第六章 维生素的测定

1、第六章 维生素的测定右江民族医学院掌握学习目标生物监测指标；测定方法原理主要步骤和注意事项生物监测意义熟悉理化性质；代谢途径了解食物来源、缺乏及过量症状概述脂溶性（脂溶性（A、D、E、K）水溶性两类（水溶性两类（B族、族、C）维生素分类维生素分类： 维生素（维生素（vitaminvitamin）：是生物体维持正常生命活动必：是生物体维持正常生命活动必须且无法通过自身合成足够量，需要通过膳食摄取的一须且无法通过自身合成足够量，需要通过膳食摄取的一类有机化合物的统称。类有机化合物的统称。第一节 维生素A和-胡萝卜素一、理化性质 维生素A，脂溶性、主要有维生素A1（视黄醇，retinol）和维生素A

2、3（3-脱氢视黄醇，retinol）两种形式。体内的主要活性形式是视黄醇。在空气中易氧化，加热和光照加速氧化，对酸不稳定。不溶于水，有荧光性，其无水乙醇、环己烷等在自我照射下发出绿色荧光。第一节 维生素A和-胡萝卜素一、理化性质 -胡萝卜素，植物天然色素，是视黄醇的二聚物和最具活性的维生素A前体。对热、酸碱稳定、易在紫外线和空气总氧化失活。二、代谢和生物监测指标维生素A来源膳食来源：肝脏、肉制品、乳制品、鱼肝油等维生素A与人健康的关系缺乏：过量：夜盲症、干眼症、角膜软化症肝损伤、骨异常、脱皮、脱发、复视、呕吐及头痛、胎儿畸形二、代谢和生物监测指标我国血清视黄醇浓度世界粮农组织（FAO）正常参考

3、值：儿童300g/L成人400g/L视黄醇含量、血浆视黄醇浓度、相对剂量反应血清-胡萝卜素 800g/L静脉血：时间-70，避光保存血清三、样品的采集和保存原理： 血清经无水乙醇沉淀蛋白后，正己烷萃取视黄醇及-胡萝卜素，C18柱色谱分离，紫外检测器监测，保留时间定性，内标法标准曲线法定量。四、血清中维生素A及-胡萝卜素的测定样品处理： 100L血清中加入100L内标乙醇溶液，混匀后加入1mL正己烷存取，取上清，挥干，无水乙醇复溶测定。四、血清中维生素A及-胡萝卜素的测定仪器参考条件：色谱柱：C18色谱柱（150mm*4.6mm,5m）流动相 甲醇：水=98:2（临用前脱气）流速：1.0mL/m

4、inUV 波长 ：视黄醇325nm,-胡萝卜素450nm注意事项：四、血清中维生素A及-胡萝卜素的测定（1）内标物：维生素A乙酸酯（2）标准溶液领用标定（3）无水乙醇作为蛋白质变性剂（4）缩短保留时间可用该报表了有机溶剂洗脱（5）前处理可用分散液相微萃取第二节 维生素D、E、K一、理化性质 维生素E，有生育酚及生育三烯酚两类，有四种异构体。其中-生育酚（-tocopherol）活性最强。在无氧条件下对热稳定，对碱了、紫外线、铁盐等均不稳定。极易被氧化，可保护其他物质不被氧化。二、代谢和生物监测指标维生素E来源膳食摄入：植物油、绿叶蔬菜吸收：分布：小肠尿液体内合成：少排泄：肝脏储存和代谢抗衰老、

5、抗肿瘤、保护肝脏、促进受损细胞修复等生理功能：二、代谢和生物监测指标生物监测指标血清或全血维生素E静脉血：时间-70，避光保存血清三、样品的采集和保存四、高效液相色谱法测定全血中的维生素En方法方法 荧光光度法荧光光度法紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法HPLCHPLCGCGC检出限：0.08g/mL 经肝素抗凝的全血样品，乙醇沉淀蛋白后正己烷萃取维生素E，高效液相色谱分离，紫外检测器检验。保留时间定性，外表标准曲线法定量。四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E原理：样品处理： 50L全血样品中加入200L无水乙醇，混匀后加入1mL正己烷涡旋混匀，离心取正己烷层800L，挥干，甲醇复溶

6、测定。仪器参考条件：色谱柱：C8（150mm*4.6mm,5m）柱温：50流动相 甲醇：水=98:2 流速：1.0mL/minUV 波长 ：292nm,四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E注意事项：（1）正己烷易挥发，环境温度高是冰浴萃取。（2）可用C18柱更换，流动相可采用甲醇-乙醇=20：80（4）标准液可用-生育酚配制，临用标定（5）可同时检测维生素A四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E第三节 维生素B一、理化性质 维生素B1，又称硫胺素（thiamine），抗神经炎维生素、抗脚气病维生素。白色结晶，溶于水，在酸性溶液中稳定，在pH5的溶液中不稳定。光和热可促其氧化，易被氧化为脱氢硫

7、胺素，即硫色素。应避光、低温保存，不宜久贮。二、代谢和生物监测指标维生素B1来源膳食摄入：粮谷、豆类、干果、绿叶菜、动物内脏及蛋类代谢：中枢神经系统肝代谢生成磷酸酯衍生物游离硫胺素、单磷酸硫胺素吸收：小肠红细胞、血浆焦磷酸硫胺素三磷酸硫胺素硫胺素评价指标：常以血液中三种形式含量之和作为指标排泄：超出储存阈值的硫胺素检疫原形或结合形式经尿排出体外，可通过负荷试验反映营养状况。血样：静脉血，肝素抗凝，-70保存。收集口服维生素片后四小时内排出的全部尿液，加草酸调节pH3，4避光保存。长期-20保存。三、样品的采集和保存尿样：四、硫胺素的检测n方法方法 荧光光度法荧光光度法HPLCHPLC 尿液经酸水解和酶解后，尿中有利硫胺素被碱性铁氰化钾氧化为具有荧光的硫色素，有利溶剂萃取后测定其荧光，标准曲线法定量。荧光光度法测定尿中的硫胺素原理：样品处理： 尿样25mL,盐酸酸化（pH3）,120酸解30min。仪器参考条件：激发波长 ：365nm；发射波长：435nm乙酸钠调节pH4.5,加入蛋白酶4550恒温过夜。水定容混匀过滤。取5mL滤液加0.7mg/mL碱性铁氰化钾3mL,震荡混匀，再加入