氯霉素酶联免疫检测试剂盒(组织、生乳、蜂蜜、饲料、蛋)

1、氯霉素酶联免疫检测试剂盒说明书【反应原理】氯霉素酶联免疫检测试剂盒，主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的，换句话说，就是利用酶标记物与样品中的氯霉素与微孔中的抗体进行竞争反应。在整个反应当中，如果样品中的氯霉素残留的越多，相对地就会竞争反应越多的酶标记物，使得能结合上抗体的酶标记物相对地减少，用TMB底物显色，样品中的氯霉素含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出氯霉素含量。【试剂盒组份】1、酶标板：8孔/条，12条/板2、氯霉素标准溶液(1.5 mL / 瓶)：0 ppb、0.025 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.6 ppb ;

2、 10ppb3、10倍浓缩样品稀释液 30 mL 4、10倍浓缩清洗液 30 mL 5、氯霉素酶标记物 8 mL 6、显色液 12 mL 7、反应终止液 12 mL 【试剂盒技术指标】试剂盒灵敏度： 0.025ppb样本检测下限：生乳0.1 ppb蜂蜜0.1 ppb蜂王浆0.1 ppb血清 0.025 ppb鱼虾、蟹、鸡肉、猪肉0.025 ppb饲料0.25 ppb蛋 0.025 ppb交叉反应率：氯霉素 100%左旋霉素 1.4%庆大霉素<0.1%甲砜霉素 3.1%四环素<0.1%青霉素<0.1%磺胺甲嘧啶<0.1%回收率：生乳70130%蜂蜜70130%蜂王浆701

3、30%鱼、虾、蟹、乌贼、鸡及猪肉70130%饲料70130%血清70130%蛋 70130%批间、批内变异系数：CV10%【所需仪器和试剂】所需仪器：酶标仪、离心机、均质机、微量移液器(单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl)所需试剂：乙酸乙酯、正己烷、0.5 N 盐酸溶液、0.5 N 氢氧化钠溶液【注意事项】1、使用前请先将试剂盒回温至室温 (置于室温60分钟以上)，各溶液皆摇匀后方可使用。2、回温后，取出所需酶标板条，将剩余未测的ELISA孔条立即放回铝箔袋中，置于4 保存。3、10倍样品稀释液与10倍清洗液请用

4、蒸馏水稀释10倍方可使用。 (如1 mL浓缩稀释液加9 mL蒸馏水) 稀释后的1×样品稀释液和1×清洗液可于4 保存一周。4、萃取流程请使用P.P.材质的15 mL离心管以免腐蚀。5、反应终止液含0.5 N HCl，请小心操作。6、氯霉素标准溶液含氯霉素，请小心操作。7、本试剂盒的所有试剂出厂前均做过完整的测试，请使用试剂盒提供的药品及试剂，勿任意更换。8、ELISA所得的氯霉素浓度若低于该样品检品敏感度即可视为该样品背景值，无须回乘稀释倍数。反之若所得的氯霉素浓度若高于该样品检品敏感度，即可能为氯霉素阳性样品，建议使用再其它检测方法检测，如GC/MS等。9、进行生乳的检品

5、制备时，在ELISA操作时中请确实轻敲酶标板一到二分钟(D.操作步骤的第四点)。10、阴性生乳的OD 450吸光值可能会高于标准品0 ppb的吸光值但不会影响对氯霉素阳性样品的判定。【样本前处理】样品处理前须知：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样品处理 ：本试剂可检测生乳、蜂蜜、蜂王浆、鱼、虾、蟹、乌贼、鸡肉、猪肉、饲料及血清等残留的氯霉素；1、待测物为生乳，请先参考注意事项第9,10点。n 现配萃取稀释液：10倍浓缩样品稀释液用蒸馏水稀释10倍后使用。(如1 mL浓缩样

6、品稀释液加9 mL蒸馏水稀释)n 取250 µL乳品放置1.5 mL微量小管中。n 加入750 µL现配一倍样品稀释液，快速震荡 30秒钟后备用。稀释倍数: 42、待测物为蜂蜜，则按以下方法进行萃取：n 取2 g蜂蜜、4 mL蒸馏水与4 mL乙酸乙酯置入15 mL离心管中，震荡30秒。n 持续上下颠倒该离心管10分钟，使其充分混合均匀。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，取1 mL上层液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮气将有机溶剂吹干。n 加入0.5 mL样品稀释液，震荡30秒钟后备用。稀释倍数: 13、待测物为蜂王浆，则按以下方法进行萃取：n

7、取2 g蜂王浆、3 mL 0.5 M NaOH及8 mL乙酸乙酯置入15 mL离心管中，震荡 30秒。n 持续上下颠倒该离心管10 分钟，使其充分混合均匀。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，取2 mL上层液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮气将有机溶剂吹干。n 加入0.5 mL样品稀释液，震荡30秒钟后备用。稀释倍数: 14、待测物为鱼、虾、蟹、乌贼、鸡肉、猪肉及血清，则按以下方法进行萃取：n 将3克已均质的样品放入15 mL离心管中，再加入6 mL乙酸乙酯，震荡5分钟。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，取2 mL上层液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于

8、50 下，利用氮气将有机溶剂吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷1 mL，先将残余物完全溶解后，再加入1 mL样品稀释液，震荡30秒钟。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，利用吸管吸去包含中间乳化层部分的上层液(正己烷)，再吸取下层液(水层)备用。稀释倍数: 1若待测物为白虾可按以下流程将样品做8倍浓缩以增加检品敏感度n 将6克已均质的样品放入15 mL离心管中，再加入6 mL乙酸乙酯，震荡5分钟。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，取4 mL上层液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮气将有机溶剂吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷2 mL，先将残余物完全溶解后，再加入

9、0.5 mL样品稀释液，震荡30秒钟。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，利用吸管吸去包含中间乳化层部分的上层液(正己烷)，再吸取下层液(水层)备用。稀释倍数: 0.1255、待测物为饲料，则按以下方法进行萃取：n 取2 g饲料与4 mL乙酸乙酯置入15 mL离心管中，震荡30秒。n 持续上下颠倒该离心管10分钟，使其充分混合均匀。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，取1 mL上层液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮气将有机溶剂吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷1 mL，先将残余物完全溶解后，再加入0.5 mL样品稀释液，震荡30秒钟。n 用离心机离心1700

10、x g 10分钟，利用吸管吸去包含中间乳化层部分的上层液(正己烷)，再吸取下层液(水层)稀释10倍后(如50 µL下层液加450 µL样品稀释液)备用。稀释倍数: 106、待测物为全蛋，则按以下方法进行萃取：n 取1 g全蛋液，加入 0.5N HCl 0.5 mL后快速震荡30秒。n 加入4 mL乙酸乙酯后快速震荡30秒使其混合均匀。n 用离心机离心1700 x g 10分钟，取2 mL上层液(乙酸乙酯)至10 mL玻璃管中，于50 下，利用氮气将有机溶剂吹干。n 在此玻璃管中加入正己烷1 mL，先将残余物完全溶解后，再加入0.5 mL样品稀释液，震荡30秒钟。n 用离心机

11、离心1700 x g 10分钟，利用吸管吸去包含中间乳化层部分的上层液(正己烷)，再吸取下层液(水层)备用。稀释倍数: 1注1:若乳化现象太严重，看不到下层液有澄清部分，请先将玻璃管中大部分上层液取出，剩余乳化部份再利用隔水加热80100 约3分钟后再离心，即可改善乳化现象。注2:因为利用乙酸乙酯萃取的流程可能有溶剂的背景值过高的现象，因此建议若待测物使用乙酸乙酯来做萃取，可多做一个溶剂背景值的样品。待测物的浓度等于所得浓度减去溶剂背景值的浓度再乘以稀释倍数。注3:如何得到溶剂背景值的浓度如该待测物的萃取流程，但不加待测物，从把适量的乙酸乙酯移入玻璃管中做起到完成整个萃取流程。之后同待测物一起

12、以ELISA做测试。【检测程序】本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用，无需再稀释 1、将标准品对应微孔按序编号后分别分别加入100 µL 氯霉素标准溶液。 2、在其他的微孔加入100 µL已完成前处理的样品溶液。 3、再于每一微孔另加入50 µL已完全回温的酶标记物。 4、轻敲酶标板四周，使其充分混合后于室温下避光静置1小时。 5、将微孔中的反应液甩掉，再将已稀释清洗液（参考注意事项3）加满每一微孔后甩掉，重复3次。 6、最后一次甩掉清洗液后，在吸水纸上拍干。 7、于每一微孔加入显色液100 µL后，轻敲酶标板四周，使其充分混合。 8、于室温下避光

13、静置20分钟。 9、加入反应终止液，每一微孔加入100 µL。 10、酶标仪以单波长450 nm或双波长450 nm / 650 nm读值。【结果判定】1、定性判定：用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含氯霉素浓度范围（ng/ml）。假设样品1的吸光度值为0.313，样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.892；0.025ppb为1.501；0.05ppb为1.175；0.1ppb为0.751； 0.3ppb为0.421； 0.6ppb为0.198。则样品1的浓度范围0.3ppb-0.6ppb；样品2的浓度范围0.05ppb-0.1ppb。（再乘以相应的稀释倍数）2、定量判定：所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。百分吸光度值（%）B×