乳与乳制品中乳糖的测定

1、中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准GB 5413.5GB 5413.520102010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定第一法第一法高效液相色谱法高效液相色谱法第二法第二法莱因莱因埃农氏法埃农氏法 试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝为指示剂，直接滴定已标定过的费林氏液，根据样液消为指示剂，直接滴定已标定过的费林氏液，根据样液消耗的体积，计算乳糖含量。耗的体积，计算乳糖含量。 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀；氢氧化铜沉淀；

2、这种沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠这种沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。铜络合物。 在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀；还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀； 这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；为滴定终

3、点； 根据样液消耗量可计算出还原糖含量。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。1.1.乙酸铅溶液（乙酸铅溶液（200 g/L200 g/L）：）：2.2.草酸钾草酸钾磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠溶液：3.3.费林氏液甲液：费林氏液甲液：4.4.费林氏液乙液：费林氏液乙液：5. 5. 次甲基蓝溶液（次甲基蓝溶液（10 g/L10 g/L）天平：感量为天平：感量为0.1 mg0.1 mg。烘箱烘箱：温度可控制在：温度可控制在2 2 。1.1.费林氏液的标定费林氏液的标定用乳糖标定用乳糖标定 称称取预先在取预先在94 94 2 2 烘箱中干燥烘箱中干燥2 h 2 h 的乳糖标样约的乳糖标样约0.75 g0

4、.75 g（精确到（精确到0.1 mg0.1 mg），用水），用水溶解并定容至溶解并定容至250 mL250 mL。将此乳糖溶液注入一个。将此乳糖溶液注入一个50 mL50 mL 滴定管中，待滴定滴定管中，待滴定。预滴定预滴定精确精确滴定滴定 吸取吸取10 mL10 mL 费林氏液费林氏液( (甲、乙液各甲、乙液各5 mL5 mL) )于于250 mL250 mL 三角烧瓶中。加入三角烧瓶中。加入20 mL20 mL 蒸馏水，放入几粒玻璃珠，从蒸馏水，放入几粒玻璃珠，从滴定管中放出滴定管中放出15 mL15 mL 样液于三角瓶，置于电炉上加热，样液于三角瓶，置于电炉上加热，使其在使其在2 mi

5、n 2 min 内沸腾，保持沸腾状态内沸腾，保持沸腾状态15 s15 s，加入，加入3 3 滴次滴次甲基蓝溶液，继续滴入至溶液蓝色完全褪尽为止，读取甲基蓝溶液，继续滴入至溶液蓝色完全褪尽为止，读取所用样液的体积。所用样液的体积。 另取另取10 mL10 mL 费林氏液（费林氏液（ 甲、乙液各甲、乙液各5 mL5 mL）于于250 mL250 mL 三角烧瓶中，再加入三角烧瓶中，再加入20 mL20 mL蒸馏水，放蒸馏水，放入几粒玻璃珠，加入比预滴定量少入几粒玻璃珠，加入比预滴定量少0.5 mL0.5 mL1.0 1.0 mLmL 的样液，置于电炉上，使其在的样液，置于电炉上，使其在2 min

6、2 min 内沸腾，内沸腾，维持沸腾状态维持沸腾状态2 min2 min，加入，加入3 3 滴次甲基蓝溶液，滴次甲基蓝溶液，以每两秒一滴的速度徐徐滴入，溶液蓝色完全褪以每两秒一滴的速度徐徐滴入，溶液蓝色完全褪尽即为终点，记录消耗的体积。尽即为终点，记录消耗的体积。计算费林氏液的计算费林氏液的乳乳糖校正值糖校正值mVmVA42501000ALmVf4式中式中：A A - -实测乳糖数，单位为毫克（实测乳糖数，单位为毫克（mgmg）；）；V V - -滴定时消耗乳糖溶液的体积，单位为毫升（滴定时消耗乳糖溶液的体积，单位为毫升（mLmL）；）；M M - -称取乳糖的质量，单位为克（称取乳糖的质量，

7、单位为克（g g）；）；f f - -费林氏液的乳糖校正值费林氏液的乳糖校正值；ALAL-由乳糖液滴定毫升数查表由乳糖液滴定毫升数查表1 1所得的乳糖数，单位为毫克（所得的乳糖数，单位为毫克（mgmg）。）。1 1 称取婴儿食品或脱脂粉称取婴儿食品或脱脂粉2 g2 g，全脂加糖粉或全脂粉全脂加糖粉或全脂粉2.5 g2.5 g，乳，乳清粉清粉1 g1 g，精确到，精确到0.1 mg0.1 mg，用，用100mL 100mL 水分数次溶解并洗入水分数次溶解并洗入250 250 mLmL 容量瓶中。容量瓶中。徐徐加入徐徐加入4 mL4 mL 乙酸铅溶液、乙酸铅溶液、4 4 mLmL 草酸钾草酸钾磷酸

8、氢二钠溶液，磷酸氢二钠溶液，并振荡容量瓶，用水稀释至刻度。并振荡容量瓶，用水稀释至刻度。静置数分钟，用干燥滤纸过滤，静置数分钟，用干燥滤纸过滤，弃去最初弃去最初25 mL25 mL 滤液后，所得滤滤液后，所得滤液作滴定用。液作滴定用。预滴定：预滴定：吸取吸取10 mL10 mL 费林氏液费林氏液( (甲、乙液各甲、乙液各5 mL5 mL) )于于250 mL250 mL 三角三角烧瓶中。加入烧瓶中。加入20 mL20 mL 蒸馏水，放入几粒玻璃珠，从滴定管中放蒸馏水，放入几粒玻璃珠，从滴定管中放出出15 mL15 mL 样液于三角瓶，置于电炉上加热，使其在样液于三角瓶，置于电炉上加热，使其在2

9、 min 2 min 内沸内沸腾，保持沸腾状态腾，保持沸腾状态15 s15 s，加入，加入3 3 滴次甲基蓝溶液，继续滴入至滴次甲基蓝溶液，继续滴入至溶 液 蓝 色 完 全 褪 尽 为 止 ， 读 取 所 用 样 液 的 体 积 。溶 液 蓝 色 完 全 褪 尽 为 止 ， 读 取 所 用 样 液 的 体 积 。精确滴定：精确滴定：另取另取10 mL10 mL 费林氏液（费林氏液（ 甲、乙液各甲、乙液各5 mL5 mL）于）于250 mL250 mL 三角烧瓶中，再加入三角烧瓶中，再加入20 mL20 mL蒸馏水，放入几粒玻璃珠，加入比预蒸馏水，放入几粒玻璃珠，加入比预滴定量少滴定量少0.5

10、mL0.5 mL1.0 mL1.0 mL 的样液，置于电炉上，使其在的样液，置于电炉上，使其在2 min 2 min 内沸腾，维持沸腾状态内沸腾，维持沸腾状态2 min2 min，加入，加入3 3 滴次甲基蓝溶液，以每两滴次甲基蓝溶液，以每两秒一滴的速度徐徐滴入，溶液蓝色完全褪尽即为终点，记录消秒一滴的速度徐徐滴入，溶液蓝色完全褪尽即为终点，记录消耗的体积。耗的体积。试样中乳糖的含量试样中乳糖的含量mVfFX110025. 0式中式中：X X - -试样中乳糖的质量分数，单位为克每百克（试样中乳糖的质量分数，单位为克每百克（g/100 gg/100 g）；）；f f -由消耗样液的毫升数查表由

11、消耗样液的毫升数查表1 1所得乳糖数，单位为毫克（所得乳糖数，单位为毫克（mgmg）；）；F F - -费林氏液乳糖校正值费林氏液乳糖校正值；V V1 1 - -滴定滴定消耗滤消耗滤样品液量样品液量，单位为毫升（单位为毫升（mLmL）；）；m m -试样的质量，单位为克（试样的质量，单位为克（g g）。）。1 1、在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中、在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入引入Cu 2+Cu 2+，得到错误的结果。，得到错误的结果。2 2、碱性酒石酸铜甲液、碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸时才混合，否则酒石酸钾钠

12、铜络合物长期在碱钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。剂有效浓度降低。3 3、滴定必须在沸腾条件下进行，、滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是可以加快还原糖与其原因一是可以加快还原糖与Cu2+Cu2+的反应速度；二是次甲基蓝的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入持反应液沸腾可防止空气进

13、入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量而增加耗糖量。4.4.滴定时不滴定时不能随意摇动能随意摇动锥形瓶，更锥形瓶，更不能把锥形不能把锥形瓶从热源上瓶从热源上取下来滴定，取下来滴定，以防止空气以防止空气进入反应溶进入反应溶液中。液中。5.5.样品溶液预测的目的；一是本法对样品溶液样品溶液预测的目的；一是本法对样品溶液中还原糖浓度有一定要求中还原糖浓度有一定要求(0.1%(0.1%左右左右) )，测定时，测定时样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测时消耗样液量在使预测时消耗样液量在 10 ml 10 ml 左右；左右；6.6.通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少定时，预先加入比实际用量少 1 ml 1 ml 左右的样液，左右的样液，只留下只留下 1 ml 1 ml 左右样液在续