生化实验03斐林试剂比色法测还原糖含量ppt课件

1、Designed by XK Wang 实验实验03 植物组织中复原糖含量的测定植物组织中复原糖含量的测定 斐林试剂比色法斐林试剂比色法Designed by XK Wang Designed by XK Wang 资料：新颖植物叶片资料：新颖植物叶片 仪器设备：分光光度计、分析天平、低速离心机、水浴锅等仪器设备：分光光度计、分析天平、低速离心机、水浴锅等 试剂：试剂：1. 斐林试剂斐林试剂A液：液：40g CuSO45H2O溶解于蒸馏水定容至溶解于蒸馏水定容至1.0L。2. 斐林试剂斐林试剂B液：液：200g酒石酸钾钠酒石酸钾钠KNaC4H4O65H2O与与150g NaOH溶于蒸馏水中，并

2、定容至溶于蒸馏水中，并定容至1.0L。 A、B两液分别储存，运用前按两液分别储存，运用前按1：1体积混合。体积混合。 已配好已配好Designed by XK Wang 0.1葡萄糖规范液 烘干的纯葡萄糖100.00mg，加蒸馏水溶解定容至100ml 浓度：1.00 mg / ml 已配好斐林试剂斐林试剂蓝色蓝色Cu2O 砖红色砖红色不溶于水不溶于水Designed by XK Wang 三、实验方法与步骤1. 规范曲线的制造 取5支试管编号，按下表分别参与各试剂。项目123451.1.标准葡萄糖液（标准葡萄糖液（mlml）0.000.002.002.004.004.006.006.00样品液

3、样品液 6 ml6 ml2.H2.H2 2O(ml)O(ml)6.006.004.004.002.002.000.000.000.000.00每管葡萄糖含量每管葡萄糖含量(mg)(mg)0.000.002.002.004.004.006.006.00 待测待测3.3.斐林试剂量斐林试剂量(ml)(ml)4.004.004.004.004.004.004.004.004.004.00 A A590590值值A1A1A2A2A3A3A4A4A5A5 吸光值差值吸光值差值( (AA590590 ) )A1-A1A1-A1A1-A2A1-A2A1-A3A1-A3A1-A4A1-A4A1-A5A1-A5

4、Designed by XK Wang 处置方法：处置方法： 加斐林试剂后摇匀，加盖加斐林试剂后摇匀，加盖 沸水浴中沸水浴中15min，自然冷却，自然冷却转入离心管，平衡后放入离心机！转入离心管，平衡后放入离心机！ 离心：离心：2500 r/min 5min 小心取出，取上清液测吸光值小心取出，取上清液测吸光值Designed by XK Wang 规范曲线绘制：规范曲线绘制： 以葡萄糖量以葡萄糖量(mg)为横为横座标，吸光度差值座标，吸光度差值(A590 为纵座标，在座标纸上绘为纵座标，在座标纸上绘制出规范曲线。制出规范曲线。比色测定：比色测定：用用H2O作调作调0空白参比液！空白参比液！在

5、在590nm波长下测定各管的吸光度。波长下测定各管的吸光度。Designed by XK Wang 3.04.0g样品样品 加水研磨成匀浆后转入加水研磨成匀浆后转入50ml大试大试管管 80水浴水浴20min间歇震荡间歇震荡 冷却后转入冷却后转入100ml容量瓶定容、过滤后得到待测溶液。容量瓶定容、过滤后得到待测溶液。 取待测液取待测液6.0ml进展测定按制造规范曲线的步骤。进展测定按制造规范曲线的步骤。2 样品复原糖提取与测定样品复原糖提取与测定Designed by XK Wang Designed by XK Wang 样品复原糖的含量样品复原糖的含量%100*1000STVWNVXDesigned by XK Wang 2种温度水浴处置，不可弄混种温度水浴处置，不可弄混离心机运用留意平安。离心机运用留意平安。思索：比较双缩脲试剂与斐林试剂的差别？思索