实验七染色体显带技术

1、1 1染色体显带技术 实验目的 实验原理 实验步骤 作业 返回大纲2 2实验目的 n了解几种常用的染色体显带方法，通过实验初步掌握带和带的染色技术。 3 3染色体显带技术原理染色体显带技术原理n染色体显带技术使用特殊的染色方法，使染色体显带技术使用特殊的染色方法，使染色体产生明显的染色的暗带与未染色的染色体产生明显的染色的暗带与未染色的明带相间的带型，即显现出染色体本身的明带相间的带型，即显现出染色体本身的更细微的结构，形成更鲜明的染色体个体更细微的结构，形成更鲜明的染色体个体性，从而可以更准确地鉴别每条染色体。性，从而可以更准确地鉴别每条染色体。带的出现不是随机的，而是染色体结构的带的出现不

2、是随机的，而是染色体结构的真实反映。随着显带方法不同，所显带的真实反映。随着显带方法不同，所显带的特点不一样，说明带的出现还与染料的特特点不一样，说明带的出现还与染料的特异结合有关。异结合有关。n显带技术为染色体结构与功能的分析研究显带技术为染色体结构与功能的分析研究提供依据。提供依据。4 4成淋巴细胞白血病成淋巴细胞白血病Philadelphia白血病白血病5 5n目前常用的几种显带方法有：目前常用的几种显带方法有：n荧光显带法（荧光显带法（Q带）：用荧光染料喹吖因处理后，在荧带）：用荧光染料喹吖因处理后，在荧光显微镜下显现的带型。光显微镜下显现的带型。n吉姆萨显带法（吉姆萨显带法（C）：经

3、热、碱、胰酶等处理后，进行）：经热、碱、胰酶等处理后，进行吉姆萨染色所显的带型。染异染色质。吉姆萨染色所显的带型。染异染色质。n反带法（反带法（R带）：应用本法显示的带与带及带相反，即带）：应用本法显示的带与带及带相反，即G带的暗区在带的暗区在R带中为明区。带中为明区。n末端显带法（末端显带法（T带）：对染色体末端区的特殊显带法，带）：对染色体末端区的特殊显带法，对分析染色体易位有一定价值。对分析染色体易位有一定价值。nG带法：先用酸和碱作变性处理，再用吉姆萨染色，专带法：先用酸和碱作变性处理，再用吉姆萨染色，专门显示着丝点区附近的结构异染色质。门显示着丝点区附近的结构异染色质。n银染色法（银

4、染色法（Ag带）：用硝酸银染色，专门显示染色体带）：用硝酸银染色，专门显示染色体上具有转录活性的核仁组织区域。上具有转录活性的核仁组织区域。1.此外，还有此外，还有N带、高分辨带、复制带等等，并还在不断带、高分辨带、复制带等等，并还在不断产生新的显带方法。产生新的显带方法。 6 6染色体染色体C带技术原理带技术原理n本实验学习本实验学习BSG（氢氧化钡（氢氧化钡/盐盐/吉姆萨）吉姆萨）-显带方显带方法，法，BSG-显带是显示染色体的结构异染色质，即显带是显示染色体的结构异染色质，即着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。n经经BSG程序处理后，染色体的臂区丧失大量染色程

5、序处理后，染色体的臂区丧失大量染色质（包括常染色质和异染色质），而着丝点、部质（包括常染色质和异染色质），而着丝点、部分次缢痕和异染色质区因含有大量的重复分次缢痕和异染色质区因含有大量的重复DNA顺顺序及与之相结合的蛋白质却保留下来，经由序及与之相结合的蛋白质却保留下来，经由Giemsa染色形成深染的染色形成深染的C带。带。n本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多态性研究，鉴别染色体上不同的染色质类型；也态性研究，鉴别染色体上不同的染色质类型；也可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常细胞双着丝点染色体乃

6、至多着丝点染色体之来源细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源等。等。7 7步骤：步骤：染色体标本置染色体标本置0.2Cl中浸泡中浸泡1小时小时蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗2次，在室温晾至半干次，在室温晾至半干将标本插入装有预热至将标本插入装有预热至50的的Ba(OH2)5%饱饱和溶液的染色缸和溶液的染色缸,保温保温10分钟分钟取出染色体标本，立即用自来水冲去取出染色体标本，立即用自来水冲去Ba(OH2)溶液溶液趁标本仍潮湿时置入预热至趁标本仍潮湿时置入预热至60的的2xSSC中中性盐溶液中，保温性盐溶液中，保温1小时小时蒸馏水洗去盐溶液蒸馏水洗去盐溶液Giemsa染色染色10min以上，水洗，空气

7、干燥，以上，水洗，空气干燥，镜检镜检8 8注意事项：5% Ba(OH2)配制后放至配制后放至4保存，用时吸取上清液保存，用时吸取上清液2xSSC配制时须一种盐溶解后方可加入第二种，即配制时须一种盐溶解后方可加入第二种，即取取NaCl1.75g溶于溶于100ml双蒸水中，待完全溶解后加双蒸水中，待完全溶解后加入入0.88g枸椽酸盐枸椽酸盐片龄片龄1-5天为最适标本天为最适标本从从Ba(OH) 2溶液中取出染色标本时，要求动作迅速，溶液中取出染色标本时，要求动作迅速，切忌切忌BaCO3薄膜形成薄膜形成（Ba(OH2 ) + CO3BaCO3+H2O)敷贴在染色体标本敷贴在染色体标本上，否则影响显带

8、效果上，否则影响显带效果9 9C band in barkey chromosome 51010染色体染色体G带技术带技术 原理原理n也称改良的吉姆萨染色法。因用吉姆萨染色，所以称也称改良的吉姆萨染色法。因用吉姆萨染色，所以称为为G带。是目前应用最广泛的染色体分带技术之一。带。是目前应用最广泛的染色体分带技术之一。n关于关于G带的显带机制，有许多说法，目前尚无定论，带的显带机制，有许多说法，目前尚无定论，比较公认的一种看法是：染色体上富含比较公认的一种看法是：染色体上富含A-T碱基对的碱基对的区段，与蛋白质结合比较紧密，较耐受胰酶处理，从区段，与蛋白质结合比较紧密，较耐受胰酶处理，从而被而被G

9、iemsa深染，而富含深染，而富含G-C碱基对的区段，与蛋白碱基对的区段，与蛋白质结合疏松，在经胰酶处理后，蛋白质受到破坏，而质结合疏松，在经胰酶处理后，蛋白质受到破坏，而不被不被Giemsa染色，显示为淡染的明区。染色，显示为淡染的明区。nG带的预处理方法很多，用热、碱、胰蛋白酶、尿素、带的预处理方法很多，用热、碱、胰蛋白酶、尿素、-胰凝乳蛋白酶，氯化铯和胰凝乳蛋白酶，氯化铯和5-溴脱氧嘧啶等处理，均溴脱氧嘧啶等处理，均可获得良好一致的效果。可获得良好一致的效果。1111步骤：步骤：本实验采用以下方法显示本实验采用以下方法显示G带：带：将片龄为将片龄为3-10天的染色体标本，放入天的染色体标

10、本，放入37温箱中预温箱中预处理处理3小时小时将标本浸入将标本浸入PH为为6.8-7.0的的0.1%胰蛋白酶和胰蛋白酶和0.02% EDTA-Na2 1:1混合液中，室温处理混合液中，室温处理15/20/25min。此步为关键一步，又是很难掌握的一步，片龄的此步为关键一步，又是很难掌握的一步，片龄的长短，胰酶的活性，室温的高低，标本上细胞密度的长短，胰酶的活性，室温的高低，标本上细胞密度的大小等都会影响胰酶的处理强度，总之，处理时间因大小等都会影响胰酶的处理强度，总之，处理时间因染色体标本不同相差很大，需反复试验，逐渐摸索。染色体标本不同相差很大，需反复试验，逐渐摸索。在在pH6.8的的PBS液中漂洗。液中漂洗。(4)(4)Giemsa染色染色3分钟。注意：染色时间不宜过长。分钟。注意：染色时间不宜过长。1212预期结果：预期结果：n在胰酶处理适当的片子上，染色体呈现出深在胰酶处理适当的片子上，染色体呈现出深浅相间的横纹。横纹的数目越多，深浅带纹浅相间的横纹。横纹的数目越多，深浅带纹间反差越强，显带效果越理想。间反差越强，显带效果越理想。n若整条染色体全部深染，即与未显带标本相若整条染色体全部深染，即与未显带标本相似，原因是胰酶处理不够。似，原因是胰酶处理不够。n胰酶处理过度时，染色体呈空泡状，即只显胰酶处理