生化分析案例

1、CompanyLOGOISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座常常见生化检测误差案例见生化检测误差案例分析分析牛广华牛广华辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例分类案例分类一一全自动生化仪的参数设置问题全自动生化仪的参数设置问题二二全自动生化仪的校准问题全自动生化仪的校准问题三三全自动生化仪的质控问题全自动生化仪的质控问题四四全自动生化仪的试剂问题全自动生化仪的试剂问题五五全自动生化仪水供系统水质问题全自动生化仪水供系统水质问题六六全自动生化仪的维护和保养问题全自动生化仪的维护和保养问题七七标本质量对生化结果的影响标本质量对生化结果的影响八

2、八报告前结果的审查报告前结果的审查ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例一案例一全自动生化仪的参数设置问题全自动生化仪的参数设置问题ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现一、现象：一、现象：某医院某医院操作人员发现：操作人员发现：DBILDBIL测定临床标本出现负数较测定临床标本出现负数较多（仪器：日立多（仪器：日立70607060）。）。试剂参数为：试剂参

3、数为：主波长：主波长：450nm450nm；副波长：；副波长：546nm546nm；S=7ulS=7ul；R1=196ulR1=196ul；R2=49ulR2=49ul；分析方法：分析方法：2 Point End2 Point End；测光点为测光点为1616、3131。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现二、了解情况：二、了解情况：到该院后查看校准结果：到该院后查看校准结果：S1ABSS1ABS：-48-48，K K因数：因数：-6215-621

4、5。从校准数据看，校准结果正常。从校准数据看，校准结果正常。随后查看当天临床标本反应曲线，发现曲线不光滑，有随后查看当天临床标本反应曲线，发现曲线不光滑，有跳点出现，跳点出现，初步初步怀疑为比色杯不干净或光源不稳定造成对该怀疑为比色杯不干净或光源不稳定造成对该项目的干扰项目的干扰。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现三、处理三、处理：1.1. 对仪器进行日常维护，通过杯空白及光度计检查，确认对仪器进行日常维护，通过杯空白及光度计检查，确认仪器性能符

5、合实验要求后，取仪器性能符合实验要求后，取2 2例临床标本分别重复测定例临床标本分别重复测定1010次，结果为：次，结果为：从数据看，仍有负值出现且重复性很差，故排除仪器影从数据看，仍有负值出现且重复性很差，故排除仪器影响因素。响因素。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心12345678910XSDCV%临1-2.31.32.5-1.51.52.32.42.11.22.51.21.72 142.9%临22.83.53.92.14.81.92.53.62.82.53.04 0.90 2 9 . 5%DBI

6、L测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现2.2. 随后再一次核对参数设置情况，发现随后再一次核对参数设置情况，发现R1R1试剂量试剂量+ +样本量为样本量为203 ul203 ul，而日立，而日立70607060仪器要求的最小反应量为仪器要求的最小反应量为250ul250ul，所，所以怀疑测定结果的不好可能与试剂量设置太小有关。以怀疑测定结果的不好可能与试剂量设置太小有关。3.3. 故修改参数为：故修改参数为：S=10ulS=10ul，R1=280ulR1=280ul，R2=70ulR2=70ul，其他参数，其他参数不变，重新校准，校准结果为：不变，重新校准，校准结果为：S1ABSS

7、1ABS：-50-50，K K因数：因数：- -63886388。4.4. 取以上取以上2 2例临床标本分别重复测定例临床标本分别重复测定1010次，结果如下次，结果如下：ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心12345678910XSDCV%临12.52.42.32.52.42.52.42.42.52.42.43 0.067 2 . 7 8%临23.13.23.33.33.33.23.33.23.23.33.24 0.070 2 . 1 6%DBIL测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现5.5

8、. 从数据看，从数据看，2 2例标本重复性都较好且无负值出现。在第二例标本重复性都较好且无负值出现。在第二天观察的天观察的4040例标本测定情况看，结果均符合临床要求。例标本测定情况看，结果均符合临床要求。四、分析四、分析：由由此分析造成此分析造成DBILDBIL测定结果不理想的原因为：样本与试测定结果不理想的原因为：样本与试剂的反应体积设置太小。剂的反应体积设置太小。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现五、总结五、总结：1.1. 最小反应体积是指

9、在仪器光度读数要用于结果计算时，最小反应体积是指在仪器光度读数要用于结果计算时，反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。它保证反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。它保证仪器的正确读数和计算，也是仪器测定精度和经济性的仪器的正确读数和计算，也是仪器测定精度和经济性的指针之一。指针之一。2.2. 在单试剂终点法或速率法项目测定时，样品与试剂的总在单试剂终点法或速率法项目测定时，样品与试剂的总体积不得少于此参数。体积不得少于此参数。3.3. 在双试剂终点法测定时，若在加在双试剂终点法测定时，若在加R2R2之前读数，则之前读数，则样品与样品与R1R1的总体积的总体积不得少于该参数。不得少于该参

10、数。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座DBIL测定精密度差且有负值出现测定精密度差且有负值出现4.4. 本案例中，本案例中，DBILDBIL由于要扣除样品空白，故在加入由于要扣除样品空白，故在加入R2R2试剂试剂前要读一次吸光度。而日立前要读一次吸光度。而日立70607060仪器的总反应量要求不仪器的总反应量要求不得

11、小于得小于250ul250ul，但是该案例中，但是该案例中R1R1试剂量试剂量+ +样品量设置却为样品量设置却为203ul203ul，远远小于仪器要求的最小反应量，使光路不能完，远远小于仪器要求的最小反应量，使光路不能完全通过反应液面，导致测定吸光度不稳定，出现跳点，全通过反应液面，导致测定吸光度不稳定，出现跳点，从而影响结果，造成重复性差甚至负值出现。从而影响结果，造成重复性差甚至负值出现。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例二案例二全自动生化仪的全自动生化仪的校准校准问题问题ISO15189实验

12、室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过一、现象：一、现象：某医院反映某医院反映某品牌某品牌HCYHCY试剂（仪器：雅培试剂（仪器：雅培 C8000 C8000），校），校准无法通过，出现准无法通过，出现“校准失败校准失败”的报警。的报警。试剂参数为：试剂参数为：Primary wavelengthPrimary wavelength：340nm340nm； Secondary wavelengthSecondary wavelength：700nm700nm； M

13、ain read time Main read time：31-3331-33； Blank read time Blank read time：26-2826-28； Sample volume Sample volume：10ul10ul； R1 reagent volume R1 reagent volume：185ul185ul； R2 reagent volume R2 reagent volume：50ul50ul； Calibration method Calibration method：SplineSpline； 校准品个数设置：校准品个数设置：3 3； 浓度分别设置为：浓度

14、分别设置为：0 0、1010、33umol/L33umol/L。 ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过二、了解情况：二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定，分别为：器上已做出测定，分别为：0 0：-0.0027 10-0.0027 10：-0.0344 -0.0344 3333：-0.0738-0.0738，但参与最终结果计算的，但参与最终结果计算的Cal F

15、actorCal Factor（校准因（校准因数）却显示为数）却显示为0 0，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现曲线拟合，故出现“校准失败校准失败”报警。报警。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过三、处理三、处理：1.1. 分别对分别对10umol/L10umol/L、33umol/L33umol/L的校准品进行对倍稀释，得的校准品进行对倍稀释，得到到5umol/L5umol/L、16.

16、5umol/L16.5umol/L浓度的校准品浓度的校准品；2.2. 把参数中校准品个数修改为：把参数中校准品个数修改为：5 5；3.3. 浓度设置修改为浓度设置修改为0 0、5 5、1010、16.516.5、33umol/L33umol/L。4.4. 仍采用仍采用SplineSpline定标模式重新进行校准，后校准顺利通过定标模式重新进行校准，后校准顺利通过，结果如下：，结果如下：ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心0umol/L5umol/L10umol/L16.5umol/L33umol/LCa

17、lFactor-87.2-213.5-279.6-365.3吸光度-0.0032-0.0195-0.0366-0.0558-0.0744Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过5.5. 从校准结果看，符合实验要求，因此该院所反映校准无从校准结果看，符合实验要求，因此该院所反映校准无法通过的问题得以解决。随后进行质控测定，结果如下法通过的问题得以解决。随后进行质控测定，结果如下：6. 从以上数据看，两个水平浓度的质控所测得结果均在规从以上数据看，两个水平浓度的质控所测得结果均在规定的允许误差范围内，符合实验要求。定的允许误差范围内，符合实验要求。ISO15189实验室认可系

18、列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心HCY质控测定值标示值范围水平17.37.05.9-8.1水平233.029.024.6-33.4Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过四、分析四、分析：1. 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。原理选择合适的校准模式。2. 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模式校准通常情况下，常规的生化

19、项目我们会选择线性模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。3. 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可校准即可。4. 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点校准。点校准。5. 不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。不同的。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy

20、在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过例如：例如： 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合；即可进行非线性拟合； 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。才进行非线性拟合。 此次所用的雅培此次所用的雅培 C8000 C8000仪器，在第一次校准时，采用的仪器，在第一次校准时，采用的是三点非线性校准，该仪器不支持计算，出现是三点非线性校准，该仪器不支持计算，出现“校准失校准失败败”的报警。后采用五点非线性校准，校准通过。的报警。后

21、采用五点非线性校准，校准通过。 因此，说明该仪器的性能应与贝克曼、东芝等仪器一致因此，说明该仪器的性能应与贝克曼、东芝等仪器一致，在进行非线性校准时，校准品的个数不得少于四个。，在进行非线性校准时，校准品的个数不得少于四个。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过五、总结五、总结： 我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校准模式外我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合要求的校准品个数，还要根据该仪器的

22、性能特点，选择符合要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。，以保证实验的顺利进行。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过在全自动生化仪上校准不能通过非线性校准非线性校准模式包括：模式包括：1.1. logitlogit(3p)(3p)、logitlogit(4p) ,(4p) ,logitlogit(5p)(5p)校准模式：校准模式： 非线性校准类型：抛物线型非线性校准类型：抛物线型( (图图12-36)12-36)，则多考虑用，则多考虑用logiclogic方法拟合方法

23、拟合，选择，选择logitlogit(3p)(3p)或或logitlogit(4p)(4p)和和logitlogit(5p)(5p)。2.2. SplainSplain校准模式校准模式 SplainSplain也称样条函数，在曲线类型不确定时，或也称样条函数，在曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图校准曲线类型如图12-3712-37所示的所示的S S型非线性校准类型，则多考虑型非线性校准类型，则多考虑SplainSplain方法拟合。方法拟合。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例三案例三全自动生化仪

24、的全自动生化仪的质控问题质控问题ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析一、现象：一、现象：某某医院医院操作人员操作人员反映使用反映使用某某公司的检测试剂盒，有些公司的检测试剂盒，有些项目如项目如TPTP、AlbAlb等做室内质控测定时，结果高低不定，有失等做室内质控测定时，结果高低不定，有失控现象，检测仪器为日立控现象，检测仪器为日立7170A7170A。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽

25、宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析二、了解情况：二、了解情况：经了解其实际情况为使用某公司进口干粉质控品，质经了解其实际情况为使用某公司进口干粉质控品，质控品复溶后分装成数支冰冻保存，无反复冻融或过效期使用控品复溶后分装成数支冰冻保存，无反复冻融或过效期使用现象，仪器维护良好，但现象，仪器维护良好，但IQCIQC经常失控，常常出现某天大部经常失控，常常出现某天大部分项目系统偏低、而次日又正常或系统偏高。分项目系统偏低、而次日又正常或系统偏高。 综合上述失控可能原因和客户实际情况，分析该综合上述失控可能原因和客户实际情况，分析该实验室实验室

26、IQCIQC失控原因可能为质控品临用前准备不充分。失控原因可能为质控品临用前准备不充分。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析三、处理三、处理：1.1. 建议准确复溶质控品，复溶混匀至少建议准确复溶质控品，复溶混匀至少3030分钟后再将其分分钟后再将其分装成数小支，并在说明书规定的复溶后稳定期内使用。装成数小支，并在说明书规定的复溶后稳定期内使用。2.2. 每次做每次做IQCIQC测定前，从冰箱中取出一小支室温放置解冻和测定前，从冰箱中取出一小支室温

27、放置解冻和混匀混匀3030分钟左右，然后再进行测定，使用后剩余部分密分钟左右，然后再进行测定，使用后剩余部分密闭避光置闭避光置2 28 8当天使用或按说明书规定的稳定期内使当天使用或按说明书规定的稳定期内使用，切忌反复冻融使用。用，切忌反复冻融使用。3.3. 几天后回访，反映近几日观察，大部分项目天间精密度几天后回访，反映近几日观察，大部分项目天间精密度明显好转，明显好转，IQCIQC未出现失控现象。未出现失控现象。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差

28、分析四、分析四、分析：就就IQCIQC的标本准备工作进行一些实验，实验情况大致如的标本准备工作进行一些实验，实验情况大致如下：下：1.1. 分别取新鲜临床标本分别取新鲜临床标本1 1、临床标本、临床标本2 2、伯乐伯乐公司液体生化公司液体生化质控品、英国朗道干粉质控品复溶后各质控品、英国朗道干粉质控品复溶后各2mL2mL装入康氏试管装入康氏试管中，并即时进行密闭避光冰冻保存中，并即时进行密闭避光冰冻保存；2.2. 次日取出室温静置解冻，次日取出室温静置解冻，5 5分钟分钟后分别吸取上中下后分别吸取上中下层层三份三份液体各液体各300300微升，再分别充分混匀并同时进行微升，再分别充分混匀并同时

29、进行TPTP、ALBALB等等2020余个生化项目检测。余个生化项目检测。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析3.3. 结果发现临床标本外观透明度呈明显的梯度变化，上层结果发现临床标本外观透明度呈明显的梯度变化，上层清亮、底层混浊，干粉质控品透明度也有一定的梯度变清亮、底层混浊，干粉质控品透明度也有一定的梯度变化，液体生化质控品由于其在化，液体生化质控品由于其在-15-15-20-20仍保持液态而仍保持液态而没有改变出现外观分层现象，其不同层面液体

30、检测结果没有改变出现外观分层现象，其不同层面液体检测结果见附表。见附表。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP29.763.7137.2 23.471.9154.3 66.066.066.039.258.899.3Alb21.545.375.815.945.481.344.444.344.126.738.459.5TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析4.4. 从表中可看出临床标本和干粉质控品静态解冻后不同层从表中可看出临床标本和干粉质控品静态解冻后不同层面液体检测结果差距甚大，而液

31、体生化质控品无明显差面液体检测结果差距甚大，而液体生化质控品无明显差异。异。5.5. 分析产生上述结果的可能原因蛋白质冰点低（白蛋白崩分析产生上述结果的可能原因蛋白质冰点低（白蛋白崩解温度为解温度为-10-10左右），先解冻，未解冻冰块由于密度低左右），先解冻，未解冻冰块由于密度低而始终浮于液面，因此导致蛋白质聚集底部，从而导致而始终浮于液面，因此导致蛋白质聚集底部，从而导致外观自上而下逐渐变混浊，进而导致底部蛋白质浓度、外观自上而下逐渐变混浊，进而导致底部蛋白质浓度、酶类活性明显偏高。酶类活性明显偏高。6.6. 综上案例情况和研究结果，得出结论冰冻质控品或不能综上案例情况和研究结果，得出结论

32、冰冻质控品或不能及时测定的临床标本再经冰冻保存后，测定前应充分解及时测定的临床标本再经冰冻保存后，测定前应充分解冻和混匀，否则测定结果不理想冻和混匀，否则测定结果不理想。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析五、总结五、总结：室内质量控制（室内质量控制（IQC Internal IQC Internal QualitiQualiti Control Control）旨在监测和控制本室常规工作的精密度，并检测其准确度的旨在监测和控制本室常规工作的精密度

33、，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中批间和日间标本检测的一致性。改变，提高本室常规工作中批间和日间标本检测的一致性。引起室内质控失控的原因众多，常见原因有：引起室内质控失控的原因众多，常见原因有：ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析1.1. 质控品的种类：质控品应尽量选用项目多、效期长、项质控品的种类：质控品应尽量选用项目多、效期长、项目稳定、均一性好、瓶间差异小的液体质控品，干粉质目稳定、均一性好、瓶间差异小的液体质控品，干粉质控品往往由于

34、冻干工艺、复溶液质量及加量准确度、干控品往往由于冻干工艺、复溶液质量及加量准确度、干粉流失、复溶后的保存等等原因而导致结果可能不理想粉流失、复溶后的保存等等原因而导致结果可能不理想。2.2. 质控品临用前准备工作：干粉质控品如果解冻混匀不充质控品临用前准备工作：干粉质控品如果解冻混匀不充分，其液面自上而下将会明显呈现颜色由浅而深、浊度分，其液面自上而下将会明显呈现颜色由浅而深、浊度逐渐加深现象，上中下层各种物质含量会有明显差异，逐渐加深现象，上中下层各种物质含量会有明显差异，进而导致进而导致IQCIQC失控。失控。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医

35、院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析3.3. 仪器运行状态：仪器光源灯老化、加样系统异常、日维仪器运行状态：仪器光源灯老化、加样系统异常、日维护工作不到位或仪器经检修（更换光源灯、反应杯等零护工作不到位或仪器经检修（更换光源灯、反应杯等零部件）后未重新进行杯空白等维护工作，从而前后几天部件）后未重新进行杯空白等维护工作，从而前后几天测定结果差异大，测定结果差异大，IQCIQC失控。失控。4.4. 仪器用水质量改变：仪器加样系统、反应杯等在经指定仪器用水质量改变：仪器加样系统、反应杯等在经指定的酸性或碱性清洗济泡洗后需要用大量水

36、来进行水清洗的酸性或碱性清洗济泡洗后需要用大量水来进行水清洗以防交叉污染，仪器用水一般为去离子水或蒸馏水，并以防交叉污染，仪器用水一般为去离子水或蒸馏水，并对其对其pHpH值、电导率等理化性质有一定要求。如果水质不值、电导率等理化性质有一定要求。如果水质不好，将会对好，将会对Ca2+Ca2+等一些检测项目产生不可预计的影响。等一些检测项目产生不可预计的影响。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析试剂作室内质控较差分析5.5. 试剂盒因素：试剂过效期或常有将试剂合并使用（将

37、同试剂盒因素：试剂过效期或常有将试剂合并使用（将同批号或不同批号新试剂倒入旧试剂瓶中，甚至将新试剂批号或不同批号新试剂倒入旧试剂瓶中，甚至将新试剂倒入快过期试剂中）现象，此操作往往使结果无法预计倒入快过期试剂中）现象，此操作往往使结果无法预计。6.6. 校准因素：每一种试剂都会有保质期限和开瓶稳定性，校准因素：每一种试剂都会有保质期限和开瓶稳定性，随着与空气的接触其随着与空气的接触其pHpH等理化性质将会不断变化，因此等理化性质将会不断变化，因此经常校准和尽量减少试剂敞开时间非常必要。如果试剂经常校准和尽量减少试剂敞开时间非常必要。如果试剂开瓶使用后长时间未进行校准或更换新试剂后未进行即开瓶使

38、用后长时间未进行校准或更换新试剂后未进行即时校准，则检测结果可能异常。时校准，则检测结果可能异常。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例四案例四全自动生化仪的全自动生化仪的试剂试剂问题问题ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析一、现象：一、现象： 某院某院生化室生化室反映反映TBATBA试剂测定临床标本出现负值较多（试剂测定临床标本出

39、现负值较多（仪器：仪器：AU640AU640）。试剂参数为：）。试剂参数为：S=3ulS=3ul，R1=202ulR1=202ul，R2=67ulR2=67ul，测光点为，测光点为14-2014-20。二、了解情况：二、了解情况：1.1. 到该院后查看校准结果：空白速率：到该院后查看校准结果：空白速率：0.01530.0153，试剂空白，试剂空白：0.23260.2326。2.2. 根据以上数据分析，出现负值主要是试剂空白速率较大根据以上数据分析，出现负值主要是试剂空白速率较大导致的。导致的。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医

40、药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析三、处理三、处理：1.1. 查看不同时间校准结果查看不同时间校准结果, ,试剂空白速率有时为试剂空白速率有时为0.00530.0053，有有时空白速率为时空白速率为0.01590.0159。2.2. 先单独对先单独对TBATBA进行校准，三次试剂空白速率分别为：进行校准，三次试剂空白速率分别为：0.00530.0053、0.00500.0050、0.00520.0052。3.3. 后采取后采取TBATBA与其他项目一起作校准，试剂空白速率分别为与其他项目一起作校准，试剂空白速率分别为0.0

41、1570.0157、0.00860.0086、0.01350.0135。4.4. 三次校准结果重复性差，且与单独校准时的空白速率差三次校准结果重复性差，且与单独校准时的空白速率差异非常大，采用此校准结果测定几例临床标本，发现异非常大，采用此校准结果测定几例临床标本，发现TBATBA有负值出现。有负值出现。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析5.5. 最后再单独作最后再单独作TBATBA校准，试剂空白速率分别为校准，试剂空白速

42、率分别为0.00540.0054、0.00560.0056、0.00530.0053，从校准结果上看，此次校准与第一次，从校准结果上看，此次校准与第一次校准结果相差不大。校准结果相差不大。6.6. 随后采用此次校准测定临床标本，其测定结果无负值出随后采用此次校准测定临床标本，其测定结果无负值出现。由此可看出现。由此可看出TBATBA出现负值的主要原因是空白速率过大出现负值的主要原因是空白速率过大。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现

43、负值分析四、分析四、分析：1.1. 从单独校准从单独校准TBATBA，其空白速率正常而当，其空白速率正常而当TBATBA与其他项目共与其他项目共同作空白校准时其空白速率偏高的现象可说明造成空白同作空白校准时其空白速率偏高的现象可说明造成空白速率过大的原因是由于试剂针携带污染造成。速率过大的原因是由于试剂针携带污染造成。2.2. 由于该院试剂使用厂家较多，无法通过试剂项目直接分由于该院试剂使用厂家较多，无法通过试剂项目直接分析什么项目对析什么项目对TBATBA有影响，故根据各项目反应原理不同来有影响，故根据各项目反应原理不同来与与TBATBA试剂组合进行空白校准，各种组合及试剂组合进行空白校准，

44、各种组合及TBATBA校准后空校准后空白速率如下：白速率如下：ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析3.3. 通过以上组合项目校准排查，发现通过以上组合项目校准排查，发现CHOCHO、TGTG试剂对试剂对TBATBA有有污染，发生污染为试剂针携带引起。通过查阅相关文献污染，发生污染为试剂针携带引起。通过查阅相关文献，发现，发现CHOCHO、TGTG对对TBATBA造成严重的干扰是因为造成严重的干扰是因为CHOCHO、TGTG试

45、剂试剂中通常添加有大量的胆酸钠，由于胆酸钠结构与中通常添加有大量的胆酸钠，由于胆酸钠结构与TBATBA相似相似，故会参与，故会参与TBATBA反应，造成空白速率偏高。反应，造成空白速率偏高。TBATBA检测时，检测时，不能放于不能放于CHOCHO、TGTG试剂后，尽量远离试剂后，尽量远离CHOCHO、TGTG项目，否则项目，否则会造成会造成TBATBA测定结果异常。测定结果异常。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析五、总结五

46、、总结：（一）（一）试剂化学成分污染的途径可分为：试剂化学成分污染的途径可分为：1.1. 试剂成分的直接污染：试剂成分的直接污染：上一个测定试剂中含有下一个测上一个测定试剂中含有下一个测试所要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如试所要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如： 淀粉酶（淀粉酶（AMYAMY）试剂中含有较高浓度的）试剂中含有较高浓度的钙（钙（CaCa 2+ 2+ ）。对。对CaCa 2+ 2+的测定结果造成干扰；的测定结果造成干扰； 碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALPALP）（）（IFCCIFCC法）、肌酸激酶（法）、肌酸激酶（CKCK）（）（NACNAC法）、肌酸激酶法）、

47、肌酸激酶-MB-MB（CK-MBCK-MB）（）（NACNAC法）、二氧化碳（法）、二氧化碳（CO2CO2） （PEPCPEPC法）、法）、AMYAMY（EPSEPS法）、三酰甘油（法）、三酰甘油（TGTG）等）等试剂中含有试剂中含有镁（镁（Mg 2+Mg 2+）。对。对Mg 2+Mg 2+的测定结果造成干扰的测定结果造成干扰；ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析 葡萄糖（葡萄糖（GLUGLU）（氧化酶法）、总蛋白）（氧化酶

48、法）、总蛋白 （TPTP）与酸性磷）与酸性磷酸酶（酸酶（ACPACP）试剂中含有较高浓度的）试剂中含有较高浓度的钾（钾（K + K + ）。对对K +K +的测定结果造成干扰；的测定结果造成干扰； 胆碱酯酶（胆碱酯酶（ChEChE）、总胆固醇（）、总胆固醇（CHOLCHOL）、）、GLUGLU（GODGOD法）、法）、尿酸（尿酸（UAUA）（尿酸酶法）、乳酸脱氢酶（）（尿酸酶法）、乳酸脱氢酶（LDLD）（）（IFCCIFCC法法）、羟丁酸脱氢酶）、羟丁酸脱氢酶 （HBDHHBDH）（）（DGKCDGKC法）等试剂中含有法）等试剂中含有磷磷酸缓冲液酸缓冲液。对对磷（磷（P P）的测定结果造成干扰

49、；的测定结果造成干扰；ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析 CHOLCHOL、TGTG试剂及高密度脂蛋白胆固醇（试剂及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-CHDL-C）试剂中含）试剂中含有有胆酸钠胆酸钠。对对总胆汁酸（总胆汁酸（TBATBA）的测定结果造成干扰；的测定结果造成干扰； 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶 （ALTALT）（）（IFCCIFCC法）、天冬氨酸氨基法）、天冬氨酸氨基转移酶（转移酶（ASTAST）（）（IFCC

50、IFCC法）试剂中含有高活性的法）试剂中含有高活性的LDLD。对对LDLD的测定结果造成干扰；的测定结果造成干扰；ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析2.2. 试剂成分参与反应：试剂成分参与反应：上一个试剂中含有的某种试剂成分上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如：的测定结果。如： Mg 2+Mg 2+测定试剂的络合剂亦能与

51、铁（测定试剂的络合剂亦能与铁（FeFe）结合，影响铁与）结合，影响铁与铁络合剂的结合；铁络合剂的结合； 直接胆红素（直接胆红素（DBilDBil）（重氮法）试剂含有）（重氮法）试剂含有EDTAEDTA，Mg 2+Mg 2+试试剂中含有剂中含有 EDTA EDTA，均能与，均能与CaCa结合，从而影响结合，从而影响CaCa的测定；的测定； 以甘油作为酶保护剂的试剂，会对以甘油作为酶保护剂的试剂，会对TGTG的测定带来干扰；的测定带来干扰； 钙（钙（MTBMTB法）试剂对法）试剂对K+K+有负干扰；有负干扰；ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验

52、中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析3.3. 反应进程相同：反应进程相同：上一个试剂所引导的反应对下一个项目上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：两个项目反应的综合作用结果。如： 当上一反应产物为当上一反应产物为H2O2H2O2时，则对以时，则对以TrinderTrinder反应产生颜色反应产生颜色的测定结果引起干扰，如的测定结果引起干扰，如UAUA对对CHOLCHOL结果的影响，结果的影响

53、，CHOLCHOL对对肌酐（肌酐（CREACREA）（酶法）测定结果的影响，）（酶法）测定结果的影响，GLUGLU（氧化酶法（氧化酶法）对）对CREACREA测定结果的影响；测定结果的影响； CKCK（NACNAC法）、法）、CK-MBCK-MB（NACNAC法）试剂中含有法）试剂中含有GLUGLU成分，其成分，其分析方法的原理中包含分析方法的原理中包含GLUGLU的己糖激酶（的己糖激酶（HKHK）反应过程，）反应过程，因此可能对因此可能对GLUGLU的测定带来干扰，尤其对的测定带来干扰，尤其对GLUGLU的的HKHK法测定法测定可能带来严重干扰。可能带来严重干扰。ISO15189实验室认可系

54、列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析4.4. 影响反应条件：影响反应条件：如上一试剂缓冲液成分改变了下一反应如上一试剂缓冲液成分改变了下一反应的的pHpH环境，从而改变反应速率，如环境，从而改变反应速率，如： TPTP（双缩脲法）测定需在（双缩脲法）测定需在pH8pH89 9时，蛋白肽键才都能与时，蛋白肽键才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，若碱性铜溶液作用生成紫色反应，若pHpH8 8时，则会导致时，则会导致TPTP结果偏低，还直接影响球蛋白、白蛋白

55、结果偏低，还直接影响球蛋白、白蛋白/ / 球蛋白的结果球蛋白的结果； 酶活性测定有最适酶活性测定有最适pHpH，大多数酶反应，大多数酶反应pHpH在在6.06.07.57.5之间之间，ALPALP、-GT-GT、LDHLDH则在碱性条件下最适宜；则在碱性条件下最适宜；ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TBA试剂在试剂在AU640仪器上检测标本出现负值分析仪器上检测标本出现负值分析 CREACREA（苦味酸速率法）（苦味酸速率法） 反应条件为碱性，果糖胺（动力反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为

56、酸性，受到污染后反应速率会减慢。学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。 CREACREA（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化还原反应的进程，还原反应的进程， 会对会对TBATBA（酶循环法）测定结果有影（酶循环法）测定结果有影响。响。 DBilDBil（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响盐缓冲液会影响ALTALT活性，对测定结果有负干扰。活性，对测定结果有负干扰。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大

57、学附属医院临床检验中心如何判别试剂间存在化学污染？如何判别试剂间存在化学污染？（二）（二）如何判别试剂间存在化学污染？如何判别试剂间存在化学污染？ 一般可以以下试验及步骤来加以判别：一般可以以下试验及步骤来加以判别：1.1. 追溯可疑检测项目的反应杯序号，在这之前该反应杯做追溯可疑检测项目的反应杯序号，在这之前该反应杯做的是什么项目的检测，以此来初步估计是什么反应或什的是什么项目的检测，以此来初步估计是什么反应或什么物质对后项目检测产生干扰；初步确定后可选择同类么物质对后项目检测产生干扰；初步确定后可选择同类反应，有针对性地实施交叉污染试验加以验证，并寻找反应，有针对性地实施交叉污染试验加以验

58、证，并寻找方法避开此污染。如加做清洗，更换试剂顺序，甚至更方法避开此污染。如加做清洗，更换试剂顺序，甚至更换检测试剂或方法。换检测试剂或方法。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心如何判别试剂间存在化学污染？如何判别试剂间存在化学污染？2.2. 将某一试剂作为样本进行全套项目测定，观察各项生化将某一试剂作为样本进行全套项目测定，观察各项生化结果的情况，结果的情况， 进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。扰的项目。3.3. 1 1份样品分成份样品分成2 2份，份，

59、1 1份加生理盐水或其他适当的稀释液，份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的某试剂，同时测定，观察结果另一份加等量的某试剂，同时测定，观察结果 的变化，的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。4.4. 试剂交叉污染实验。试剂交叉污染实验。ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心如何消除试剂间的化学污染？如何消除试剂间的化学污染？（三）（三）如何消除试剂间的化学污染？如何消除试剂间的化学污染？ 要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要

60、要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑，合理设了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑，合理设计程序。更换试剂时，应仔细研究说明书，发现和避免可能计程序。更换试剂时，应仔细研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污染。存在的试剂交叉污染。 为减少试剂间的化学污染，应定期对仪器进行适当的保为减少试剂间的化学污染，应定期对仪器进行适当的保养，如更换管道，用去污剂、酸性洗液清洗比色杯，用养，如更换管道，用去污剂、酸性洗液清洗比色杯，用去污剂擦清试剂针，用无水乙醇擦洗搅拌棒等。去污剂擦清试剂针，用无水乙醇擦洗搅拌棒等。 合理安排检测项目的顺序：