沙门氏菌血清学鉴定

1、竭诚为您提供优质文档 /双击可除第 1 页共 13 页沙门氏菌血清学鉴定篇一：沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。 用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养 基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为 10:10:110:10:1，只能利用葡萄糖的细 菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的 少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物 质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌 氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的 细菌（e.colie.coli） ，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。

2、如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫 氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成 黑色的硫化亚铁沉淀。底层产酸：是因为细菌分解糖类物质 使酚红退色变黄。斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖（不能分解乳糖和蔗糖）, ,由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，24小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般8小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨 产碱，斜面又转为碱性。2-2-志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生 h2sh2s。4 4-大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解

3、乳糖，不产生 h2sh2s。3-3-沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生 h2sh2s，多数产气。赖氨酸脱羧酶试验1 1、 试验管及对照管均要加一层约10mm10mm 厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的 phph。2 2、阳性试验管培养初期（1010 12h12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。氨基酸脱羧酶试验（1 1）原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。（2 2）方法：将待检

4、菌分别接种于 1 1 支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶第 2 页共 13 页试验管和 1 1 支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至 少 0.5cm0.5cm 高度的无菌石蜡油，3535C孵育 1 14d4d,观察结果。（3 3） 结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为 阴性，对照管应为黄色。（4 4）应用：主要用于某些细菌种间 的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌 （阳性）与阴沟肠杆菌（阴 性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。精氨酸双水解酶试验（1 1）原理：精氨酸经两次水解后，生 成鸟氨酸、氨及二氧化

5、碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成 腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示 剂指示出来。（2 2）方法：将待检菌接种于试验培养上，置 3535C孵箱孵育 14d14d，观察结果。（3 3）结果：溴甲酚紫指示剂呈紫 色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。（4 4）应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。表 2 2进行判定。反应 3 3:补做 onpgonpg。onpgonpg 为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性；赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。必要时按表 4 4 进行沙门氏菌生活群

6、的鉴别篇二：沙门氏菌属诊断血清说明书第 3 页共 13 页 沙门氏菌属诊断血清学试验操作程序1.1. 目的制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。2.2. 原理用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成， 通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。3.3. 试剂及实验设备3.13.1 沙门氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为 1111 种的沙门氏菌属诊断血清3.23.2 试剂保存：2 28 8 c c 避光保存，防止冻结，在有效期内使用。3.33.3 实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血

7、平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。4.4. 程序步骤4.14.1 将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。4.24.2 选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。4.34.3 菌群分析将经 1824h1824h 血平板上纯培养的待检菌， 先用 o o 多价 AFAF第 4 页共 13 页第 5 页共 13 页群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A AF F 群范围内，因 97%97%以上的沙门菌都包括在 AF6AF6 个 o o 群之内，如 果不凝再使用其他o o 抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗 血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。若与多价o o 抗血清不凝集，有如下 3 3 种

8、可能：含有 ViVi 抗原；AFoAFo 群之外的 沙门菌；沙门氏菌属以外的细菌。可按下述方法进一步检 测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2 2份。1 1 份不经处理，为活菌液，另 1 1 份放 100100 c c 水浴中 30min30min， 为加热菌液。取活菌与 ViVi 抗血清，取加热菌与 ViVi 抗血清凝 集，加热菌与 ViVi 抗血清、AAF F多价 o o 抗血清分别进行玻片凝 集试验。根据结果作如下分析：活菌与V Vi i抗血清凝集，加热菌与 ViVi 抗血清凝集者，可能属于 c c 群或 D D 群菌，用。7 7 和 o9o9 抗血清定群；活菌与 ViVi 抗血清不凝，可能属于 A AFoFo 群之外的沙门菌或其他菌属细菌，需进行生化试验定属，若符合沙门氏菌属细 菌特征，可送 cDcDc c鉴定；加热菌与 ViVi 抗血清凝集，而与 AFAF 多价 o o 抗血清不凝集者，可报告为阴性。4