纸色谱和平板电泳-(第五讲)

1、纸层析分离技术纸层析分离技术Paper Paper ChromatographyChromatography 1目录一 纸色谱法的基本理论二 几种特殊类型的纸色谱法三 应用举例 2原理：原理：根据溶质根据溶质A A在流动相与固定相（纸纤维中吸着在流动相与固定相（纸纤维中吸着的水分）中的分配系数不同，流动相因毛细现象沿的水分）中的分配系数不同，流动相因毛细现象沿纸上升，纸上升，K KD D大的前进慢，大的前进慢，K KD D小的上升快，因而溶小的上升快，因而溶质得到分离。质得到分离。3DAAK 固固定定相相流流动动相相固定相固定相滤纸上的吸附水滤纸上的吸附水 ( (或用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二

2、醇处理或用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇处理) )流动相流动相溶剂溶剂 （乙醇、丙醇、丙酮及与水不相溶的溶剂）（乙醇、丙醇、丙酮及与水不相溶的溶剂）（但也有人认为属离子交换（但也有人认为属离子交换色谱和吸附色谱或三者皆有）色谱和吸附色谱或三者皆有）一一 . 基本原理基本原理4 纸色谱示意图纸色谱示意图 Rf 0.02，A、B可分离可分离.12f1f2fxRyxRyxRy 比移值比移值溶剂前沿溶剂前沿起始线起始线（原点）（原点）展开剂展开剂yx2x1层析缸层析缸层层析析纸纸与标样比较可定性鉴定与标样比较可定性鉴定氨基酸的氨基酸的R RF F值值展开剂展开剂正丁醇正丁醇+ +吡啶吡啶+ +水水 0.

3、200.20 0.29 0.60 0.29 0.60 0.200.20 0.33 0.24 0.33 0.24 1 : 1 : 1 1 : 1 : 1正丁醇正丁醇+ +醋酸醋酸+ +水水 0.230.23 0.230.23 0.70 0.28 0.22 0.11 0.70 0.28 0.22 0.11 12 : 3 : 5 12 : 3 : 55天天冬冬氨氨酸酸甘甘氨氨酸酸白白氨氨酸酸谷谷氨氨酸酸丝丝氨氨酸酸组组氨氨酸酸1. 展开剂种类展开剂种类二. 影响R Rf f的因素3. 温度的影响62. 滤纸的性质粘稠展开剂粘稠展开剂(正丁醇等正丁醇等) - 快速滤纸快速滤纸黏度小的展开剂黏度小的展开

4、剂(石油醚等石油醚等) -慢速滤纸慢速滤纸4 . 展开方式上行上行 - 慢慢(常用常用)下行下行- 快快( 适用于比移值小的溶质适用于比移值小的溶质)影响分配系数的变化，而且展开剂组成也受温度影响影响分配系数的变化，而且展开剂组成也受温度影响而有一定程度改变，但影响较小。一般不需要特别的而有一定程度改变，但影响较小。一般不需要特别的恒温装置恒温装置三三. . 纸色谱法的基本操作纸色谱法的基本操作 3.1 3.1 纸的准备纸的准备 3.2 3.2 点样点样 3.3 3.3 展开展开 3.4 3.4 显色及定位显色及定位 3.5 3.5 定量定量73.1 纸的准备 一般纸色谱法使用的滤纸应具备以下

5、条件：一般纸色谱法使用的滤纸应具备以下条件：（1 1） 滤纸中应不含有水或有机溶剂能溶解的杂质。滤纸中应不含有水或有机溶剂能溶解的杂质。（2 2） 滤纸被溶剂浸润时，不应有机械折痕和损伤。滤纸被溶剂浸润时，不应有机械折痕和损伤。即应具有一定的强度。即应具有一定的强度。（3 3） 滤纸对溶剂的渗透速度应适当，渗透速度太滤纸对溶剂的渗透速度应适当，渗透速度太快时易引起斑点拖尾，影响分离效果，速度太慢时，快时易引起斑点拖尾，影响分离效果，速度太慢时，耗费时间太长。耗费时间太长。（4 4） 纸质应均一，否则会影响实验结果的重复性，纸质应均一，否则会影响实验结果的重复性，特别是定量实验中这点更是重要。特

6、别是定量实验中这点更是重要。8层析纸层析纸按需要剪裁成长条形（或筒型）按需要剪裁成长条形（或筒型）93.2 点样点样用微量注射器或玻用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。量试样点在原点上。试样点的直径一般试样点的直径一般应小于应小于5mm。可并。可并排点多个试样同时排点多个试样同时展开。展开。3.3 3.3 展开展开10展开时必须在密闭的容器中进行。展开时必须在密闭的容器中进行。展开剂不得浸泡到点样线展开剂不得浸泡到点样线一元展开一元展开二元展开（双向展开）二元展开（双向展开）多段展开多段展开将滤纸浸于层析缸中的展开剂中，使展开将滤纸浸于层析缸中的展开剂中，使展开剂

7、通过滤纸的毛细作用上升（或下降），剂通过滤纸的毛细作用上升（或下降），实现试样的分离实现试样的分离11例：例：氨基酸混合液点在氨基酸混合液点在1515cm滤纸边滤纸边2cm处，风干，处，风干，展开剂用展开剂用CH3OH-H2O-吡啶（吡啶（20:5:1），当溶剂移动至，当溶剂移动至14cm处，取出风干。处，取出风干。（第一次展开）第一次展开） 将滤纸折成筒状，将滤纸折成筒状，使斑点处于下方，再用使斑点处于下方，再用叔丁醇叔丁醇- -甲基乙基酮甲基乙基酮- -H H2 2O-O-二乙胺二乙胺(10:10:5:1) (10:10:5:1) 展开至展开至14cm14cm，取出风干。，取出风干。( (

8、第二次展开第二次展开) )显色：显色：茚三酮茚三酮-4-4-乙乙-2-2-甲氮苯甲氮苯- -冰冰HAcHAc xx 第二次展开第二次展开双向纸色谱法双向纸色谱法第一次展开第一次展开3.4 显色及定位 经上述展开至溶剂前沿到达纸的另一端时，经上述展开至溶剂前沿到达纸的另一端时，即可将纸取出，待溶剂挥干后用适宜方法确定即可将纸取出，待溶剂挥干后用适宜方法确定组分斑点的位置组分斑点的位置12有色物质，展开后即可直接观有色物质，展开后即可直接观察到各个色斑察到各个色斑紫外光照射下产生荧光，观察紫外光照射下产生荧光，观察荧光（例如生物碱）荧光（例如生物碱）喷以试剂使斑点显色（显色剂，喷以试剂使斑点显色（

9、显色剂，碘蒸气熏或氨水熏等）碘蒸气熏或氨水熏等）13显色举例显色举例1 1磺胺类药物如磺胺噻唑和磺胺嘧啶混合物的分离和检出，磺胺类药物如磺胺噻唑和磺胺嘧啶混合物的分离和检出，可用可用 1% 1% 的氨水作展开剂，用的氨水作展开剂，用对二甲胺基苯甲醛对二甲胺基苯甲醛（即（即 EhrlichEhrlich试剂）乙醇溶液作显色剂。试剂）乙醇溶液作显色剂。552 2氨基酸的分离和检出，一般需用双向层析。先用酚：水氨基酸的分离和检出，一般需用双向层析。先用酚：水（7 7：3 3）作展开剂进行第一次展开；再用丁醇：醋酸：水（）作展开剂进行第一次展开；再用丁醇：醋酸：水（4 4：1 1：2 2）作展开剂进行

10、第二次展开，可分离出近）作展开剂进行第二次展开，可分离出近 20 20 种氨基酸种氨基酸。展开后喷以。展开后喷以茚三酮的丁醇溶液茚三酮的丁醇溶液，使之显色。，使之显色。113 3纸上层析法不但可用于分离各种常见无机离子，由于它纸上层析法不但可用于分离各种常见无机离子，由于它需用试样量很少，因此在各种贵金属和稀有元素的分离方面也需用试样量很少，因此在各种贵金属和稀有元素的分离方面也已得到了很好的应用。例如金、铂、钯、铑离子的分离，可用已得到了很好的应用。例如金、铂、钯、铑离子的分离，可用乙醚：丁醇：浓盐酸（乙醚：丁醇：浓盐酸（1 1：2 2：2.52.5）混合溶液作展开剂，展开）混合溶液作展开剂

11、，展开后喷以后喷以 SnClSnCl2 2溶液溶液、金、铂、钯立即出现色斑，铑则在稍温热、金、铂、钯立即出现色斑，铑则在稍温热后显色。铑、钌、钯、铂、铱、金离子的分离则可用后显色。铑、钌、钯、铂、铱、金离子的分离则可用 N-NN-N二仲二仲辛基乙酰胺为固定相，辛基乙酰胺为固定相，5M HCl 5M HCl 溶液为展开剂进行纸上反相层溶液为展开剂进行纸上反相层析等。析等。3.5 定量 1.1.洗脱测定法洗脱测定法 操作步骤多，测定时间长，但洗脱法不需操作步骤多，测定时间长，但洗脱法不需要贵重仪器设备、测定结果有较好的准确度。要贵重仪器设备、测定结果有较好的准确度。14 紫外分光光度法、紫外分光光

12、度法、比色法及其它方法比色法及其它方法如极谱、库仑滴定、如极谱、库仑滴定、荧光测定等。荧光测定等。2 直接测定法 a a 目测法目测法 样品经分离后，直接观察所得斑点的大小样品经分离后，直接观察所得斑点的大小和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得到的和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近似地判断一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近似地判断样品中所测成分的含量。（误差较大）样品中所测成分的含量。（误差较大） b b 测面积法测面积法 展开后色谱上的斑点面积与化合物含量展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间存在一定关系，所以可以用测定斑点面

13、积的方法来测间存在一定关系，所以可以用测定斑点面积的方法来测定样品含量。定样品含量。 15C 仪器测定法 纸色谱中纸为半纸色谱中纸为半透明物体，故可以用透明物体，故可以用类似于分光光度计结类似于分光光度计结构的光密度计构的光密度计（ densitometer densitometer ）扫描滤纸，测定透光扫描滤纸，测定透光强度的变化而定量。强度的变化而定量。16四. 应用举例 (一)分离和分光光度法测定氯原酸 (二)用色谱法测定岩石及矿物中金、锑 硒、砷、铊（铋） (三)贵金属元素的反相纸色谱分离研究 17(一) 分离和分光光度法测定氯原酸1 1 搞要搞要 氯原酸是杜仲、金银花等多种中氯原酸是

14、杜仲、金银花等多种中草药抗菌消炎的有效成份之一。氯原酸的测定草药抗菌消炎的有效成份之一。氯原酸的测定有多种方法，本文用纸色谱法的分离条件和氯有多种方法，本文用纸色谱法的分离条件和氯原酸的配位效应进行显色的有关参数，建立了原酸的配位效应进行显色的有关参数，建立了测定氯原酸的可见分光光度法。方法具有仪器测定氯原酸的可见分光光度法。方法具有仪器简单、灵敏度高、选择性好、快速准确、容易简单、灵敏度高、选择性好、快速准确、容易普及等优点。普及等优点。18 2 实验部分a a 仪器和试剂仪器和试剂 色谱用滤纸（杭州新华纸业有限公色谱用滤纸（杭州新华纸业有限公司）司） 721721型分光光度计（上海分析仪器

15、三厂）型分光光度计（上海分析仪器三厂） KQKQ15001500型超声波发生器（昆山市超声仪器有限型超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司）等。公司）等。b b 样品预处理和测量样品预处理和测量 吸取吸取 5.0000g 5.0000g 干燥杜仲叶干燥杜仲叶粉末，加蒸馏水浸泡粉末，加蒸馏水浸泡 24h 24h ，超声波振荡处理，超声波振荡处理 3 3 次，次，每次每次 30min30min，合并滤液，定容于，合并滤液，定容于 100ml 100ml 容量瓶中。容量瓶中。吸取吸取 50ul 50ul 提取液，点样于色谱滤纸上，用正丁醇提取液，点样于色谱滤纸上，用正丁醇- -水水- -冰醋酸（冰醋酸

16、（4 4：2 2：1 1，V/VV/V）作展开剂，按常规操）作展开剂，按常规操作展开，风干滤纸，在作展开，风干滤纸，在 365nm 365nm 紫外分析仪上点划紫外分析仪上点划出淡蓝色荧光斑点，剪下，并剪成细条状，收集于出淡蓝色荧光斑点，剪下，并剪成细条状，收集于 20ml20ml具塞刻度试管中，加具塞刻度试管中，加 10ml 10ml 蒸馏水，超声波蒸馏水，超声波振荡处理振荡处理 15min 15min ，所得溶液测量吸光度，所得溶液测量吸光度A A。193 结果与讨论：a)a) 显色吸收光谱显色吸收光谱 紫红色络合物的吸收光谱，最紫红色络合物的吸收光谱，最大吸大吸 收波长为收波长为 526

17、nm526nm。b)b) 显色化合物的稳定时间显色化合物的稳定时间 室温加入乙醇，然后室温加入乙醇，然后显色，显色， 显色化合物的吸光度在显色化合物的吸光度在 1.5h 1.5h 内无变化内无变化, ,完全能够满足测定的要求。完全能够满足测定的要求。c)c) 杜仲叶提取氯原酸的纸色谱分离杜仲叶提取氯原酸的纸色谱分离 对杜仲叶提对杜仲叶提取液取液 的纸色谱分离展开剂进行了不同组成和配比的纸色谱分离展开剂进行了不同组成和配比的对比实验，其中以正丁醇的对比实验，其中以正丁醇- -醋酸醋酸- -水（水（4 4：1 1：2 2，V/VV/V）分离效果最好，可使氯原酸与干扰物质完全）分离效果最好，可使氯原

18、酸与干扰物质完全分离。氯原酸的分离。氯原酸的R Rf f 值为值为 0.750.75。20(二)贵金属元素的反相纸色谱分离研究 文献研究了以不同浓度 P350 和P507 (含磷的萃取剂)为固定相，不同展开体系为流动相的Au、Rh、Ru、Pd等 6 种贵金属离子的反相纸色谱行为，讨论了温度对 Rf 值的影响，并获得了某些多组分混合体系的良好分离。 仪器与试剂 ：2 24cm 、424cm 国产新华牌色层滤纸，将其在不同浓度的P350、P507苯溶液中浸渍 2min ，取出晾干，放入干燥器中备用。 121224cm 层析缸 色谱及显色：按常规上行方法展开 2-3 小时，溶剂前沿为 181cm，以

19、SnCl2 盐酸溶液显色。 实验发现，不同温度下各种金属离子的Rf 值，除Ag+、Au+外，随温度升高，各离子的Rf 值不同程度增加。 21 (三) 用纸色谱法测定岩石及矿物中金、锑、硒、砷、铊（铋） 有有文献报道了用纸色谱法测定岩石及矿文献报道了用纸色谱法测定岩石及矿物中物中铜、铅、锌十二种元素铜、铅、锌十二种元素的研究，并对其影的研究，并对其影响因素也作了探讨。而响因素也作了探讨。而金、锑、硒、砷、铊金、锑、硒、砷、铊（铋）（铋）在在 4mol/l4mol/l饱和正丁醇饱和正丁醇展开剂中用纸色展开剂中用纸色谱法进行分离的文献已有介绍，但利用此方法谱法进行分离的文献已有介绍，但利用此方法在岩

20、石及矿物中对它们进行测定却未见报道。在岩石及矿物中对它们进行测定却未见报道。本文在此基础上，利用新华大张定性滤纸本文在此基础上，利用新华大张定性滤纸（505060cm60cm）作载体展开后，将谱带分别剪下）作载体展开后，将谱带分别剪下进行测定。经实验证明，这种方法既简单，又进行测定。经实验证明，这种方法既简单，又快速，还能解决干扰问题。快速，还能解决干扰问题。22 (三) 用纸色谱法测定岩石及矿物中金、锑、硒、砷、铊（铋）层析剂：用 4mol/l4mol/l饱和饱和的正丁醇显色剂：硫脲十碘化钾混合显色剂操作：样品用王水消化后，吸取0.02ml点样，展开，显色。谱带剪下，溶解，测定。23马国中，

21、色谱，马国中，色谱，1988年第年第6卷第卷第4期，期，251-2522022-4-1124电泳技术电泳技术Electrophoresis 一、概述一、概述二、电泳分类二、电泳分类三、凝胶电泳三、凝胶电泳1 概述概述 在电场作用下，带电颗粒向着与其电性相反的电极移动的现象 蛋白质研究方面：用于蛋白质分离、纯化、分析、小量制备，分子量、等电点的测定 不同的蛋白质分子，由于其侧链可解离基团的种类和数量、分子质量、空间三维结构都有所不同，所以： 等电点（pI）不同 同一pH条件，所带电荷种类、数量不同 大小、形状不同 蛋白质分子在电场中的泳动速度常常用迁移率来表示 定义：蛋白质分子在单位电场强度下的

22、泳动速度 m = = V=迁移速度； E=电场强度； =介质粘度在同一介质中电泳，m只与蛋白分子自身大小和形状（r）、所带电荷数量（Q）相关利用蛋白质混合物中各蛋白的迁移率不同（蛋白性质差异造成），而达到分离的效果VE 6r_Q1.3 迁移率迁移率（MOBILITY, M）6种蛋白质混合物的电泳结果图1.4.迁移率及其影响因素 内在因素 外在因素 1.4.1 影响迁移率的内在因素所带静电荷的多少所带静电荷的多少迁移率与表面电荷成正比。大小和形状大小和形状直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快。DNADNA构象构象一般迁移速率超螺旋环状线状DNA单链开环。质粒质粒DNADNA的构象的构象1.4

23、.2 影响迁移率的外界因素电场强度电场强度 溶液的溶液的pHpH值值 溶液的离子强度溶液的离子强度 温度的影响温度的影响 支持物的影响支持物的影响 电渗电渗电场强度电场强度电场强度是指单位长度（每一厘米）支持物体上的电位降，它对泳动速度起着十分重要的作用。当电压在500V以下，电场强度在 2-10v/cm 时为常压电泳。电压在 500V 以上，电场强度在20-200V/cm 时为高压电泳。一般，电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。溶液的溶液的P PH H值值 溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时

24、，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。溶液的离子强度溶液的离子强度电泳液中的离子增加会使电泳迁移率降低，原因是带电的离子会吸引相反符号的离子聚集在其周围，相成一个与运动粒子符号相反的离子氛（ionic atmosphere），它使该离子向相反的方向运动，从而降低了该粒子的迁移率。温度的影响温度的影响电泳过程中由于通电产生焦耳热，电泳过程中由于通电产生焦耳热，热对电泳有很大的影响。热对电泳有很大的影响。温度每升高温度每升高1，迁移率约增加，迁移率约增加2.4%。为降低热效应对电泳的影响，。为降低热效应对电泳的影响，可控制电压或电流，或在电泳系统可控制电压或电流，或在电泳系统中安装冷却散热装置

25、中安装冷却散热装置支持物的影响支持物的影响 对支持物的要求一般是均匀和吸附力小，否则电对支持物的要求一般是均匀和吸附力小，否则电场强度不均匀，影响区带的分离，实验结果及扫场强度不均匀，影响区带的分离，实验结果及扫描图谱无法重复。描图谱无法重复。电渗电渗 电场作用下液体对于固体支持物的相电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（对移动称为电渗（electro-osmosis）。）。其产生的原因是固体支持物多孔，且其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电。应尽

26、可能选择低电对带负电或正电。应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响渗作用的支持物以减少电渗的影响。二、电泳的分类二、电泳的分类Tise-leas式微量电泳式微量电泳显微电泳显微电泳等电聚焦电泳等电聚焦电泳等速电泳等速电泳密度梯度电泳密度梯度电泳电泳 自由电泳自由电泳（无支持体）（无支持体） 区带电泳区带电泳（有支持体）（有支持体）滤纸电泳滤纸电泳（常压及高压）薄层电泳薄层电泳（薄膜及薄板）凝胶电泳凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）凝胶电泳：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持物的电泳。特点：1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝 胶的孔中泳动。2.电泳操作方法

27、简便，电泳速度快3.分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。4.适用于生化，免疫等定性定量测定 三、凝胶电泳三、凝胶电泳1 1 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是分子生物学研究中常用的技术，可用于分离，鉴定和纯化DNA或RNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下，有不同的迁移率，所以可通过电泳使其分离。 1.2 1.2 琼脂糖简介琼脂糖简介天然琼脂（天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（糖（agarose，约占，约占80%）及琼脂胶（）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性组成。琼脂糖是由

28、半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳。泳。聚丙烯酰胺凝胶 单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N，N四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(A

29、P)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。2.2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：(1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；(3)对pH和温度变化较稳定；(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及

30、交联剂的浓度调节凝胶的孔径；(7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。按凝胶装置分为盘状电泳（图按凝胶装置分为盘状电泳（图1 1）及板状）及板状电泳（图电泳（图2 2）盘状电泳通常是盘状电泳通常是不连续系统，不连续系统，利用缓冲液利用缓冲液离子成分、离子成分、pHpH、凝胶孔径进行电泳，带电、凝胶孔径进行电泳，带电颗粒电泳时具有颗粒电泳时具有电荷效应、分子筛效应、电荷效应、分子筛效应、 浓缩效应浓缩效应。聚丙烯酰胺凝胶电泳分类聚丙烯酰胺凝胶电泳分类图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图(A为正面,B为剖面)(1)样品

31、胶PH6.7 (2)浓缩胶PH6.7 (3)分离胶PH8.9 (4)电极缓冲液PH8.3图2 夹心垂直板电泳槽示意图 图3 凝胶模示意图1.导线接头 2.下贮槽 3.凹形橡胶框 4.样品槽模板 5.固定螺丝 6.上贮槽 7.冷凝系统 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） ：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS-PAGE测定蛋白质分子量。实验步骤实验步骤1.安装夹心式垂直板电泳槽 (1)装上贮槽和固定螺丝销钉，仰放在桌面上。(2)将长、短玻璃板分别插到凵形硅橡框的凹形槽中，注意勿用手接触灌胶面的玻璃。(3)将已插好玻璃板的凝胶模平放在上贮槽上，短玻璃板应面对上贮槽。(4)将下贮槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上贮槽，双手以对角线的方式旋紧螺丝帽。(5)竖直电泳槽，在长玻璃板下端与硅胶模框交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂(糖)。其目的是封住空隙，凝固后的琼脂(糖)中应避免有气泡。3. 制备凝胶板 将混合后的分离胶溶液，用细长头的滴管加至长、短玻璃板间的