革兰氏染色细菌接种ppt课件

1、实验一革兰氏染色、细菌接种实验内容一，革兰氏染色操作二，细菌接种平板划线法操作斜面培育基接种法操作半固体培育基接种法/穿刺接种法操作液体培育基接种法操作细菌在液体、固体、半固体培育基中的生长景象示教实验内容一，革兰氏染色操作一，革兰氏染色操作二，细菌接种二，细菌接种平板划线法操作平板划线法操作斜面培育基接种法操作斜面培育基接种法操作半固体培育基接种法半固体培育基接种法/穿刺接种法操作穿刺接种法操作液体培育基接种法操作液体培育基接种法操作细菌在液体、固体、半固体培育基中的生长细菌在液体、固体、半固体培育基中的生长景象示教景象示教革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gran

2、创建的。 实验原理：细菌对革兰氏染色的不同反响是由于实验原理：细菌对革兰氏染色的不同反响是由于它们细胞壁的成分和构造不同而呵斥的。初染后，它们细胞壁的成分和构造不同而呵斥的。初染后，一切细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染一切细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫剂，它能与结晶紫结合成结晶紫碘的复合物，碘的复合物，加强染料与细菌的结合力。当用脱色剂处置时，加强染料与细菌的结合力。当用脱色剂处置时，革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖构成的网状革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖构成的网状构造组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时构造组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细

3、胞壁脱水，使肽聚糖层的网状构造孔经减少，细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状构造孔经减少，透性降低，从而使结晶紫透性降低，从而使结晶紫碘的复合物不易被洗碘的复合物不易被洗脱而保管在细胞内，经脱色和复染后仍保管初染脱而保管在细胞内，经脱色和复染后仍保管初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌那么不同，由于其细剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌那么不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色处置时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，处置时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来，用碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染

4、上复染剂的红色。复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall 经此法染色后，细胞保管初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色红色的细菌为革兰氏阴性菌。 Gram negative Gram positive 涂片： 将杆菌和球菌分别涂片、枯燥、固定。 革兰氏染色： 初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，

5、约2030秒，立刻用水冲净乙醇 复染：用番红液染1-2分钟，水洗涂片：涂片： 思索题作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓重？其染色成败的关键步骤是什么？当他对一株未知菌进展革兰氏染色时，怎样能确证他的染色技术操作正确，结果可靠？呵斥革兰氏染色结果不正确假阴性或假阳性的主要缘由有哪些？实验内容一，革兰氏染色操作二，细菌接种平板划线法操作斜面培育基接种法操作半固体培育基接种法/穿刺接种法操作液体培育基接种法操作细菌在液体、固体、半固体培育基中的生长景象示教细菌生长繁衍的条件 充足的营养物质 水，碳源，氮源，无机盐，生长因子 适宜的外界环境 温度 酸碱度 气体 浸透压培育基 适宜于细菌生长繁衍需求的各种

6、营养物质在PH(7.27.6)条件下配制而成的基质。 培育基配成后灭菌培育基分类 按物理性状分液体培育基半固体培育基 含0.10.5%琼脂察看穿刺线、保管菌种 固体培育基 含23%琼脂平板：划线分别，菌落计数，分别纯化 斜面：纯种移种 培育基分类 按营养成分分类根底培育基含细菌菌生长的根本营养成份营养培育基参与糖，血，血清，酵母浸膏等 ，用于营养要求高的细菌的培育，如：血平板培育基分类 按用途分合成培育基用于研讨细菌代谢过程、特殊菌的分别培育鉴别培育基含有特定的作用底物，如糖发酵管，葡萄糖蛋白胨水 选择培育基在培育基中参与抑制某些细菌生长的物质，而选择性地允许另外一些细菌的生长。如肠道致病菌选

7、择培育基：SS培育基，抗生素培育基 厌氧培育基庖肉培育基一，平板划线法操作平板分区划线平板分区划线平板分区划线平板分区划线平板划线法 是一种分别培育法接种培育长出单个菌落实验步骤平板划线法 不要说话，严厉无菌操作 灼烧接种环后要冷却 取一环葡萄球菌或大肠杆菌 划线时用腕力，不要使接种环嵌入琼脂 各个分区要清楚 在培育皿底部贴标签 倒置培育以防止结晶水冲散细菌二，斜面培育基接种法操作斜面接种时的无菌操作斜面接种时的无菌操作(1)(1)接种灭菌接种灭菌 (2)(2)开启棉塞开启棉塞 (3)(3)管口灭菌管口灭菌 (4)(4)挑起挑起菌苔菌苔 (5)(5)接种接种 (6)(6)塞好棉塞塞好棉塞 实验

8、步骤斜面接种法用左手握住菌种管葡萄球菌或大肠杆菌和斜面培育基管，右手持接种环。用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口经过火焰灭菌。用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。伸入斜面培育管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培育管口，并塞上棉塞，置于37培育。三，半固体培育基接种法/ 穿刺接种法操作穿刺接种法穿刺接种法实验步骤穿刺接种法用左手握住菌种管大肠杆菌或痢疾杆菌和半固体培育管，右手持接种针。用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口经过火焰灭菌几次。用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种终了，于37培育1824h，察看生长情况。四，液体培育基接种法操作实验步骤液体培育基接种法 用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 菌种管：葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌 在试管内