空心胶囊应急检验过程中发现问题的回复

1、胶囊剂的胶囊壳中铬测定方法答疑汇总1、指导原则中的方法可否进行修改？答：指导原则是依据药典方法形成的，如果要对药典方法进行修改，都必须进行验证。2、消解罐用的是不耐高压的普通消解罐，消解液出现浑浊如何处理？答：可以在消解时加入氢氟酸，并进行方法学验证，具体方法见指导原则。3、样品是否需要粉碎，样品的均匀性如何保证？答：空心胶囊不需要粉碎，应该成对称取囊帽和囊体，直接消解，由于囊帽和囊体铬含量不同，进行粉碎后，样品的均匀性无法保证。4、原子化阶段，在2400度，峰出现拖尾，如何解决？答：原子吸收测定的是峰高，出现拖尾并不影响峰高的测量，但要注意测量后基线是否能够恢复到以前的水平，如果基线不能恢复

2、，则应进行石墨管的空烧，以防止石墨管污染。5、请明确赶酸条件。答：建议赶酸条件为：150,1-2个小时，赶酸至1-2毫升即可。6、药典中标准曲线铬的最高浓度为80ng/ml，已经超出了原子吸收光度计的量程，是否可以进行调整？答：可以进行调整，标准曲线的范围在0-80ng/ml范围内即可，最高浓度视仪器情况而定。7、标准曲线的相关系数是否有最低要求？答：标准曲线的相关系数药典无要求，但建议相关系数应不低于0.99。8、因仪器原因，标准曲线多次测定过程中有微小差异，样品量多时，仪器运行时间过长，是否有必要重新测定标准曲线。答：每次进行测量时都必须重新测定标准曲线。10、怎样解决样品测定中出现重现性

3、、精密性差的问题？ 答：测量过程中重复性大多跟实验人员的操作有关，建议加强对实验操作人员的培训，测量精密度差的问题多与仪器状态有关，建议更换石墨管，重新检测。11、样品前处理必须过夜吗？答：不一定，按照药典方法操作需要过夜，如果不过夜的，需要作方法学验证，下面的两步消解的方法仅供参考, 同时应根据自身仪器设备情况适当改变条件：取样品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸5ml，10030分钟使溶解，补加硝酸2ml，加水1mL，待冷却至室温，加0.5ml氢氟酸，进行第一次微波消解（参考程序为10min升温至120，保持5min，10min升温至140，保持15min）。冷却放气（无需完全打开消解

4、罐盖，只需扭松即可）。随后进行第二次消解（参考程序为10min升温至150，保持5min，10min升温至185，保持15min）。冷却后，加热赶酸至1-2ml，纯水定容至50ml，作为供试品溶液。12、消解过程中加氢氟酸会对检测结果有影响吗？答：某些明胶空心胶囊配方中加入了二氧化钛遮光剂，仅加硝酸无法消解二氧化钛，会产生消解液浑浊现象，故加入氢氟酸消解，使供试品溶液澄清透明，但要进行方法学验证。13、检测时，需随行回收试验吗？答：在ppm水平进行检测时，试剂及实验操作都可能对检测造成干扰，因此建议每次进行消解时，进行随行回收试验，控制随机误差，保证数据的可靠性。14、样品称样时，胶囊帽和胶囊

5、体需成对称量吗？答：由于胶囊中的胶囊帽和胶囊体的铬含量可能不同，所以称样时，胶囊帽和胶囊体应成对称量。15、如何确证消解罐清洗干净了？答：每次消解罐使用完毕后，应该先用去离子水清洗，然后用20%-30%的硝酸浸泡，后再用去离子水清洗，每次测样品时，应加空白样品组，以验证消解罐已经清洗干净。16、玻璃量瓶对铬测定有影响，应采用什么材质的塑料量瓶？答：使用的塑料量瓶材质应以不影响铬的测量为准，推荐使用的塑料量瓶材质为聚丙烯材质。17、 检测过程中发现胶囊存在不均匀性，囊帽和囊身之间铬含量可能 存在一定的差异，同批次药品所使用胶囊也可能存在差异。处理 样品时应除去内容物后整粒胶囊壳进行取样检测，尽量

6、避免样品 不均匀性带来的偏差。答：同意上述观点，称样时应囊帽和囊体配对称量。18、 本实验必须采用优级纯硝酸等试剂，并及时对试剂空白溶液进行 考察。据我所检测过程中发现，部分国产优级纯硝酸制得的空白 溶液背景较高，对检测产生较大的影响，甚至难以进行正常检测， 进口优级纯硝酸制得的空白溶液背景较低。建议方法对硝酸等试 剂要求进行规定。答：参考我院中检包材201281号关于发布明胶药用空心胶囊 铬检测方法指导原则的通知中明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则，在指导原则中已经注明，试剂如硝酸，需使用优级纯试剂或选取背景较低的试剂进行实验，如选用达到要求的国产优级纯硝酸试剂（如国药集团化学试剂有限公司生

7、产的批号为80089291的硝酸），或者选用进口试剂，如MERCK公司的优级纯硝酸。19、 中国药典（2010年版）明胶药用空心胶囊壳中铬的检测规定 消化过程中浸泡过夜，这对日常检测工作较为有利。但在应急检 验中难以满足规定的要求。对大部分样品来说，浸泡过夜和不经 泡过夜进行消化，结果并无显著性差异。可根据实际样品和任务 来选择是否浸泡过夜，主要依据为是否能消解完全和安全。答：如果不按照药典规定方法，浸泡过夜，则需要必要的方法学验证。推荐的不过夜样品前处理方法如下：取样品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸5ml，10030分钟使溶解，补加硝酸2ml，加水1mL，待冷却至室温，加0.5ml氢

8、氟酸，进行第一次微波消解（参考程序为10min升温至120，保持5min，10min升温至140，保持15min）。冷却放气（无需完全打开消解罐盖，只需扭松即可）。随后进行第二次消解（参考程序为10min升温至150，保持5min，10min升温至185，保持15min）。冷却后，加热赶酸至12ml，纯水定容至50ml，作为供试品溶液。同法制备试剂空白溶液。20、 消解过程中发现只加入10mL硝酸消解时，受消解过程中产生的氮氧化物影响消解罐容易变黄，影响下次使用。可加入硝酸后再加入适量的双氧水（2-3mL）消化，能有效减少该现象的发生。经验证，加入双氧水与不加相比，结果并无差异。答：在消解过程

9、中是否加入双氧水，以及加入体积需要进行必要的方法学验证。同时，消解罐每次使用后，需经酸浸泡或加入硝酸空白消解清洗后方可使用。21、 由于铬的原子化温度较高，对石墨炉原子吸收分光光度计使用的石墨管损坏较大，建议根据检测情况及时采取相应的措施（如测定5个样品左右后插入标准溶液进行校正，10个样品左右重新测定标准曲线，根据检测情况及时更换石墨管）。答：同意上述观点，建议每测定510份样品后，测定质控样品，如 果质控样品变化较大，则需要重新测定标准曲线。22、 供试品溶液的制备中供试品取样量0.5克是否过大(可能导致消 解罐压力过大,防爆膜破裂,使消解失败)。答：取样量不能再减少，否则样品的代表性会降

10、低。出现爆罐主要是 预消解时间不够，可采用预消解的方法解决爆罐问题。23、 同法制备试剂空白因空白消解罐中的硝酸消耗量与供试品不一 致，无法对供试品空白进行有效模拟。答：供试品和试剂空白的制备方法是相同的，加入硝酸量应相同。24、 石墨炉测试条件的灰化温度过低(有资料显示不加基体改进剂时 灰化温度应达到1200)，且原子化温度也过低(有资料显示原子 化温度应达到2500)原子化不完全，造成记忆效应不易消除， 使结果重现性较差。答：原子化温度过低，确实会影响测定结果；原子化温度过高，又会 影响到石墨管的寿命。因此需要根据不同的仪器，优化后，确定 实验的参数。25、对定量限的定义不明确，会造成不同

11、的判别结果。答：指导原则中提到的定量限为最低要求，即为标准曲线的第一个浓 度点。26、 本实验对铬的检测属微量限度检测,且胶囊为固态物质，铬是否以均匀态存在于胶囊壳中尚不明确，实验过程中发现可能因上述因素使两份平行测定的结果相对偏差较大，难以满足小于等于10%的要求，是否能提供保证胶囊壳均匀取样的指导方法？答：指导原则中，已经指明首先取样量不能低于0.5g，在称量时囊 帽和囊体需要配对称量。27、 由于铬含量测定属微量元素检查，实验室环境和人员操作均可能对样品带来污染。建议添加紫菜等标准品作为参考物质，减少仅有铬作为加样回收可能带来的试验评价误差。答：回收实验一般能够较好的反应测定误差，如果能

12、够有质控样品随行测定，对结果更有保证。但必须考虑到紫菜等标准物质与胶囊样品的基质差异很大，在经过必要对比试验，证明不存在基质干扰情况下，可以采用质控样品代替随行回收实验。28、 实验中发现消解罐清洗使用的浸泡液应及时更换，并尽可能的延长浸泡时间以减少消解罐的记忆效应。建议每批消解罐清洗完毕后，在使用时均应做空白试验，并对消解罐的洗涤效果进行验证。答：每次消解罐均需加入硝酸空白消解后方可使用。每次消解均应制 备试剂空白溶液，同时保证试剂空白溶液的吸光度值应小于标准 曲线第一浓度点的50%。29、 由于胶囊壳在消解时反应剧烈，建议根据不同品牌消解炉消解罐 大小和承受压力确定样品取样量、加热的功率和

13、时间。答：消解过程在药典方法中未明确规定。各单位可根据现有仪器，对消解过程的完全性和安全性进行必要的验证。并不需要完全相 同，指导原则中的消解条件仅供参考。30、 测定胶囊剂中胶囊壳铬含量，使用中国药典2010年版二部明胶空心胶囊作为检验依据的合法性问题。胶囊剂各标准项下没有检验胶囊壳的项目，中国药典2010年版明胶空心胶囊也不可作为“制剂通则”检验。答：中检院的做法是收检样品名称为胶囊剂，检验项目为铬，检验依据为中国药典2010年版（二部）明胶空心胶囊，在备注中指明此次检验为监督检验，可将胶囊剂的内容物中清除后，测定胶囊壳中的铬。31、 胶囊中铬含量测定如何统一、规范的排除药的干扰，保证各个

14、实 验室的结果的一致。答：排除药物的干扰，即必须将胶囊剂样品中的内容物清除干净。可参照中国药典2010年版（二部）附录IE胶囊剂的装量差异项下操作。32、 前处理中用到的酸等试剂本底干扰较大，导致本底较高，这样会 影响检测值在2ppm附近的检测结果。答：指导原则中已经指明，所用试剂均需使用优级纯，且保证试剂空 白溶液的吸光度值应小于线性范围的最低点吸光度值的50%。33、 关于指导原则中试剂空白不超过标准曲线最低浓度点吸光度值 的50%，标准曲线最低浓度是多少？现在我们取4ng/ml浓度作为最低点，也测了多个厂家的优级纯的硝酸都达不到低于50%的结果，但如果取8ng/ml浓度作最低点，就有低于

15、50%的试剂空白，同时发现各厂家的优级纯的硝酸的试剂空白相差也大，是否能推荐品牌？答：指导原则中指明线性范围的最低点和最高点浓度不得小于10倍，如果低点升高，则高点也应相应增高，会导致线性相关系数变差，所以建议改换质量更好的试剂。中检院目前使用的硝酸为国药集团化学试剂有限公司生产的批号为80089291优级纯的硝酸。34、 关于指导原则中消解的条件：由于不同仪器的设定条件都不一 样，与指导原则的消解条件就有不同，如CEM厂家的能用指导原则的消解程序，而国产的消解仪就根本达不到这个温度，是否两种消解有差异？答：指导原则中的消解条件仅为参考，不同消解仪器的参数会稍有差异。各单位应针对现有的仪器，改

16、变实验条件，进行必要的方法学验证，保证消解的完全和实验过程的安全。35、指导原则中“8.3供试品溶液的制备”项表述不够明确，如：“加 硝酸5-10ml”究竟多少毫升最佳？“浸泡过夜”指浸泡多少小时合适。“置适宜的微波消解”，未明确消解程序；“置电热板上缓缓加热至红棕色蒸汽挥尽并近干”加热温度不明确、“近干”对消解管中液体来说不好掌握。答：加入的硝酸体积参考值为0.5g样品加入5ml硝酸，浸泡过夜由于消解炉不同，微波消解的条件各有差异，因此药典方法中对于“置适宜的微波消解”并未规定明确的消解程序。对于赶酸温度，药典方法也未明确，中检院现在使用的赶酸温度一般在140左右。“近干”一般指消解管中液体

17、剩余12ml即可。36、 “9.2准确性：每次测定需进行随行回收率试验”在实际检 测中太繁琐，必要性不大。答：随行回收是原子吸收分光光度法进行微量检测时保证结果准确性 的必要步骤。37、 标准方法中未规定检出限值，线性的相关系数r值、回收率范围、 重复性变化范围（RSD）过宽。答：上述指标在指导原则中均已有明确规定。38、微波消解管的清洗，建议纯净水洗净后烘干，加65%硝酸加热 40min，倒出硝酸后，纯净水清洗干净，烘干，备用。答：中检院操作为纯化水洗净后，加硝酸5ml空白消解后，用纯化水 清洗干净后，烘干、备用。39、药典规定：消解完全后，置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽并近干。在实际操作中如挥尽并近干，易至炭化，不太好操作。建议明确加热板的温度和时间，以加热至红棕色气挥尽，或加热至残留溶液的体积数。答：中检院目前采用的赶酸温度在140左右，赶酸结束不应以多长时间作为界限，而应以消解罐中剩余液体大约12ml时作为停止时间。40、国标GB/T5009.123-2003中规定，样品消解过程中加过氧化氢溶 液，是否有必要？答：加过氧化氢的方法尚未进行验证。如要采用，则需方法学验证。41、随行回收率：参照食品检验，做方法学研究