实验一、网织红细胞计数血沉测定 第二组

1、实验三实验三 网织红细胞计数、血网织红细胞计数、血沉测定及白细胞计数沉测定及白细胞计数组员：王芳军,刘巧艳，赵素云，胡博*一、网织红细胞计数*目的目的 掌握网织红细胞（Ret)试管法计数的原理及操作方法。*原理原理 网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核糖核酸等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体活体染色后，呈蓝色网状或点状结构蓝色网状或点状结构，可与成熟红细胞相区别。*器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦镜纸、擦镜液*试剂 新亚甲蓝*标本 新鲜全血*操作步骤*1.加染液加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标记。*2.2.加血加血 在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴，

2、立即混匀。*3.3.染色染色 室温下染色10-15min。*4.4.涂片制备涂片制备 取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥*5.5.观察观察 低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好、背景清晰的部位进行计数。*6.6.计数计数 常规法：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞。*7.7.计算计算 Ret百分数=（1000个RBC中的Ret数/1000）100%*8.8.结果报告结果报告 网织红细胞百分数：X.X%*血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾 涂片干燥后用铅笔铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B 1 2

3、3*参考区间成人、儿童：成人、儿童：0.5%-1.5%新新 生生 儿：儿：2.0%-6.0%*注意事项*1.1.试剂准备试剂准备 推荐使用新亚甲蓝染液，试剂应定期配制，用前过滤。*2.2.染色染色 染液与血液比以1:1为宜,染色时间不能过短。试剂用后及时盖好盖子，以免挥发。*3.3.标本标本 应及时染色，及时测定。*4.4.计数计数 选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色好的、背景清晰的部位计数。应兼顾血片边缘和尾部。5.观察 选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色好的部位计数，凡含有两个以上网织颗粒的细胞均应计为网织红细胞。由于网织红细胞体积较大，故应兼顾血片边缘和尾部。应注意网织红细胞与HbH包涵

4、体的鉴别，前者为蓝绿色网织状或点粒状结构，分布不均，后者为蓝绿色圆形小体，均匀散在于整个红细胞内，一般在温育10-60分钟后出现。6.结果评价 （1）95%可信限法：网织红细胞的95%可信区间是R2sxp.Sxp为标准误，R为网织红细胞百分数，N为所数红细胞数。正常网织红细胞在整个红细胞中所占比例很低，但其绝对值却是很高的。通过计算确定网织红细胞计数的95%可信区间为0.028-0.052。对标本再计数一次，若结果落入此范围内，说明两次计数无显著性差异，若否，则应进行第三次计数。（2）比值法 R1，R2分别为两次计数结果，N为网织红细胞数。R2时结果可靠目的 掌握魏氏法测定血沉的原理及方法。原

5、理 将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，由于红细胞比重大于血浆，克服血浆阻力而下沉，1h后读取上层血浆高度的毫米数，即为红细胞沉降率。器材 魏氏管、血沉架、洗耳球。（血沉管）试剂 109mmol/L枸橼酸钠溶液。标本 外周血。二、血液沉降率测定（魏氏法）二、血液沉降率测定（魏氏法）1.1.采血采血 采静脉血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度线处） ，混匀。2.2.吸血吸血 混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残余血。3.3.立血沉管立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。4.4.读数读数 1h末准确读取

6、红细胞下沉后露出的血浆高度。5.5.报告方式报告方式 XX mm/h操作步骤操作步骤参考值参考值 50岁：男性岁：男性 15mm/h15mm/h 女性女性 20mm/h20mm/h 50岁：男性岁：男性 20mm/h20mm/h 女性女性 30mm/h30mm/h 85岁：男性岁：男性 30mm/h0mm/h 女性女性 42mm/h42mm/h 儿童儿童: 10mm/hmm/h二、血液沉降率测定（魏氏法）二、血液沉降率测定（魏氏法）注意事项注意事项* 1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液比例为1：4。* 2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。 * 3.测量时，血沉架应避免直接光照、移动和振动。* 4.本实验最适宜温度为1825，