的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵受伤的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵染。经冰雹袭击，病害蔓延更加迅速。

21、染。经冰雹袭击，病害蔓延更加迅速。 较高气温（较高气温（1824） 较高湿度（较高湿度（70以上）利于病菌侵染。以上）利于病菌侵染。u检验方法：检验方法： 1.产地检验：产地检验：2.症状观察：梨火疫病的症状很典型，是鉴定的重症状观察：梨火疫病的症状很典型，是鉴定的重要方法，但必须与其他症状相似的梨梢枯病区分要方法，但必须与其他症状相似的梨梢枯病区分开。开。 梨梢枯病仅限于危害花器、叶片和嫩梢，不梨梢枯病仅限于危害花器、叶片和嫩梢，不危害枝条和茎干，病部无细菌溢脓，叶片上最初危害枝条和茎干，病部无细菌溢脓，叶片上最初为深褐色斑点，周围有红色晕圈，枯死的病叶不为深褐色斑点，周围有红色晕圈，枯死的

22、病叶不会长期挂在树上会长期挂在树上3.可采用选择性培养基和鉴别培养基。可采用选择性培养基和鉴别培养基。 MS培养基菌落为红橙色，背景为兰绿色。配培养基菌落为红橙色，背景为兰绿色。配方：琼脂方：琼脂20g，甘露醇，甘露醇10g， L-天门冬酰胺天门冬酰胺3g，牛胆，牛胆酸钠酸钠2.5g，磷酸氢二钾，磷酸氢二钾2.0g，烟酸，烟酸0.5g，MgSO47H2O0.2g，次氮基三乙酸，次氮基三乙酸0.2g，硫酸十七烷，硫酸十七烷基钠基钠0.1ml，0.5%溴麝香草酚兰水溶液溴麝香草酚兰水溶液9ml，0.5%中中性红性红2.5ml，蒸馏水，蒸馏水970ml，pH7.3灭菌后加灭菌后加1%放线菌放线菌酮酮

23、5ml，1%硝酸铯水溶液硝酸铯水溶液1.75ml。 CG培养基培养基29培养培养48h后形成火山口状菌落。后形成火山口状菌落。配方：水配方：水380ml，蔗糖，蔗糖160g，营养琼脂，营养琼脂12g，结晶紫，结晶紫0.8ml（1%乙醇溶液），乙醇溶液），0.1%放线菌酮放线菌酮20ml。梨火疫病菌致病性试验可用梨片或梨梨火疫病菌致病性试验可用梨片或梨嫩枝测定，亦可用烟草过敏反应检查。嫩枝测定，亦可用烟草过敏反应检查。NA上培养上培养48小时的细菌配成小时的细菌配成108 cells /ml的悬液，注入烟草叶的悬液，注入烟草叶片或接种于片或接种于1cm厚梨片、或针刺接种于丈长的嫩厚梨片、或针刺接

24、种于丈长的嫩枝条，枝条，28下培养。一般下培养。一般1012h后，烟草注射区后，烟草注射区出现白色坏死斑。出现白色坏死斑。13天后，梨片或枝条上出现白天后，梨片或枝条上出现白色高度隆起菌脓，则可确诊。色高度隆起菌脓，则可确诊。免疫荧光、免疫荧光、ELISA、ODD和凝集试和凝集试验验 等常规方法和近年发展起来的免疫分离法。等常规方法和近年发展起来的免疫分离法。6.分子生物学方法：核酸探针和分子生物学方法：核酸探针和PCR技术技术检疫和防治检疫和防治 1.严格检疫，禁止从疫区引入蔷薇科仁果类树苗。严格检疫，禁止从疫区引入蔷薇科仁果类树苗。 2.剪除病梢、病枝。剪除病梢、病枝。 3.药剂防治：药剂

25、防治：120mg/kg链霉素喷雾，或花期用链霉素喷雾，或花期用波尔多液喷雾防治，效果很好。波尔多液喷雾防治，效果很好。 4.种植抗病品种。种植抗病品种。 5.避免在低洼易涝地定植。芽前刮除发病树皮，避免在低洼易涝地定植。芽前刮除发病树皮，在生长季节每隔在生长季节每隔7天检查天检查1次各种发病新梢和组织，次各种发病新梢和组织，发现后及时剪除。对因各种农事操作造成的伤口都发现后及时剪除。对因各种农事操作造成的伤口都要进行涂药保护等。要进行涂药保护等。 Stewarts bacterial wilt of corn：1889年纽约首先报道，现已年纽约首先报道，现已20多个多个国家。分布于美国、加拿大

26、、墨西哥、越国家。分布于美国、加拿大、墨西哥、越南、泰国、马来西亚、前苏联、波兰、瑞南、泰国、马来西亚、前苏联、波兰、瑞士、意大利、前南斯拉夫、罗马尼亚、希士、意大利、前南斯拉夫、罗马尼亚、希腊、哥斯达黎加、波多黎各、圭亚那、腊、哥斯达黎加、波多黎各、圭亚那、秘鲁、巴西。秘鲁、巴西。 主要是甜玉米，也侵染马齿玉米、粉质玉主要是甜玉米，也侵染马齿玉米、粉质玉米、硬粒玉米和爆裂玉米。米、硬粒玉米和爆裂玉米。： 维管束病害、毁灭性病害。维管束病害、毁灭性病害。：整个生育期可危害，以开花期症状最明显。早期：植株矮化，萎蔫，雄穗退色早枯，叶片上形成不规则的或波状边缘的条斑，初期水浸状，黄色，与叶脉平行，

27、贯穿全叶，宽110mm，严重时病叶萎蔫死亡。： 后期：叶片产生许多小病斑，结合成大块，火烧后期：叶片产生许多小病斑，结合成大块，火烧状干枯死亡。髓部有空腔，导管被黄色黏液阻塞，状干枯死亡。髓部有空腔，导管被黄色黏液阻塞，萎蔫植株的下部切口有黄色细菌溢脓。萎蔫植株的下部切口有黄色细菌溢脓。： 果穗：菌脓可通过内层包叶的气孔渗出，籽粒表果穗：菌脓可通过内层包叶的气孔渗出，籽粒表面沾满细菌菌脓，病籽粒变形、皱缩和变色。面沾满细菌菌脓，病籽粒变形、皱缩和变色。细菌溢细菌溢：玉米细菌性枯萎病菌：玉米细菌性枯萎病菌 学名学名 Pantoeastewartii(Smith) Mertaert et al.

28、异名异名 Erwiniastewartii(Smith) Dye；Pseudomonasstewartii Smith; Apalnobacterstewartii (Smith) McCulloch; Bacillusstewartii(Smith) Holland; Bacteriumstewartii( Smith) Smith; Phytomonasstewartii (Smith) Bergye et al; Pseudobacteriumstewartii(Smith) Hrasilnikov,1949; Xanthomomasstewartii(Smith) Dowson英文名英

29、文名 Stewarts bacterial wilt of corn 分类地位分类地位 原核生物界原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌门，薄壁菌门(Gracilicutes)，肠杆菌科，肠杆菌科(Enterobacteri-aceae)，泛，泛菌属菌属(Pantoea)u 形态特征：好气性短杆菌，两形态特征：好气性短杆菌，两端钝圆，无鞭毛，有荚膜，端钝圆，无鞭毛，有荚膜，G，单生或双生，单生或双生，0.40.80.92.2。在牛肉膏。在牛肉膏培养基上形成黄色圆形菌落，培养基上形成黄色圆形菌落，全缘，全缘，u 细菌生长温度最低温度细菌生长温度最低温度89，最适温度最适温度30，最高温度，

30、最高温度39，致死温度致死温度53 10min，适宜，适宜PH4.58.5，最适，最适6.08.0。：u初侵染来源初侵染来源带菌的种子和昆虫。土壤和病原带菌的种子和昆虫。土壤和病原残体不能越冬，昆虫是病原细菌的传播介体和重残体不能越冬，昆虫是病原细菌的传播介体和重要的越冬场所。最重要的传病昆虫是玉米叶甲，要的越冬场所。最重要的传病昆虫是玉米叶甲，它以成虫带菌越冬，细菌存在于消化道中。越冬它以成虫带菌越冬，细菌存在于消化道中。越冬后现在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并产卵后现在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并产卵发育成新一代成虫，继续向其它植株传病。发育成新一代成虫，继续向其它植株传病。Corn

31、 flea beetle (Chatocnema pulicaria) vector of the Stewarts wilt bacterium (Pantoea stewartii). ：发病与流行主要：发病与流行主要决定于冬季气温决定于冬季气温（12、1、2月）的高低，若平均气温总和在月）的高低，若平均气温总和在37以上以上，有利虫媒越冬，带菌昆虫成活率高，有利虫媒越冬，带菌昆虫成活率高，有可能引起发病。有可能引起发病。低于低于32则很少流行则很少流行。此外，。此外，有利于发病的条件包括土壤氮肥水平偏高，钾有利于发病的条件包括土壤氮肥水平偏高，钾肥水平偏低，高温高湿等。肥水平偏低，高温高

32、湿等。：1.产地检验：产地检验：2.种植检验：种子长出的植株有明显的症状。种植检验：种子长出的植株有明显的症状。3.分离培养：采用伊凡诺夫选择培养基，其成分：分离培养：采用伊凡诺夫选择培养基，其成分：甘油甘油30ml 柠檬酸铁铵柠檬酸铁铵10g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾2 . 5g, 氯化氯化钠钠15g 硫酸镁硫酸镁0.1g, 琼脂琼脂17g 氯化钙氯化钙0.1g, 蒸馏水蒸馏水1000ml,PH7.0 还可采用选择性黑色素培养基。还可采用选择性黑色素培养基。 30下培养下培养7d，对光观察，菌落中心呈黑色，边缘，对光观察，菌落中心呈黑色，边缘透明，菌落圆形，表面光滑，呈粘状。透明，菌落圆形，表面

33、光滑，呈粘状。 将分离的细菌接种在玉米苗上，验证是否发病。将分离的细菌接种在玉米苗上，验证是否发病。选择性黑色素培养基选择性黑色素培养基,其成分如下其成分如下:酵母浸膏酵母浸膏 1g 甘油甘油 30ml 制霉菌素制霉菌素 200mg/ml牛胆酸钠牛胆酸钠 3g 氯化钠氯化钠 15g 1%水溶性黑色素水溶性黑色素20ml琼脂琼脂 17g 蒸馏水蒸馏水 1000ml PH6.74.噬菌体检验法：噬菌体检验法： 用专化性噬菌体，如用专化性噬菌体，如ZP6、ZP82等检验。等检验。5 .血清学检验：血清学检验： 用酶联免疫法、琼脂双扩散等检验。用酶联免疫法、琼脂双扩散等检验。1.禁止从国外疫区进口玉米

34、种子禁止从国外疫区进口玉米种子2.种子处理：种子处理：（1）微波炉）微波炉70处理处理10min，效果很好。，效果很好。（2）环氧乙烷熏蒸：）环氧乙烷熏蒸：（3）恒温处理：）恒温处理：50下处理下处理4d，消灭种子内部细菌效果显，消灭种子内部细菌效果显著，不影响发芽。著，不影响发芽。（4）抗菌素温浸法：）抗菌素温浸法：3.防治传播媒介昆虫：防治传播媒介昆虫：4.种植抗病品种：种植抗病品种：三、椰子致死黄化病三、椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing分布分布 在加勒比地区发现椰子致死性黄化病至今已有在加勒比地区发现椰子致死性黄化病至今已有一个多世纪。在牙买加、开曼群岛、

35、古巴、海地、一个多世纪。在牙买加、开曼群岛、古巴、海地、多米尼加共和国、巴哈马群岛和佛罗里达、有几百多米尼加共和国、巴哈马群岛和佛罗里达、有几百万株椰子受此病为害致死。在东非、西非的一些地万株椰子受此病为害致死。在东非、西非的一些地区和美国得克萨斯州，也发现了致死性黄化病。此区和美国得克萨斯州，也发现了致死性黄化病。此病不仅地理分布广，而且蔓延很快。目前，它分布病不仅地理分布广，而且蔓延很快。目前，它分布在拉丁美洲、非洲和西印度群岛，亚洲的印度尼西在拉丁美洲、非洲和西印度群岛，亚洲的印度尼西亚、印度、马来西亚等地。亚、印度、马来西亚等地。寄主范围：寄主范围：除为害椰子除为害椰子 (Cocosn

36、ucifera L.)外，还可为害油棕、外，还可为害油棕、枣椰子、扇棕、马尼拉棕、海棕等枣椰子、扇棕、马尼拉棕、海棕等30多种棕榈科多种棕榈科植物。大部分椰子品种抗病性差，在棕榈科的植物。大部分椰子品种抗病性差，在棕榈科的15个主要类群中，至少有个主要类群中，至少有7个是感病的。感病寄主属个是感病的。感病寄主属包括：桄榔属包括：桄榔属 ，鱼尾属鱼尾属，散尾属散尾属，椰子属椰子属，薄葵薄葵属属，刺葵属刺葵属，棕榈属棕榈属。 症状：各龄椰子树均可感病。症状：各龄椰子树均可感病。早期典型症状早期典型症状:花序干枯。开始时顶部复叶有褐色枯花序干枯。开始时顶部复叶有褐色枯死斑，可深入到裹在里边的羽状叶，

37、再向深处扩展，死斑，可深入到裹在里边的羽状叶，再向深处扩展，最后致死生长点，未成熟的果实脱落。开花的花序轴最后致死生长点，未成熟的果实脱落。开花的花序轴从顶端开始坏死、变黑，佛焰苞未成熟就提前开放，从顶端开始坏死、变黑，佛焰苞未成熟就提前开放，然后凋萎、落花、落果。然后凋萎、落花、落果。以后叶片开始黄化，下层的叶片迅速发展到主株叶以后叶片开始黄化，下层的叶片迅速发展到主株叶片，直至脱落。芽片感染后表现有不规则的褐色水浸片，直至脱落。芽片感染后表现有不规则的褐色水浸状条斑，逐渐发展到芽腐，并有恶臭味。此时新叶很状条斑，逐渐发展到芽腐，并有恶臭味。此时新叶很容易被剥离掉。容易被剥离掉。在叶部呈现黄

38、化症状时，根系出现坏死，不久腐烂，在叶部呈现黄化症状时，根系出现坏死，不久腐烂，根系受害死亡。根系受害死亡。 总之总之,叶片黄化症状是植原体侵入根系后导致生理叶片黄化症状是植原体侵入根系后导致生理学、生物化学变化的结果。一般椰子黄化植原体学、生物化学变化的结果。一般椰子黄化植原体病症状发展过程如下病症状发展过程如下： 大多数感病植株在果实成熟前提前落果大多数感病植株在果实成熟前提前落果 新开的花序黑化新开的花序黑化 从下部叶片到上部叶片逐渐黄化从下部叶片到上部叶片逐渐黄化 针形叶死亡和脱落，可能仅保留少量绿叶针形叶死亡和脱落，可能仅保留少量绿叶 整个树冠脱落，仅留赤裸的呈线杆状枝干整个树冠脱落

39、，仅留赤裸的呈线杆状枝干 病原：椰子致死黄化植原体病原：椰子致死黄化植原体 学名学名Coconut lethal yellowing Phytoplasma英文名英文名 Coconut lethal yellowing 分类地位分类地位 原核生物界，无壁菌门，软球菌原核生物界，无壁菌门，软球菌纲，植原体属（纲，植原体属（MLO）形态特征形态特征 电镜下，典型的植原体颗粒存在于病株的筛管中。电镜下，典型的植原体颗粒存在于病株的筛管中。颗粒是卵形、椭圆形、及丝状，由三层结构组成颗粒是卵形、椭圆形、及丝状，由三层结构组成即：两层电子密集层，中间隔一层透明层。在感即：两层电子密集层，中间隔一层透明层。

40、在感病椰子树韧皮部筛管细胞内可见植原体的存在，病椰子树韧皮部筛管细胞内可见植原体的存在，形状包括丝状、念珠状及近球状，大小为形状包括丝状、念珠状及近球状，大小为400-2000 nm。在新近成熟的韧皮部筛管细胞中常见。在新近成熟的韧皮部筛管细胞中常见有植原体，而在薄壁组织中未见植原体存在。有植原体，而在薄壁组织中未见植原体存在。 传播途径传播途径在自然条件下，椰子致死黄化病的介体为麦蜡蝉在自然条件下，椰子致死黄化病的介体为麦蜡蝉（Mynduscrudus）。叶蝉（）。叶蝉（Gypona sp）也有可）也有可能是潜在介体。叶蝉介体在美洲的地理分布与病能是潜在介体。叶蝉介体在美洲的地理分布与病害植

41、原体的分布相吻合。在非洲西部，叶蝉害植原体的分布相吻合。在非洲西部，叶蝉Myndusadiopodoumeensis被怀疑也是一种传播介被怀疑也是一种传播介体。有报道表明化学防治昆虫介体可明显降低病体。有报道表明化学防治昆虫介体可明显降低病害的传播速度。在国际贸易中带病的植物材料，害的传播速度。在国际贸易中带病的植物材料，包括观赏树种，能传带病菌。包括观赏树种，能传带病菌。 检验与检测检验与检测 1产地检疫产地检疫 根据植物受侵染后的症状鉴定。根据植物受侵染后的症状鉴定。2生物学方法生物学方法 利用介体昆虫麦蜡蝉在可疑的植物利用介体昆虫麦蜡蝉在可疑的植物上取食后，接种到长春花上，诱发长春花产生

42、典型上取食后，接种到长春花上，诱发长春花产生典型症状，但潜伏期较长。症状，但潜伏期较长。3电镜观察电镜观察 用电镜观察植物韧皮部中是否有植原用电镜观察植物韧皮部中是否有植原体存在。体存在。4 核酸杂交和核酸杂交和PCR检测技术检测技术 Harrison等等1992年报年报道用道用5种种DNA探针可用于椰子和其他棕榈科植物上探针可用于椰子和其他棕榈科植物上的椰子致死黄化植原体的检测；的椰子致死黄化植原体的检测；Rohde 等等1993年报年报道应用道应用PCR技术成功的检测椰子致死黄化植原体。技术成功的检测椰子致死黄化植原体。检疫措施检疫措施1、 严禁从疫区进口椰子果和苗木。严禁从疫区进口椰子果

43、和苗木。2、 严格把关，加强检疫。严格把关，加强检疫。3、 科研单位特殊需要进口，应由检疫机关科研单位特殊需要进口，应由检疫机关审批隔离试种一年以上，证明种苗是健康的，审批隔离试种一年以上，证明种苗是健康的，方能进口。方能进口。防治方法防治方法1、 种植抗病品种。种植抗病品种。2、 防治昆虫介体。防治昆虫介体。3、 注射抗生素：可注射四环素注射抗生素：可注射四环素(500ppm)，每株最，每株最大剂量为大剂量为8克，加水克，加水1000毫升。每株病树进行保护性毫升。每株病树进行保护性注射抗生素注射抗生素13克可降低病害蔓延速度克可降低病害蔓延速度35倍。也倍。也有报道用土霉素盐酸注射液对病株的

44、树干进行注射有报道用土霉素盐酸注射液对病株的树干进行注射处理，能抑制症状，处理过的植株又能重新健康生长，处理，能抑制症状，处理过的植株又能重新健康生长，每每4个月处理个月处理1次能保持植株不表现症状。次能保持植株不表现症状。4、卫生措施：及早清除病枝、病枝，重病树应砍伐、卫生措施：及早清除病枝、病枝，重病树应砍伐烧毁烧毁 分布：分布：1939年在中国广东发现该病，现已扩展到亚年在中国广东发现该病，现已扩展到亚洲和非洲洲和非洲37个国家和地区，中国主要发生在广东、个国家和地区，中国主要发生在广东、广西、福建、台湾、海南、云南、贵州、四川、浙广西、福建、台湾、海南、云南、贵州、四川、浙江、湖南、江

45、西等省。江、湖南、江西等省。 寄主：主要是柑橘属、金柑属和枳属。草本植物有寄主：主要是柑橘属、金柑属和枳属。草本植物有长春花长春花 。 危害：是柑橘的毁灭性病害，感病的柑桔品种得病危害：是柑橘的毁灭性病害，感病的柑桔品种得病后可在后可在35年内丧失结果能力，甚至枯死。年内丧失结果能力，甚至枯死。四、柑橘黄龙病四、柑橘黄龙病 Citrus Yellow shootCitrus Yellow shoot 症状：症状： 典型症状：在浓绿的树冠中出现典型症状：在浓绿的树冠中出现12条或多条或多条的发黄枝梢，有两种类型：一种是整张叶片条的发黄枝梢，有两种类型：一种是整张叶片均匀黄化均匀黄化 ，另一种是叶片呈黄绿相间的斑驳，另一种是叶片呈黄绿相间的斑驳状状 。 共同特点：叶质硬化、无光泽，但在黄梢下共同特点：叶质硬化、无光泽，但在黄梢下部的老叶仍呈正常绿色。病果小，果皮光滑，部的老叶仍呈正常绿色。病果小，果皮光滑，畸形，无光泽，味酸，果皮着色时黄绿不均匀畸形，无光泽，味酸，果皮着色时黄绿不均匀或在果蒂附近变橙红色，而其余部份仍为青绿或在果蒂附近变橙红色，而其余部份仍为青绿色的青果色的青果 病原病原Liberob