异构体方法学研究

1、* *手性的概念：一种手性的概念：一种镜像反射镜像反射的对称性的对称性Mirror ImageMirror Image*OHCOOHHCH3OHCOOHHCH3* 两种单一对映体两种单一对映体 *手性药物的现状临床药物临床药物1850种种天然和半天然和半合成药物合成药物523种种化学合成化学合成药物药物1327种种非手性非手性6种种手性手性517种种非手性非手性799种种手性手性528种种以单个对映体以单个对映体给药给药509种种以外消旋体以外消旋体给药给药8种种以单个对映体以单个对映体给药给药61种种以外消旋体以外消旋体给药给药467种种*常用手性高效液相色谱法常用手性高效液相色谱法 手性固

2、定相法手性固定相法-手性色谱柱手性色谱柱 手性流动相添加法手性流动相添加法-手性试剂手性试剂-左氧氟沙星左氧氟沙星 手性衍生化试剂法手性衍生化试剂法*对映体除了偏振光的偏转方向不同外，其它理化性质完全相同，因而分离难度大。 手性色谱拆分方法：创造（或引入）手性环境，构造非对映异构体非对映异构体，使药物对映体间呈现理化特性的差异，从而实现药物对映体的色谱分离。*含多个手性碳原子化合物，分子中所含手性碳含多个手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，对映异构体的数目越多。越多，对映异构体的数目越多。B(R)A(S)A(R)B(S)A(R)B(R)A(S)B(S)对映体对映体非对映异构体非对映异构体*

3、 手性高效液相色谱法手性高效液相色谱法（Chiral HPLC) 手性衍生化试剂法（手性衍生化试剂法（CDR）（分析物）（分析物） 手性固定相法（手性固定相法（CSP） （固定相）（固定相） 手性流动相添加法（手性流动相添加法（CMP）（流动相）（流动相）*手性固定相法（手性固定相法（CSP） 原理：将手性试剂化学键合到原理：将手性试剂化学键合到固定相固定相上与药物上与药物对映体反应形成对映体反应形成暂时暂时的非对映体对复合物，这的非对映体对复合物，这种固定相称作种固定相称作CSP。 在在CSP表面所形成的非对映体对，可根据其稳表面所形成的非对映体对，可根据其稳定常数不同而获得分离。（三点结合

4、模型）定常数不同而获得分离。（三点结合模型） *手性固定相手性固定相吸附型吸附型电荷转移型电荷转移型蛋白质类蛋白质类环糊精类环糊精类多糖衍生物多糖衍生物 * 纤维素的单体D-葡萄糖以-1,4-糖苷键相连而成的线型聚合物，将羟基衍生化 成酯以增强手性识别能力。 由于水和卤代烃都能溶解纤维素及其衍生物，故流动相大都为使用极性较小的非卤代烃有机溶剂。 多糖及其衍生物类手性固定相多糖及其衍生物类手性固定相O*OOHOHO*OHO*OHOHO*OHO*OHOHO*OHO*OHOHO*OH*最常用的多糖型手性色谱柱 （Daicel ，大赛璐 ） 淀粉柱：Chiralpak AD、Chiralpak AS、

5、 纤维素柱：Chiralcel OD、Chiralcel OJOROOROORnsilica-gel*手性柱通用性差正相、反相不同手性柱使用注意事项不一致，应用时一定要找负责人或者供货商要说明书 手性柱使用说明*方法学验证内容： 准确度（回收率） 精密度 重复性 中间精密度 专属性 定量限和检测限 线性 范围 耐用性 *制剂-异构体研究* 制剂生产工艺中或者辅料长期作用下产生异构体 因此制剂也要求对异构体进行研究 0月、影响因素30天、加速6月、长期12月、长期24月 * 1.以异构体限度浓度（常0.1%）为100%，与原料混合制备成混合溶液。原料浓度为供试溶液浓度不变。 制备几个点： 定量限

6、浓度、10%（20%)、50%、100%、150% 每个点3份，自身对照法计算 2.要求：平均回收率80%-120%，RSD10%异构体-原料-准确度* 一.重复性 制备6份100%（异构体限度浓度）回收率溶液，进样。 要求：RSD15%，建议10% 如果样品本身含0.05%-0.1%异构体，也可以不加对照品，直接制备6份供试溶液测试。 异构体-原料-精密度* 二.中间精密度 方法同重复性，换人、仪器、时间。 要求：12份溶液RSD 20% 异构体-原料-精密度* 二.中间精密度 方法同重复性，换人、仪器、时间。 要求：12份溶液RSD 20% 异构体-原料-精密度*1.溶剂干扰2.各异构体、

7、主峰的分离度3.未知杂质干扰4.强制降解试验* 高温、光照（可共用影响因素高温、光照试验数据）异构体-原料-专属性* 二.中间精密度 方法同重复性，换人、仪器、时间。 要求：12份溶液RSD 20% 异构体-原料-精密度* 异构体-原料-检测限/定量限？ 水-测PH分析不同观点* 1.定量限 目前的做法： 制备S/N=10倍的供试品溶液，进6针，RSD10% 建议：样品制备方法描述照黄晓龙走，以便应付某些客户。 2.检测限 制备S/N=3倍的供试品溶液，进3针， 异构体-原料-检测限/定量限* 二.中间精密度 方法同重复性，换人、仪器、时间。 要求：12份溶液RSD 20% 异构体-原料-精密度* 1.线性溶液制备： 定量限、10%（20%）、50%、80%、100%（限度浓度）、120%、150% 2. 要求：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100响应值的25以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。 异构体-原料-线性（范围）*1.柱温改变