第八章 发酵过程控制6(华农)

1、 第六节第六节 染菌的防治染菌的防治发酵过程中除了生产菌以外，还有其发酵过程中除了生产菌以外，还有其它菌生长繁殖它菌生长繁殖什么是染菌？什么是染菌？一、染菌的影响一、染菌的影响发酵过程污染杂菌，发酵过程污染杂菌，会严重的影响生产会严重的影响生产，是，是发酵工业的发酵工业的。l造成大量原材料的浪费，在经济上造成巨大造成大量原材料的浪费，在经济上造成巨大损失损失l扰乱生产秩序，破坏生产计划。扰乱生产秩序，破坏生产计划。l遇到连续染菌，特别在找不到染菌原因往往遇到连续染菌，特别在找不到染菌原因往往会影响人们的情绪和生产积极性。会影响人们的情绪和生产积极性。l影响产品外观及内在质量影响产品外观及内在质

2、量生产不同的品种，可污染不同种生产不同的品种，可污染不同种类和性质的微生物。类和性质的微生物。不同污染时间，不同污染途径，不同污染时间，不同污染途径，污染不同菌量，不同培养基和培污染不同菌量，不同培养基和培养条件又可产生不同后果养条件又可产生不同后果 放线菌由于生长的最适放线菌由于生长的最适pH为为7左右，因此染左右，因此染细菌为多，而霉菌生长细菌为多，而霉菌生长pH为为5左右，因此染左右，因此染酵母菌为多。酵母菌为多。青霉素发酵染菌青霉素发酵染菌，绝大多数杂菌都能直接产，绝大多数杂菌都能直接产生青霉素酶，而另一些杂菌则可被青霉素诱生青霉素酶，而另一些杂菌则可被青霉素诱导而产生青霉素酶。不论在

3、发酵前期、中期导而产生青霉素酶。不论在发酵前期、中期或后期，染有能产生青霉素酶的杂菌，都能或后期，染有能产生青霉素酶的杂菌，都能使青霉素迅速破坏。使青霉素迅速破坏。不同菌不同产品链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素等虽等虽不象青霉素发酵染菌那样一无所得，但也不象青霉素发酵染菌那样一无所得，但也会造成不同程度的危害。如杂菌大量消耗会造成不同程度的危害。如杂菌大量消耗营养干扰生产菌的正常代谢；改变营养干扰生产菌的正常代谢；改变pH，降，降低产量。低产量。灰黄霉素、制霉菌素、克念菌素灰黄霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素等抗生素抑制霉菌，对细菌几乎没有抑制和杀灭作抑制霉菌，

4、对细菌几乎没有抑制和杀灭作用。用。不同产品疫苗生产疫苗生产危害很大。现在疫苗多采用深危害很大。现在疫苗多采用深层培养，这是一类不加提纯而直接使用的产层培养，这是一类不加提纯而直接使用的产品，在其深层培养过程中，一旦污染杂菌，品，在其深层培养过程中，一旦污染杂菌，不论死菌、活菌或内外毒素，都应全部废弃。不论死菌、活菌或内外毒素，都应全部废弃。因此，发酵罐容积越大，污染杂菌后的损失因此，发酵罐容积越大，污染杂菌后的损失也越大。也越大。不同产品（1 1）污染噬菌体）污染噬菌体 噬菌体的感染力很强，传播蔓延噬菌体的感染力很强，传播蔓延迅速，也较防治，故危害极大。迅速，也较防治，故危害极大。污染噬菌体后

5、，可使发酵产量大污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度下降，严重的造成断种，被幅度下降，严重的造成断种，被迫停产迫停产。（2 2）污染其它杂菌）污染其它杂菌 有些杂菌会使生产菌有些杂菌会使生产菌产生大量泡沫，即使产生大量泡沫，即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通气搅拌。气搅拌。有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使pH下降下降，使不耐酸的产品破坏。使不耐酸的产品破坏。特别是染芽孢杆菌，由于特别是染芽孢杆菌，由于芽孢耐热，不易杀死，往往一次染菌后会反复染芽孢耐热，不易杀死，往往一次染菌后会反复染菌。菌。特别是染芽孢杆菌，

6、由于芽孢耐热，特别是染芽孢杆菌，由于芽孢耐热，不易杀死，往往一次染菌后会反复不易杀死，往往一次染菌后会反复染菌。染菌。 污染时间污染时间是指用无菌检测方法确准的污染是指用无菌检测方法确准的污染时间，不是杂菌窜入培养液的时间。时间，不是杂菌窜入培养液的时间。杂菌进入培养液后，需有足够的生长、繁殖杂菌进入培养液后，需有足够的生长、繁殖的时间才能显现出来，显现的时间又与污染的时间才能显现出来，显现的时间又与污染菌量有关。菌量有关。污染的污染的菌量多菌量多，显现染菌所，显现染菌所需的时间就需的时间就短短，污染，污染菌量少菌量少，显现染菌的时间就显现染菌的时间就长长。（1 1）种子培养期染菌）种子培养期

7、染菌由于由于接种量较小接种量较小，生产菌生长一开始不占，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。因而它或只有很少抗生素（产物）。因而它防御防御杂菌能力低杂菌能力低，容易污染杂菌。如在此阶段，容易污染杂菌。如在此阶段染菌，应将培养液染菌，应将培养液全部废弃全部废弃。（2 2）发酵前期染菌）发酵前期染菌原因原因 发酵前期菌量不很多，发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争与杂菌没有竞争优势；优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱。抵御杂菌能力弱。在这个时期要特别警惕

8、以制止染菌的发生。在这个时期要特别警惕以制止染菌的发生。染菌措施染菌措施 可以用降低培养温度，调整补料量，可以用降低培养温度，调整补料量，用酸碱调用酸碱调pH值，缩短培养周期等措施予以补救。值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。（3 3）发酵中期染菌）发酵中期染菌 。杂菌大量产酸，培养液杂菌大量产酸，培养液pHpH下降；糖、氮消耗快，发酵液下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止

9、，有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量泡沫。泡沫。措施措施 降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情况。降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑制杂菌。制杂菌。（4 4）发酵后期染菌）发酵后期染菌，特别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能特别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。如力。因此如果染菌不

10、多，对生产影响不大。如果染菌严重，又破坏性较大，果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放罐可以提前放罐。 当生产菌已迅速繁殖，在发酵液中占有优势，污当生产菌已迅速繁殖，在发酵液中占有优势，污染极少数杂菌，如每染极少数杂菌，如每1L1L中有中有1 12 2个杂菌，对发个杂菌，对发酵不会带来影响，因为这些杂菌需要时间繁殖酵不会带来影响，因为这些杂菌需要时间繁殖才能达到危害发酵的程度，而且环境对杂菌的才能达到危害发酵的程度，而且环境对杂菌的繁殖已不利。当繁殖已不利。当75m75m3 3发酵液污染发酵液污染1 1个杂菌，要个杂菌，要达到大幅度达到大幅度(10(106 6个个/mL)/mL)污染时需要的时间

11、污染时需要的时间(h)(h)为：为：条件条件 污染污染10106 6个个/ /mLmL 污染污染108108个个/ /mLmL增代时间增代时间t tg g=30min 23 26=30min 23 26延迟延迟6ht6htg g=30min 29 32=30min 29 32增代时间增代时间t tg g=2h 92 106=2h 92 106延迟延迟6ht6htg g=2h 98 112=2h 98 112 但是污染幅度较大时，特别是发酵前期但是污染幅度较大时，特别是发酵前期和中期污染，将造成严重的危害。和中期污染，将造成严重的危害。（二）发酵染菌对提炼和产（二）发酵染菌对提炼和产品质量的影响

12、品质量的影响1 1、发酵染菌对过滤的影响、发酵染菌对过滤的影响染菌的发酵液一般发粘，菌体大多数自溶，染菌的发酵液一般发粘，菌体大多数自溶，所以在发酵液过滤时不能或很难形成滤饼，所以在发酵液过滤时不能或很难形成滤饼，导致导致过滤困难过滤困难。即使采取加热、冷却、。即使采取加热、冷却、添加助滤剂等措施，使部分蛋白质凝聚，但添加助滤剂等措施，使部分蛋白质凝聚，但效果并不理想。效果并不理想。污染杂菌的种类对过滤的影响程污染杂菌的种类对过滤的影响程度有差异度有差异，如污染霉菌时，影响较小，而，如污染霉菌时，影响较小，而污染细菌时很难过滤。由于过滤困难，过滤时污染细菌时很难过滤。由于过滤困难，过滤时间拉长

13、，间拉长，影响发酵液储罐和过滤设备的周转使影响发酵液储罐和过滤设备的周转使用用，破坏了生产平衡。染菌发酵液还会因过滤破坏了生产平衡。染菌发酵液还会因过滤困难而困难而大幅度降低过滤收率，大幅度降低过滤收率，直接影响提炼总直接影响提炼总收率。收率。2 2、发酵染菌对提炼的影响、发酵染菌对提炼的影响染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的水溶性蛋白和其它杂质。水溶性蛋白和其它杂质。采用有机溶剂萃取的提炼工艺，则采用有机溶剂萃取的提炼工艺，则极易发生乳化极易发生乳化，很难使水相和溶剂相分离，影响进一步提纯。很难使水相和溶剂相分离，影响进一步提纯。采用直接用离子交换树脂的提取

14、工艺，如链霉素、庆采用直接用离子交换树脂的提取工艺，如链霉素、庆大霉素，染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂表面，大霉素，染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂表面，或被离子交换树脂吸附，大大或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树降低离子交换树脂的交换容量，脂的交换容量，而且有的杂菌很难用水冲洗干而且有的杂菌很难用水冲洗干净，洗脱时与产物一起进入洗脱液，影响进一步提纯。净，洗脱时与产物一起进入洗脱液，影响进一步提纯。（一）发酵染菌率计算基准（一）发酵染菌率计算基准总染菌率指一年发酵染菌的批（次）数与总投总染菌率指一年发酵染菌的批（次）数与总投料批（次）数之比的百分率。染菌批次数应包料批（次）数之比的百

15、分率。染菌批次数应包括染菌后培养基经重新灭菌，又再次染菌的批括染菌后培养基经重新灭菌，又再次染菌的批次数在内。这是习惯的计算方法，也是我国的次数在内。这是习惯的计算方法，也是我国的统一计算方法。统一计算方法。总染菌率总染菌率%=%100*总投料批（次）数总投料批（次）数发酵染菌批（次）数发酵染菌批（次）数可以说产生这种现象大多数是由于工作可以说产生这种现象大多数是由于工作中中“明知故犯明知故犯”“”“不负责任不负责任”和和“侥幸侥幸心理心理”所造成的。所造成的。（二）染菌原因（二）染菌原因 造成染菌的因素很多，但总结几十年的经验，造成染菌的因素很多，但总结几十年的经验，对绝大部分罐批染菌的原因

16、是对绝大部分罐批染菌的原因是比较清楚比较清楚的的但在实际生产中发酵染但在实际生产中发酵染菌率仍比较高菌率仍比较高灭菌的蒸汽压不足不能灭菌；设备灭菌的蒸汽压不足不能灭菌；设备有渗漏不能进罐等等都是众所周知的，但因为有渗漏不能进罐等等都是众所周知的，但因为有侥幸心理还是照样灭菌，进罐，结果以污染有侥幸心理还是照样灭菌，进罐，结果以污染杂菌而告终。现将收集到的国内外几家抗生素杂菌而告终。现将收集到的国内外几家抗生素工厂发酵染菌原因列于下：工厂发酵染菌原因列于下：日本工业技术院发酵研究所多年来抗生素发酵染菌原因分析日本工业技术院发酵研究所多年来抗生素发酵染菌原因分析 项目项目 百分率百分率%种子带菌或

17、怀疑种子带菌种子带菌或怀疑种子带菌 9.64接种时罐压跌零接种时罐压跌零 0.19培养基灭菌不透培养基灭菌不透 0.79总空气系统有菌总空气系统有菌 19.96泡沫冒顶泡沫冒顶 0.48夹套穿孔夹套穿孔 12.36盘管穿孔盘管穿孔 5.89接种管穿孔接种管穿孔 0.39阀门渗漏阀门渗漏 1.45搅拌轴密封渗漏搅拌轴密封渗漏 2.09罐盖漏罐盖漏 1.54其它设备渗漏其它设备渗漏 10.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因不明 24.94上海第三制药厂染菌原因分析上海第三制药厂染菌原因分析 项目项目 百分率百分率%种子带菌种子带菌 14.15盘管穿孔盘管穿孔 14.20阀门渗漏阀门渗漏

18、 23.30空气系统有菌空气系统有菌 10.0管理不善管理不善 25.80其它其它 7.49原因不明原因不明 5.78 管理不善而染菌的有管理不善而染菌的有31个罐批，占个罐批，占25.08经经分析有下表所列原因：分析有下表所列原因： 项目项目 百分率百分率%进罐前未做设备严密度检查进罐前未做设备严密度检查 25.8接种违反操作规程接种违反操作规程 25.8检修质量缺乏验收制度检修质量缺乏验收制度 19.35操作不熟练操作不熟练 19.35配料违反工艺规程配料违反工艺规程 6.45调度不当调度不当 3.25第四制药厂链霉素发酵染菌原因分析第四制药厂链霉素发酵染菌原因分析 项目项目 百分率百分率

19、%外界带入杂菌（取样、补料）外界带入杂菌（取样、补料） 8.20设备穿孔设备穿孔 7.60空气系统有菌空气系统有菌 26.00停电罐压跌零停电罐压跌零 1.60接种接种 11.00蒸汽压力不足或蒸汽量不足蒸汽压力不足或蒸汽量不足 0.60管理问题管理问题 7.80 操作违反规程操作违反规程 1.60种子带菌种子带菌 0.60原因不明原因不明 35.00设备渗漏包括夹套穿孔、设备渗漏包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门渗漏、搅拌轴渗漏、阀门渗漏、搅拌轴渗漏、罐盖漏和其它设备漏等。罐盖漏和其它设备漏等。所以说加强设备本身及附属零部件的所以说加强设备本身及附属零部件的，对制

20、服染菌是极其主要的，也是，对制服染菌是极其主要的，也是重要的。重要的。从日本工业技术院和上海第四制药厂分析空气带从日本工业技术院和上海第四制药厂分析空气带菌而造成的染菌分别为菌而造成的染菌分别为19.96和和 26%。国内外。国内外空气除菌技术虽已有较大改善，空气除菌技术虽已有较大改善，。因为空气除菌系。因为空气除菌系统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。菌失败。种子带菌又分为种子带菌又分为。加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带菌是可以克服的。种子培养过程染菌与发酵菌是可以克服的。种子培养过程染菌与发

21、酵一样有许多因素造成。一样有许多因素造成。灭菌技术的好坏与灭菌质量很有关系灭菌技术的好坏与灭菌质量很有关系l蒸汽通入培养基，蒸汽通入培养基，升温快慢、保温时间升温快慢、保温时间产产生过多泡沫生过多泡沫l蒸汽总压是否达到要求标准蒸汽总压是否达到要求标准l环境中的环境中的杂菌数量因季节而有很大差别杂菌数量因季节而有很大差别。上海第四制药厂在卡那霉素生产中，于炎热上海第四制药厂在卡那霉素生产中，于炎热的夏季将连续灭菌预热至的夏季将连续灭菌预热至800C的培养基采样培养，的培养基采样培养，可发现无法计数的大量的芽孢杆菌；而在冬季取可发现无法计数的大量的芽孢杆菌；而在冬季取样的培养中，则仅发现样的培养中

22、，则仅发现23个芽孢杆菌。故染菌个芽孢杆菌。故染菌率因季节不同而发生明显变化。率因季节不同而发生明显变化。l原材料储存和保管，如液胨、玉米浆、母原材料储存和保管，如液胨、玉米浆、母液糖等有机原料液糖等有机原料杂菌的数量杂菌的数量l发酵罐、培养基配制罐等设备的清洗质发酵罐、培养基配制罐等设备的清洗质量量有无灭菌的死角有无灭菌的死角 技术管理就是要对发酵每个技术管理就是要对发酵每个环节严格控制环节严格控制发酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能发酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能有侥幸心理而放松管理有侥幸心理而放松管理尘埃粒子检测尘埃粒子检测无菌平板检测无菌平板检测酚红肉汤培养基检测酚红肉汤培养基检测平板

23、划线平板划线显微镜观察显微镜观察染菌的原因有多种，对于实际情况染菌的原因有多种，对于实际情况如何如何呢？呢？不是系统问题，而是该罐本身的问题。如不是系统问题，而是该罐本身的问题。如种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、分过滤器失效分过滤器失效系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底种或补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底种子带菌、培养基灭菌不彻底种子带菌、培养基灭菌不彻底补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗补料的料液

24、灭菌不彻底或补料管道、阀门渗漏，一般不会是种子问题漏，一般不会是种子问题l制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。l沙土制备时要多次间歇灭菌沙土制备时要多次间歇灭菌l注意接种时的无菌操作注意接种时的无菌操作l子瓶、母瓶的移种和培养子瓶、母瓶的移种和培养l无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以灭菌，或用化学药品灭菌。灭菌，或用化学药品灭菌。无菌室要求无菌室要求在无菌室中装有在无菌室中装有紫外灯紫外灯，打开紫外灯，照半小，打开紫外灯，照半小时，关

25、灯后时，关灯后15分钟再接种。分钟再接种。用用消毒药水消毒药水如新洁而灭配成如新洁而灭配成1/1000浓度擦桌浓度擦桌子、拖地，开启超净台的通风，子、拖地，开启超净台的通风，接种时必须在接种时必须在超净台上操作超净台上操作，超净台装有一，超净台装有一台鼓风机，进风口有一粗过滤器，出风口有高效台鼓风机，进风口有一粗过滤器，出风口有高效过滤器，保证无菌风从超净台吹出，外界有菌空过滤器，保证无菌风从超净台吹出，外界有菌空气不可能进入接种区域，保证无菌条件。气不可能进入接种区域，保证无菌条件。接种人员必须接种人员必须穿好无菌服，戴好口罩，手穿好无菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干净用酒精棉球擦干净。发酵

26、设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会不良等原因会。设备上一旦渗漏，就会造成染菌，例如冷却设备上一旦渗漏，就会造成染菌，例如冷却盘管、夹套穿孔渗漏，有菌的冷却水便会通盘管、夹套穿孔渗漏，有菌的冷却水便会通过漏孔而进入发酵罐中招致染菌。阀门渗漏过漏孔而进入发酵罐中招致染菌。阀门渗漏也会使带菌的空气或水进入发酵罐而造成染也会使带菌的空气或水进入发酵罐而造成染菌。菌。设备上的漏隙如果肉眼能看见，容易发现，也容易治理；设备上的漏隙如果肉眼能看见，容易发现，也容易治理；但有的微小

27、泄漏，肉眼看不见，必须通过一定的试漏方但有的微小泄漏，肉眼看不见，必须通过一定的试漏方法才能发现法才能发现 。水压试漏法水压试漏法试漏方法试漏方法集气桶试漏法集气桶试漏法水压试漏法水压试漏法。被测设备的出口处装上压被测设备的出口处装上压力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有酚酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。酚

28、酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。阀门渗漏可以用阀门渗漏可以用集气桶集气桶来试漏。来试漏。先在先在集气桶中装满水，然后关闭所有阀门，向发酵集气桶中装满水，然后关闭所有阀门，向发酵罐中通入空气，使罐压上升到要求压力，一般罐中通入空气，使罐压上升到要求压力，一般一公斤以上。由于集气桶连通各管道，观察哪一公斤以上。由于集气桶连通各管道，观察哪根管子冒泡，即这根管子的阀门漏气。根管子冒泡，即这根管子的阀门漏气。培养基灭菌方法培养基灭菌方法高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌分批灭菌分批灭菌 1210C，30分钟分钟连续灭菌连续灭菌 罐温罐温1251300C，3045分钟分钟蒸汽下进上出连续灭菌设备流程连续灭

29、菌设备流程连连 消消 塔塔培养基灭菌前含有大量杂菌，灭菌时如果培养基灭菌前含有大量杂菌，灭菌时如果蒸汽蒸汽压力压力不足，就达不到要求的温度；灭菌时产生不足，就达不到要求的温度；灭菌时产生大量大量泡沫泡沫或发酵罐中有或发酵罐中有污垢堆积污垢堆积，就会窝藏大，就会窝藏大量杂菌，造成灭菌不彻底。量杂菌，造成灭菌不彻底。培养基和水的培养基和水的传热系数传热系数比空气的传热系数大，比空气的传热系数大，如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵罐内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡罐内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡沫上升到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与沫上升

30、到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与蒸汽直接接触，未被杀死。蒸汽直接接触，未被杀死。缓慢开启蒸汽阀门，缓慢开启蒸汽阀门，或加入少量消泡剂。或加入少量消泡剂。灭菌时还会因设备安装或污垢堆积造成一些灭菌时还会因设备安装或污垢堆积造成一些。这些死角蒸汽不能有效达到，常。这些死角蒸汽不能有效达到，常会窝藏耐热芽孢杆菌会窝藏耐热芽孢杆菌.所以设备安装要注意不所以设备安装要注意不能造成死角，发酵设备要经常清洗，铲除污能造成死角，发酵设备要经常清洗，铲除污垢。垢。所以设备安装要注意不能造成所以设备安装要注意不能造成死角，发酵设备要经常清洗，死角，发酵设备要经常清洗，铲除污垢。铲除污垢。空气过滤除菌设备流程空气

31、过滤除菌设备流程空压机空压机储罐储罐二级冷却二级冷却加热器加热器空气过滤空气过滤粗过滤粗过滤穿孔泄露，冷却水会渗入穿孔泄露，冷却水会渗入到空气中，造成染菌。到空气中，造成染菌。长期使用后，棉花和活长期使用后，棉花和活性炭的体积被压缩而松动，如果上下端棉花铺得性炭的体积被压缩而松动，如果上下端棉花铺得厚薄不均，厚的一边阻力大空气不畅通，薄的一厚薄不均，厚的一边阻力大空气不畅通，薄的一边空气容易通过，久而久之，薄的一边长期受空边空气容易通过，久而久之，薄的一边长期受空气顶吹而使棉花活性炭改变位置，造成过滤器失气顶吹而使棉花活性炭改变位置，造成过滤器失效。效。过滤器用蒸汽灭菌时，若过滤器用蒸汽灭菌时

32、，若，灭菌完毕应立灭菌完毕应立即缓慢通入压缩空气，将水分吹干。即缓慢通入压缩空气，将水分吹干。超细纤维纸作过滤介质，灭菌时超细纤维纸作过滤介质，灭菌时。在生产实践中，空气管道大多与其它物料管道相在生产实践中，空气管道大多与其它物料管道相接，要接，要防止其它物料窜入空气管防止其它物料窜入空气管道污染过滤器，导致过滤介质失效。道污染过滤器，导致过滤介质失效。l染菌后的培养基必须灭菌后才可放下染菌后的培养基必须灭菌后才可放下水道水道。灭菌方法：可通蒸汽灭菌，也可加入灭菌方法：可通蒸汽灭菌，也可加入过氧乙酸等化学灭菌剂搅拌半小时，才放下过氧乙酸等化学灭菌剂搅拌半小时，才放下水道。否则由于各罐的管道相通

33、，会造成其水道。否则由于各罐的管道相通，会造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也会造成空它罐的染菌，而且直接放下水道也会造成空气的污染而导致其它罐批染菌。气的污染而导致其它罐批染菌。l凡染菌的罐要找染菌的原因凡染菌的罐要找染菌的原因，对症下药，对症下药，该罐也要彻底清洗，进行空罐消毒，才可进该罐也要彻底清洗，进行空罐消毒，才可进罐。罐。l染菌厉害时，车间环境要用石灰消毒染菌厉害时，车间环境要用石灰消毒，空气用甲醛熏蒸。特别，若染噬菌体，空气空气用甲醛熏蒸。特别，若染噬菌体，空气必须用甲醛蒸汽消毒。必须用甲醛蒸汽消毒。（一）染噬菌体对发酵的影响（一）染噬菌体对发酵的影响发酵过程中如果发酵过程中如果

34、受噬菌体的侵染受噬菌体的侵染，一，一般发生溶菌，随之出现发酵迟缓或停止，般发生溶菌，随之出现发酵迟缓或停止，而且受噬菌体感染后，往往会反复连续感而且受噬菌体感染后，往往会反复连续感染，使生产无法进行，甚至使种子全部丧染，使生产无法进行，甚至使种子全部丧失。失。1 1、镜检可发现、镜检可发现菌体数量明显减少菌体数量明显减少，菌体，菌体不规则，严重时完全看不到菌体，且是在不规则，严重时完全看不到菌体，且是在短时间内菌体自溶。短时间内菌体自溶。2 2、发酵、发酵pHpH值逐渐上升值逐渐上升，4-84-8小时之内可达小时之内可达8.08.0以上，不再下降。以上，不再下降。3 3、发酵液、发酵液残糖高残

35、糖高，有，有刺激臭味刺激臭味，粘度大，粘度大，泡沫多泡沫多。4 4、生产量、生产量甚少或增长缓慢或停止甚少或增长缓慢或停止有无染噬菌体，根本的要做噬菌斑检验有无染噬菌体，根本的要做噬菌斑检验（二）产生噬菌体的原因（二）产生噬菌体的原因经过经过1-21-2年以后，主要是由于生产和年以后，主要是由于生产和试验过程中不断不加注意地把许多活试验过程中不断不加注意地把许多活菌体排放到环境中去，自然界中的噬菌体排放到环境中去，自然界中的噬菌体就在活菌体中大量生长，造成了菌体就在活菌体中大量生长，造成了自然界中噬菌体增殖的好机会。自然界中噬菌体增殖的好机会。通常在工厂投产初期并不感到通常在工厂投产初期并不感

36、到噬菌体的危害噬菌体的危害这些噬菌体随着风沙尘土和空气流动传播，这些噬菌体随着风沙尘土和空气流动传播，以及人们的走动、车辆的往来也以及人们的走动、车辆的往来也，使噬菌体有可能潜，使噬菌体有可能潜入生产的各个环节，尤其是通过空气系入生产的各个环节，尤其是通过空气系统进入种子室、种子罐、发酵罐统进入种子室、种子罐、发酵罐在培养皿上倒入培养生产菌的培养基（加琼在培养皿上倒入培养生产菌的培养基（加琼脂）作下层。同样的培养基中加入脂）作下层。同样的培养基中加入20203030培养好的种子液，再加入怀疑染噬菌体的培养好的种子液，再加入怀疑染噬菌体的发酵液，摇均匀后，铺上层。培养过夜观察发酵液，摇均匀后，铺上层。培养过夜观察培养皿上培养皿上。也可以在上层培养基中不加怀疑染噬菌体的也可以在上层培养基中不加怀疑染噬菌体的发酵液，而将发酵液直接点种在上层培养基发酵液，而将发酵液直接点种在上层培养基表面，培养过夜，表面，培养过夜，。