吉林省伊通满族自治县高中生物 第一章 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序（二）课件 新人教选修3

1、1.2 基因工程的基本操作程序（二）1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）转化：转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内稳定存在目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内稳定存在和表达的过程。和表达的过程。1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）1、将目的基因导入植物细胞、将目的基因导入植物细胞（1）导入细胞的种类）导入细胞的种类（2）导入方法）导入方法农杆菌

2、转化（最常用）农杆菌转化（最常用）体细胞体细胞双子叶植物和裸子植物双子叶植物和裸子植物其他植物可用酚类物质处理后用农杆菌转化其他植物可用酚类物质处理后用农杆菌转化1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）1、将目的基因导入植物细胞、将目的基因导入植物细胞（2）导入方法）导入方法基因枪法基因枪法 花粉管通道法花粉管通道法1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）2、将目的

3、基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞（1）导入细胞的种类）导入细胞的种类（2）导入方法）导入方法 显微注射法显微注射法最好是受精卵细胞最好是受精卵细胞1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞（1）微生物作为受体的优势）微生物作为受体的优势（2）导入方法）导入方法 Ca2+处理处理繁殖速度快，可大量生产繁殖速度快，可大量生产 生产成本低生产成本低胰岛素原的人工合成胰岛素原的人工合成1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本

4、操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞（3）原核生物作为受体细胞产生的蛋白质没有空间结构，）原核生物作为受体细胞产生的蛋白质没有空间结构，需要在体外加工。需要在体外加工。1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）生物种类生物种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞导入方法导入方法农杆菌转化法农杆菌转化法（最常用）（最常用）基因枪法基因枪法花

5、粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法Ca2+处理法（感处理法（感受态细胞）受态细胞）受体细胞受体细胞受精卵或受精卵或体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞（细菌）原核细胞（细菌）1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation）生物生物种类种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞转化转化过程过程将目的基因插入将目的基因插入Ti质质粒的粒的T-DNA上上Ca2+处理导入农杆菌细胞处理导入农杆菌细胞侵染植物细胞侵染植物细胞目目的基因整合到受体细的基因整合到受体细胞的染色体上胞的

6、染色体上DNA上上植物组织培养植物组织培养试试管苗表达目的基因管苗表达目的基因产生相应性状。产生相应性状。将含有目的基因将含有目的基因的表达载体提纯的表达载体提纯取受精卵取受精卵显显微注射微注射获得导获得导入目的基因的受入目的基因的受体细胞体细胞早期胚早期胚胎培养胎培养胚胎移胚胎移植植获得新性状获得新性状的动物。的动物。Ca2+处理细胞处理细胞感受态细胞感受态细胞重组的基因重组的基因表达载体与感表达载体与感受态细胞混合受态细胞混合感受态细胞感受态细胞吸收吸收DNA分子分子完成转化完成转化目目的基因表达，的基因表达，获得新性状。获得新性状。1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第四步：目的基因的检测与鉴定第四步：目的基因的检测与鉴定抗虫鉴定、抗病鉴定活抗虫鉴定、抗病鉴定活性鉴定等性鉴定等DNA分子分子限制片段限制片段限制性酶切割限制性酶切割琼脂糖电泳琼脂糖电泳转移至硝酸纤维素膜上转移至硝酸纤维素膜上与放射性标记与放射性标记DNA探针杂交探针杂交放射自显影放射自显影带有带有DNA片段的凝胶片段的凝胶凝胶凝胶滤膜滤膜用缓冲液转用缓冲液转移移DNA吸附有吸附有DNA片片段的膜段的膜DNA分子杂交分子杂交32P-抗体抗体裂解细胞，表达蛋白转裂解细胞，表达蛋白转移到硝酸纤维素膜上