免疫细胞的分离及其表面标志检测技术

1、关于免疫细胞的分离及其表面标志检测技术现在学习的是第一页，共40页第一节 免疫细胞的分离 一、 外周血单个核细胞分离 二、 淋巴细胞的分离 三、 T细胞和B细胞的分离 四、 T细胞亚群的分离现在学习的是第二页，共40页第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 一、一、 细胞表面标志及亚群细胞表面标志及亚群 二、二、 B B细胞表面标志细胞表面标志 三、三、 NKNK细胞表面标志细胞表面标志第三节第三节 其他的免疫细胞其他的免疫细胞第四节第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用免疫细胞表面标志的检测及应用 一、一、免疫细胞表面标志的检测方法免疫细胞表面标志的检测方法 二、二、 淋巴

2、细胞表面标志检测的临床意义淋巴细胞表面标志检测的临床意义思考题小结 现在学习的是第三页，共40页现在学习的是第四页，共40页第一节第一节 免疫细胞的分离免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离淋巴细胞的分离 T T细胞和细胞和B B细胞的分离细胞的分离 T T细胞亚群的分离细胞亚群的分离现在学习的是第五页，共40页一、外周血单个核细胞分离一、外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞外周血单个核细胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。）。 Ficoll分离液法主要用于分离

3、外周血中的单个核细胞，分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。是一种单次差速密度梯度离心的分离法。 现在学习的是第六页，共40页细胞分离基本原理细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞表面分化抗原不同现在学习的是第七页，共40页不同细胞密度不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.075-1.090 现在学习的是第八页，共40页不同细胞密度不同现在学习的是第九页，共40页用1.0770.001

4、的分层液可将细胞分离 现在学习的是第十页，共40页密度梯度离心(Ficoll)离心现在学习的是第十一页，共40页二二、淋巴细胞分离、淋巴细胞分离贴壁粘附法贴壁粘附法 吸附柱过滤法吸附柱过滤法 磁铁吸引法磁铁吸引法 Percoll Percoll 分离液法分离液法 （连续密度梯度离心）（连续密度梯度离心）（去单核细胞）现在学习的是第十二页，共40页E E花环沉降法花环沉降法 尼龙毛柱分离法尼龙毛柱分离法 三、三、T T细胞和细胞和B B细胞的分离细胞的分离现在学习的是第十三页，共40页四、四、T T细胞亚群的分离细胞亚群的分离 亲和板结合分离法亲和板结合分离法 磁性微球分离法磁性微球分离法 荧光

5、激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法 现在学习的是第十四页，共40页荧光激活细胞分离仪分离法 现在学习的是第十五页，共40页现在学习的是第十六页，共40页磁珠大小可以选择现在学习的是第十七页，共40页大小免疫磁珠分离细胞的特点比较 比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。 收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。

6、分离成本成本低。需要很强的磁场来分离细胞，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行。现在学习的是第十八页，共40页现在学习的是第十九页，共40页现在学习的是第二十页，共40页免疫磁珠法细胞分选过程现在学习的是第二十一页，共40页免疫磁珠细胞分选装置现在学习的是第二十二页，共40页全自动细胞分选系统现在学习的是第二十三页，共40页流式细胞分析仪现在学习的是第二十四页，共40页第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiation

7、differentiation，CDCD）。）。 现在学习的是第二十五页，共40页细胞表面分化抗原（细胞表面分化抗原（CDCD抗原抗原）适用于T、B细胞的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）现在学习的是第二十六页，共40页一、一、T T细胞表面标志及其亚群细胞表面标志及其亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性辅助性T细胞细胞（helpTcell,Th） CD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞毒性T细胞细胞（cytotoxicTcell,TcorCTL） CD4+CD25+调节性调节性T细胞细胞（regulatoryTcell,TrorTreg）现在学习的是第二十七页

8、，共40页二、二、B B细胞表面标志细胞表面标志 SmIgSmIg、FcFc受体、补体受体、受体、补体受体、EBEB病毒受体，部分病毒受体，部分CDCD分子是分子是B B细胞的重要表面标志，其中以细胞的重要表面标志，其中以SmIgSmIg为为B B细胞细胞所特有，是鉴定所特有，是鉴定B B细胞可靠的指标。细胞可靠的指标。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可将分子：可将B B细胞区分为细胞区分为B1B1细胞和细胞和B2B2细胞，细胞，B1B1细胞为细胞为CD19CD19和和CD5CD5双阳性，而双阳性，而B2B2细胞仅为细胞仅为CD19CD19阳性，阳性，B2B2细胞为通常所指的细胞为通常

9、所指的B B细胞细胞。 现在学习的是第二十八页，共40页三、三、NKNK细胞表面标志细胞表面标志 人类人类NK细胞表面标志主要以细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为淋巴细胞认定为NK细胞。细胞。现在学习的是第二十九页，共40页T细胞及NK细胞现在学习的是第三十页，共40页第三节第三节 其他的免疫细胞其他的免疫细胞抗原提呈类细胞表面标志抗原提呈类细胞表面标志现在学习的是第三十一页，共40页第四节第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用免疫细胞表面标志的检测及应用 免疫细胞表面标志的检测方法免疫细胞表面标志的检测方法淋巴细胞表面

10、标志检测的临床意义淋巴细胞表面标志检测的临床意义现在学习的是第三十二页，共40页一、免疫细胞表面标志的检测一、免疫细胞表面标志的检测抗体致敏细胞花环法抗体致敏细胞花环法 免疫细胞化学法免疫细胞化学法 免疫荧光法免疫荧光法 流式细胞分析法流式细胞分析法 现在学习的是第三十三页，共40页二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义 淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标。重要指标。 对对CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T细胞的测定，有助于免疫缺细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应陷疾病、自身免疫性疾病和

11、移植排斥反应的监测。的监测。 现在学习的是第三十四页，共40页临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化 现在学习的是第三十五页，共40页思考题思考题1.1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离纯化？免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离纯化？2.2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加以区淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加以区别吗？别吗？3.3.将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？4.4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？5.T5.T细胞和细胞和B B细胞进一步区分亚群的依据是什么？细胞进一步区分亚群的

12、依据是什么？现在学习的是第三十六页，共40页6.6.什么是细胞表面标志？其作用是什么？什么是细胞表面标志？其作用是什么？7.7.细胞表面标志的检测方法有哪些？细胞表面标志的检测方法有哪些？8.8.利用细胞表面标志（利用细胞表面标志（CDCD抗原）分离细胞的方法有哪几抗原）分离细胞的方法有哪几种？种？9.T9.T细胞、细胞、B B细胞、细胞、NKNK细胞、单核细胞的主要生物标细胞、单核细胞的主要生物标志是什么？志是什么？10.10.淋巴细胞表面标志检测的临床意义是什么？淋巴细胞表面标志检测的临床意义是什么？现在学习的是第三十七页，共40页小小 结结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面标志是的表面标志是CDCD抗原。抗原。现在学习的是第三十八页，共40页进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向