第二章中药制剂的鉴别-2015秋-本科生课件

1、中药制剂的鉴别药物分析教研室内 容第一节 性状鉴别 第二节 显微鉴别 第三节 理化鉴别大纲要求n熟悉性状鉴别的内容n熟悉显微鉴别的内容n熟悉理化鉴别的方法n掌握理化鉴别中薄层色谱法中药制剂的鉴别n定义 利用一定的方法来确定中药制剂中药制剂中原料药的组成，从而判断该制剂的真伪。n内容 性状鉴别 显微鉴别 理化鉴别中药制剂的鉴别n定义 中药制剂的性状是指除去包装后的性状，包括大小、色泽、表面特征、质地、气味等方面。 性状与投料的原料质量及工艺有关 初步反映中药制剂质量状况中药制剂的鉴别性状鉴别n内容颜色：与所含成分、制备工艺有关 复方制剂考虑到贮存期间颜色会变深形态：不同剂型，形态不一（如：液体）

2、形状：与设备模具有关（栓剂）气：香、芳香、清香、腥、臭、特异等 不明显用气微，香气浓厚时用芳香浓郁味：甜、酸、苦、涩、辛、凉、咸、辣、麻等中药制剂的鉴别性状鉴别n注意1.制剂的性状指成品的颜色、形态、气味等2.有包衣的丸剂、片剂应描述除去包衣后的片心、丸心的颜色及气味。3.硬胶囊应写明除去胶囊后内容物的性状4.制剂色泽有两种色调组合，描写时以后者为主，如棕红色中药制剂的鉴别性状鉴别各种剂型的性状描述（见书）中药制剂的鉴别性状鉴别n物理常数测定 折光率、旋光度、比旋度、凝点、 熔点、相对密度 定性鉴别的一种手段中药制剂的鉴别性状鉴别n局限性 中药种类繁多,品种复杂。中成药而言，包括“丸、散、膏、

3、丹、片”等多种剂型，仅靠传统的性状鉴定方法不能识别出其中的方药组成和药材的真伪。中药制剂的鉴别性状鉴别丸散膏丹、神仙难辨丸散膏丹、神仙难辨n发展 我国著名生药学家徐国钧教授，开创了中药制剂显微鉴定，从实际上解决了中药材粉末和含有中药原粉的中成药制剂的真伪鉴定问题。在我国历版药典中均有很大部分的中成药采用显微方法鉴定。 中药制剂的鉴别性状鉴别n定义 利用显微镜来观察中药制剂中原料药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。 中药制剂的鉴别显微鉴别n使用范围 以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末的制剂，原药材的显微特征仍保留。（有那些剂型？）蛇胆川贝散：川贝母仅用淀粉

4、粒作为指标。牛黄解毒片：大黄用草酸钙簇晶为鉴别特征 。 中药制剂的鉴别显微鉴别n制片方法 显微鉴定，制作良好的切片或标准片是关键。把切片或粉末标准片用适当的试液进行处理和封藏，试液的选择必须具有合理性。 中药制剂的鉴别显微鉴别n制片方法试液的选择1.水或稀甘油：细胞壁颜色及淀粉粒、油滴、树脂2.水合氯醛：组织构造和细胞形状及叶片、花和花粉粒，尤其适于观察草酸钙结晶。3. 5%氢氧化钾液：可溶解糊粉粒、淀粉粒及蛋白质，使细胞壁膨胀，从而增强透明度。4.氯化碱液：试剂可漂白切片及除去叶绿素5. 1:1乙醚乙醇液：用于脱去种子类药材切片中的脂类及挥发油类成分 中药制剂的鉴别显微鉴别n制片方法中药制剂

5、的鉴别显微鉴别散剂、胶囊剂：粉末+载玻片+适当的试液 显微观察n制片方法中药制剂的鉴别显微鉴别片剂：正中切开，由切开面由外至内刮取少量样品，装片。粉末+载玻片+适当的试液 显微观察（糖衣片）n制片方法中药制剂的鉴别显微鉴别丸剂、颗粒剂：研成粉末，装片粉末+载玻片+适当的试液 显微观察蜜丸：正中切开，由切开面由外至内刮取少量样品，装片。n制片方法中药制剂的鉴别显微鉴别蜜丸除蜜方法1. 5%氢氧化钾液适量蜜丸+试管中+ 5%氢氧化钾液 加热至玻璃棒挤压能离散为止，倾出碱液+水洗涤，取出少量+试液处理 观察n制片方法中药制剂的鉴别显微鉴别蜜丸除蜜方法2.硝铬酸法适量蜜丸+试管中+ 硝铬酸液 放置 玻

6、璃棒挤压能离散为止，倾出酸液+水洗涤，取出少量+试液处理 观察n制片方法中药制剂的鉴别显微鉴别蜜丸除蜜方法3.氯酸钾法：适量蜜丸+试管中+ 硝酸溶液及氯酸钾少量缓缓加热至产生的气泡渐少时+氯酸钾少量玻璃棒挤压能离散为止，倾出酸液+水洗涤，取出少量+试液处理 观察n制片方法中药制剂的鉴别显微鉴别蜜丸除蜜方法4.离心分离法：蜜丸切碎+水洗涤 离心管中离心分离沉淀（多次）取出少量+试液处理 观察n例中药制剂的鉴别显微鉴别n例中药制剂的鉴别显微鉴别山药山药茯苓茯苓熟地黄熟地黄牡丹皮牡丹皮山茱萸山茱萸泽泻泽泻n局限性1.药材粉末特征间的交叉干扰。2.经过提取的药材，其化学成分已被浸出，但仍然保持着原来的

7、细胞形态特征，所以仅通过显微观察不能完全解决内在的质量问题。中药制剂的鉴别显微鉴别n局限性3.一种药材具有多种植物来源，通常粉末的特征各 不相同。4.药材在处方中所占的比例小(如贵重药、毒剧药)专属性特征出现的几率更小；有的粉末粒度过细(如水飞法制得的矿物药粉末)，使特征变得不明显。 中药制剂的鉴别显微鉴别n定义 利用物理的、化学的或物理化学的方法对制剂中所含的化学成分进行定性鉴别，从而判断制剂的真伪。n方法 化学反应法 升华法 荧光法 光谱法 色谱法中药制剂的鉴别理化鉴别n 一般化学反应法 中药制剂的鉴别理化鉴别中药制剂中药制剂化学成分化学成分+合适的提合适的提取溶剂取溶剂提取待检测成分提取

8、待检测成分排除其他成分干扰排除其他成分干扰n 一般化学反应法注意事项 1.避免附加成分的干扰：如注射剂、颗粒剂及糖浆剂2. 慎重使用专属性不好的分析反应：如泡沫反应、三氯化铁显色反应3.对样品进行分离、精制：除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性4.采用阴性及阳性对照方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证：防止出现假阳性 中药制剂的鉴别理化鉴别n 一般化学反应法例 牛黄解毒片中黄芩、大黄的定性鉴别反应取本品6 片(包衣者除去包衣)，研细，加乙醇1Oml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应(1) 取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。(2) 另取滤液4ml，加氢氧化钠试

9、液，即显红色，再加30%过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，则红色变为黄色。中药制剂的鉴别理化鉴别n升华法 z定义：将具有升华性质的成分，在一定的温度下从制剂中分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴定的依据。z制剂中若有2种以上的药味都含有升华物，升华的温度不同，可控制加热的温度分段收集升华物，分别进行鉴定。中药制剂的鉴别理化鉴别n升华法 z操作方法：详见P20中药制剂的鉴别理化鉴别n升华法 例 牛黄解毒丸微量升华鉴别 取本品进行微量升华，先得白色升华物后，继得黄色 升华物。将升华物分别置显微镜下观察。中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法 荧光法 可见紫外分光光度法 红外分光光

10、度法中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法荧光法有些中药材中含有能产生荧光的化学成分：在可见光 or 紫外光照射下发出荧光，有的须经试剂处理后发出荧光含有这类药材的中药制剂:荧光法鉴别操作方法:取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下(365nm or 254nm)观察，有时则是加一定的试剂后再进行观察。中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法荧光法 例：板蓝根冲剂的荧光鉴别 取本品0.5g，加水5ml使溶解，静置，取上清液点于滤纸上，晾干，置紫外光灯(365nm)下观察，显蓝紫色。中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法可见紫外分光光度法 中药材有些化学成分在可见紫外光区有选择性吸收，显示特征吸收光谱。不同的药材

11、所含的成分不同，在一定条件下吸收光谱的特征可用于鉴别药材，因此该法也可用于中药制剂的鉴别。 中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法可见紫外分光光度法 中药制剂成分复杂，具吸收的加和性，样品不纯化，所得光谱为混合光谱，专属性差。 样品纯化后测定吸收光谱，常见方法： 1.规定吸收波长法 2.对照品对比法 3.规定吸收波长和吸收度法 4.规定吸收波长和吸收度比值法 5.多溶剂光谱法中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法可见紫外分光光度法 1.规定吸收波长法：样品经适当处理后，测定吸收光谱，在一定波长处有最大吸收。 如复方丹参滴丸中丹参的鉴别： 取本品15丸，研细，分次加水少量，搅拌、滤过、 滤液移至1OOml量瓶中

12、，并加水至刻度， 取溶液2ml，加水至25ml，照分光光度法测定， 在283nm 的波长处有最大吸收。 中药制剂的鉴别理化鉴别复方丹参片紫外光谱图复方丹参片紫外光谱图 283nmn光谱法可见紫外分光光度法 2.对照品对比法：取对照品或对照药材及供试品经处理后，制成对照品及供试品溶液，分别测定吸收光谱，比较二者吸收光谱的一致性。 中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法可见紫外分光光度法 3.规定吸收波长和吸收度法：取样品经处理后，测定吸收光谱，在吸收光谱的规定波长下，应有若干个吸收峰，并有相应的吸收度值。 中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法可见紫外分光光度法 4.规定吸收波长和吸收度比值法：样品在一定波长下

13、应产生相应的吸收峰，并且吸收度与对照峰吸收度比值应在一定的范围之内。需有对照品或参照物。 中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法红外分光光度法 广泛用于合成药的鉴别，用于中药制剂的鉴别还存在不少困难： 成分复杂，组分吸收峰叠加，专属性重现性不理想。 方法：固体供试品采用溴化钾压片法 液体供试品采用夹片法 中药制剂的鉴别理化鉴别n光谱法红外分光光度法 对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息 主要成分的质和量大致相同，而且基本恒定，所得红外光谱也呈现很好的相似性，可重复，因而可作真伪鉴别。依据：I. 不太复杂的混合体系，图谱有特征性 II. 统一分离提取方法，图谱特征强重复性好 中药制剂的鉴别理

14、化鉴别n光谱法红外分光光度法对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息例：熊胆、牛胆、猪胆的红外图谱比较 中药制剂的鉴别理化鉴别在特征区和指纹区三者则有明显的差别在特征区和指纹区三者则有明显的差别n色谱法 纸色谱 TLC法 GC法 HPLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别n色谱法纸色谱法 载体：纸 固定相：纸上所含水分或其他物质 展开剂： 供试品、对照品、对照药材 中药制剂的鉴别理化鉴别n色谱法TLC法中药制剂的鉴别理化鉴别l定义：定义： 将适宜的吸附剂或载体涂布于将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，玻璃板、塑料或铝基片上，成一均成一均匀薄层。匀薄层。待点样、展开后，与适宜待点样

15、、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比，并可用谱图对比，并可用薄层扫描仪扫描薄层扫描仪扫描，用于中药制剂的鉴定。用于中药制剂的鉴定。中药制剂的鉴别理化鉴别 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 薄层板的制备薄层板的制备 点样点样 展开展开 显色与检视显色与检视 n色谱法TLC法 操作步骤操作步骤n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l供试品溶液的制备供试品溶液的制备 单一溶剂萃取法：单一溶剂萃取法：采用单一溶剂萃取出样品中待测成分，采用单一溶剂萃取出样品中待测成分，舍弃其他成分。舍弃其他成分。n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l供试品溶液的制备

16、供试品溶液的制备 分段萃取法分段萃取法 液液萃取法液液萃取法 固液萃取法固液萃取法中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料：法使用的材料：n色谱法TLC法 薄层板 涂布器 点样器材 层析缸 显色与检测仪器中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料法使用的材料薄层板薄层板 手工自制板：手工自制板： 玻璃：玻璃：12mm优质平板玻璃优质平板玻璃 光洁、平整光洁、平整 洗净至不挂水珠，晾干洗净至不挂水珠，晾干 预制板：预制板：普通薄层板和高效薄层板（铝箔）普通薄层板和高效薄层板（铝箔）n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料法使用的材料薄层板薄层板 载体：硅胶G（石膏作粘合剂）

17、 硅胶GF254（石膏、荧光剂） 硅胶H（不含粘合剂） 硅胶HF254（荧光剂） 聚酰胺薄膜n色谱法TLC法 粘合剂：羧甲基纤维素钠水溶液（粘合剂：羧甲基纤维素钠水溶液（0.20.5）中药制剂的鉴别理化鉴别l操作方法操作方法薄层板的制备薄层板的制备 市售薄层板：市售薄层板：临用前，临用前，110110活化活化30min30min 聚酰胺薄膜不用活化聚酰胺薄膜不用活化 自制薄层板自制薄层板 1份份固定相固定相+3份份水水（or含粘合剂的水溶液），在研钵中向同一方含粘合剂的水溶液），在研钵中向同一方向研磨混匀，驱除气泡，铺板（向研磨混匀，驱除气泡，铺板（0.20.3mm).置水平台上室温晾干，置水

18、平台上室温晾干，110 活化活化30min，置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检验均匀度、麻点、，置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检验均匀度、麻点、气泡、有无污染气泡、有无污染n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料法使用的材料涂布器涂布器 手工、半自动、全自动手工、半自动、全自动 固定厚度或可调节厚度固定厚度或可调节厚度n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料法使用的材料点样器材点样器材 定量点样毛细管：定量点样毛细管：0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、 5.0、10l。 微量注射器（针尖平头）微量注射器（针尖平头） 半自动、自动点样器半自动、自动

19、点样器 n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l操作方法操作方法点样点样 方法：垂直方向，成圆点状方法：垂直方向，成圆点状or窄细的条带状（增大上样量）窄细的条带状（增大上样量）注意：点样时勿损伤薄层表面注意：点样时勿损伤薄层表面中药制剂的鉴别理化鉴别l操作方法操作方法展开展开 展开剂的制备：新鲜配制展开剂的制备：新鲜配制 展开：点样后的薄层板放入加有展开剂的层析缸中，密闭，一般上行展开：点样后的薄层板放入加有展开剂的层析缸中，密闭，一般上行展开，展开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规定展距后立即将薄层板取出

20、，晾干，以备检测。展开至规定展距后立即将薄层板取出，晾干，以备检测。 展距：展距：一般一般815cm，高效板，高效板58cmn色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l操作方法操作方法展开展开l 特殊情况处理特殊情况处理l 若需要展开剂或其他溶剂的蒸汽平衡者可在双槽展开箱的一侧加适量若需要展开剂或其他溶剂的蒸汽平衡者可在双槽展开箱的一侧加适量的溶剂。的溶剂。l 若需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润的滤纸使展开箱若需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润的滤纸使展开箱易于被蒸汽平衡。易于被蒸汽平衡。l 若薄层板需同时预平衡者，应将薄层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，若薄层板需同时预平衡

21、者，应将薄层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此槽中展开平衡后再将溶剂倾入此槽中展开中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料法使用的材料显色与检测仪器显色与检测仪器 n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别lTLC法使用的材料法使用的材料显色与检测仪器显色与检测仪器 n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l记录记录 照相照相 扫描图谱扫描图谱 描画描画n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别1.样品的预处理及供试液的制备样品的预处理及供试液的制备2.薄层色谱的点样技术薄层色谱的点样技术3.吸附剂的活性与相对湿度的影响吸附剂的活性与相对湿度的影响4.空气温度、湿度的影响空气温度

22、、湿度的影响n色谱法TLC法l主要影响因素主要影响因素中药制剂的鉴别理化鉴别1. 样品的预处理及供试液的制备样品的预处理及供试液的制备 供试液净化处理相当重要。供试液净化处理相当重要。 制备样品供试液的溶剂要求，溶解度不宜太大，粘度不制备样品供试液的溶剂要求，溶解度不宜太大，粘度不易太高，沸点适中。溶解样品溶剂沸点不宜太高（如正丁醇）易太高，沸点适中。溶解样品溶剂沸点不宜太高（如正丁醇）or太低（如乙醚）。太低（如乙醚）。 n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别 2. 薄层色谱的点样技术薄层色谱的点样技术 点样量不宜过大，最好控制在点样量不宜过大，最好控制在10l以下，不要破坏薄层板。以下，

23、不要破坏薄层板。 n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别3.吸附剂的活性与相对湿度的影响吸附剂的活性与相对湿度的影响 吸附剂（硅胶）的活性取决于实验室环境的相对湿度，吸附剂（硅胶）的活性取决于实验室环境的相对湿度，控制展开时的相对湿度：控制展开时的相对湿度： 在双槽展开箱的一侧用一定浓度的硫酸溶液，密闭放置一定时间，在双槽展开箱的一侧用一定浓度的硫酸溶液，密闭放置一定时间，再加入展开剂于另一侧展开。再加入展开剂于另一侧展开。 将点样后的薄层板放入内有一定浓度的硫酸溶液或其他调节相对湿将点样后的薄层板放入内有一定浓度的硫酸溶液或其他调节相对湿度的无机盐水溶液的容器中，密闭放置一定时间后，取出，

24、立即在箱中度的无机盐水溶液的容器中，密闭放置一定时间后，取出，立即在箱中展开。展开。记录试验湿度记录试验湿度n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l对照物选择对照物选择 对照品对照对照品对照 阴阳对照阴阳对照 对照药材和对照品同时对照对照药材和对照品同时对照n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l对照物选择对照物选择n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l对照物选择对照物选择对照品对照对照品对照 用已知中药制剂某一药材的某一有效成分或特用已知中药制剂某一药材的某一有效成分或特征性成分做对照品。征性成分做对照品。n色谱法TLC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l对照物选择对照物选择阴阳对照阴阳对照

25、 化学成分和有效成分不明确，有些已明确但无对照品化学成分和有效成分不明确，有些已明确但无对照品 对照药材溶液制备：n色谱法TLC法 把制剂中要鉴别的某对照药材，按制剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制成该味药的阳性对照液。中药制剂的鉴别理化鉴别l对照物选择对照物选择阴阳对照阴阳对照 化学成分和有效成分不明确，有些已明确但无对照品化学成分和有效成分不明确，有些已明确但无对照品 从制剂处方中减去要鉴别的该味药材，剩下其他各味药按制剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制成该味药的阴性对照液。n色谱法TLC法 阴性对照液制备：中药制剂的鉴别理化鉴别l对照物选择对照物选择对

26、照药材和对照品同时对照对照药材和对照品同时对照 准确反应制剂投料的真实性，单一对照品不具专属性。准确反应制剂投料的真实性，单一对照品不具专属性。黄连、黄柏：小檗碱黄连、黄柏：小檗碱n色谱法TLC法 n色谱法GC法 中药制剂的鉴别理化鉴别l适应范围适应范围 含有挥发油或挥发性成分的制剂含有挥发油或挥发性成分的制剂 大分子或不挥发性成分可分解或制成衍生物大分子或不挥发性成分可分解或制成衍生物83 GC GC 原理原理中药制剂的鉴别理化鉴别用已知物对照定性：该法是基于在一定操作条件下，各组分保留时间是一定值的原理。具体做法：1）分别以试样和标准物进样分析各自的色谱图；2）对照：如果试样中某峰的保留时间和标样中某峰重合，则可初步确定试样中含有该物质。3）也可通过在样品中加入标准物，看试样中哪个峰