Hela细胞的传代培养课件

1、Hela细胞的传代培养HeLaHeLa细胞细胞(xbo)(xbo)的传代培养的传代培养第一页，共十八页。Hela细胞的传代培养1.理解(lji)细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作 第二页，共十八页。Hela细胞的传代培养概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。 HeLa细胞是一种贴壁生长(shngzhng)的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。 第三页，共十八页。Hela细胞的传代培养第四页，共十八页。Hela细胞的传代培养 1 1、材料材料(cilio)(cilio)： HeLa

2、 HeLa细胞细胞 2 2、试剂：、试剂： 0.250.25胰胰蛋白蛋白酶、酶、16401640培养基（含培养基（含1010 小牛血清）小牛血清）、PBSPBS 第五页，共十八页。Hela细胞的传代培养超净工作台CO2培养箱倒置(dozh)显微镜3.3.仪器设备仪器设备第六页，共十八页。Hela细胞的传代培养离心机恒温(hngwn)水浴锅3.3.仪器设备仪器设备第七页，共十八页。Hela细胞的传代培养 培养(piyng)瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.3.仪器设备仪器设备第八页，共十八页。Hela细胞的传代培养 （1）细胞培养用的器材和试剂(shj)灭菌； （2）超净工作台

3、准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）； （3） 试剂预热（37水浴锅）； （4）操作人员准备 （75%酒精擦拭双手等）。4.4.实验前准备实验前准备(zhnbi)(zhnbi)工作工作细胞生存环境：无菌、无毒细胞生存环境：无菌、无毒第九页，共十八页。Hela细胞的传代培养 1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去(ch q)悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液第十页，共十八页。Hela细胞的传代培养 2、胰蛋白酶(y dn bi mi)消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。 加消化液第十一页，共十八页。H

4、ela细胞的传代培养 3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热(y r)后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。 消化(xiohu)前细胞 消化后细胞（适度状态）吸除消化液第十二页，共十八页。Hela细胞的传代培养 4、用吸管将贴壁的细胞(xbo)吹打成悬液。吹打吹打(chud)成细胞悬成细胞悬液液第十三页，共十八页。Hela细胞的传代培养分装(fn zhun) 5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37 CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需

5、将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况(qngkung)进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。第十四页，共十八页。Hela细胞的传代培养1.用电安全 2.操作仪器安全 3.及时规范(gufn)记录 第十五页，共十八页。Hela细胞的传代培养 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种( zhn)实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 第十六页，共十八页。Hela细胞的传代培养第十七页，共十八页。Hela细胞的传代培养内容(nirng)总结HeLa细胞(xbo)的传代培养。概念：指细胞(xbo)从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞(xbo)是一种贴壁生长的细胞(xbo)，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞(xbo)分散成单细胞(xbo)再传代。0.25胰蛋白酶、1640培养