维生素C定量测定

1、紫外分光光度计法测定果蔬中紫外分光光度计法测定果蔬中Vc的含量的含量安徽师范大学生科院生化教研室本实验要求：本实验要求：1.本实验为设计性实验，每人须撰写好实验设计，实验设计包含“前言、实验、结果与讨论、结论”四部分，其中前言和实验需要在上实验课前写好，其余两部分在实验结束时撰写，然后上交。2.实验时，每个小组做一种果蔬的Vc含量测定3.实验结束，每个小组提供一种果蔬的Vc含量数值供所有小组使用4.数据统计时，绘制表格或柱状图等请带直尺和铅笔5.参考资料： 马宏飞， 卢生有，韩秋菊， 李薇. “紫外分光光度法测定五种果蔬中维生素 的含量”. 化学与生物工程，2012,29（8）：92-94.6

2、.本实验成绩为生化实验考试成绩。1. 学习定量测量维生素C的原理和方法2. 学习设计实验 3.了解水果、蔬菜中维生素C的含量。一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理l维生素维生素C C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏它时会产生坏血病，因此又称其为是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏它时会产生坏血病，因此又称其为抗坏血酸。抗坏血酸。l它可分为还原型和脱氢型。还原型维生素它可分为还原型和脱氢型。还原型维生素C C具有很强的性。金属铜和酶（抗坏血酸氧具有很强的性。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素化酶）可以催化维生素C C氧化为脱氢型。根据它具有的还原性质可测定其含量。氧化为脱

3、氢型。根据它具有的还原性质可测定其含量。l维生素维生素C C的测定方法主要有紫外分光光度法、的测定方法主要有紫外分光光度法、 红外光谱法、红外光谱法、2,62,6二氯靛酚滴定法、二氯靛酚滴定法、 高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度细管电泳法、流动注射化学发光法等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；法仪器相对昂贵； 碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、碘量法和电位滴定法

4、操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；样品色素颜色和测定时间的影响； 紫外分光光度法是根据维生素紫外分光光度法是根据维生素C C对紫外产生吸收和对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，对碱不稳定的特性， 于于243243 处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差， 通通过标准曲线方程，过标准曲线方程， 即可计算样品中维生素即可计算样品中维生素C C的含量。的含量。 紫外分光光度计 坐标纸 移液器 离心机 研钵三、实验器材三、实验器材市售果蔬 10-20g四、实验材料四、实验材料1. 10% HCl:10mL浓盐酸溶解成100mL

5、溶液。2. 100ug/mL标准Vc溶液：准确称取0.05g抗坏血酸，加10L 10HCl溶解，用蒸馏水定容至00 mL，混匀，即得 100ug/mL维生素标准溶液。3. 1mol/L NaOH:40g NaOH溶解成1000mL溶液。五、实验试剂五、实验试剂1.制作标准曲线（有一组同学提前完成，其他小组不需要做）按照下表操作，以A243为纵坐标，以Vc浓度为横坐标制作标曲。六、实验步骤六、实验步骤012345678100g/mLVc标准溶液mL00.03 0.06 0.09 0.12 0.15 0.18 0.24 0.30蒸馏水mL32.97 2.94 2.91 2.88 2.85 2.82

6、 2.76 2.70Vc浓度g/mL0123456810A243 （1）果蔬样品的处理）果蔬样品的处理 将蔬菜洗净晾干，水果取果肉，分别称取 10.00于研钵中，各加入0 HCl 10mL，研磨匀浆， 转移到50mL容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻度，混匀。移至离心管中3000转/分钟 离心 10min ， 取上清液即为待测果蔬提取液。2. 样品测定（2）待测果蔬提取液吸光度的测量）待测果蔬提取液吸光度的测量 取0.1mL待测果蔬提取液， 放入盛有0.2mL10% HCl试管中， 再加蒸馏水4.7mL，摇匀。以蒸馏水为空白， 在243nm处测定其吸光度（A1）。 （3）碱处理果蔬提取液吸光度的测量

7、）碱处理果蔬提取液吸光度的测量 依次吸取0.1mL 待测果蔬提取液、1.0mL 蒸馏水和 0.4mL 1mol/L NaOH放入试管中。 摇匀； 静置20min后加入0.4mL 0 HCl ， 混匀， 再加入3.1mL蒸馏水。以蒸馏水为空白， 在243nm处测定其吸光度（A2）。 （4）吸光度确定）吸光度确定 待测果蔬提取液与碱处理果蔬提取液的吸光度之差（A1-A2）即为果蔬样品吸光度。3.计算计算 测得果蔬样品的吸光度后，依据标准曲线方程，即可计算出果蔬中维生素的含量mg/（100g） 式中： 为依标准曲线查到的Vc浓度, ug/mL ； 为测吸光度时吸取样品溶液的体积， mL ； 总为吸取

8、样品定容总体积，mL； 待测总 为待测样品总体积， mL ； 总 为果蔬质量，； 100为100果蔬。维生素 含量 总 待测总 100 总 1000七、分析与讨论七、分析与讨论012345678100g/mLVc标准溶液mL00.03 0.06 0.09 0.120.15 0.18 0.24 0.30蒸馏水mL32.97 2.94 2.91 2.882.85 2.82 2.76 2.70Vc浓度g/mL0123456810A24300.0480.1050.1590.2130.2700.3210.4440.540线性回归方程: A= 0.054825581c-0.004244186相关系数：R2 = 0.999703455CORREL:array1 和和 array2 之间的相关系数之间的相关系数 INTERCEPT:利用现有的利用现有的 x 值与值与 y 值计算直线与值计算直线与 y 轴的截距。轴的截距。 LINEST:使用最小二乘法对已知数