血液肿瘤与检测

1、淋巴造血系统肿瘤及检测 概念： 在机体各种致瘤因素的作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，与正常组织相比，其增生和分化异常，导致克隆性增生而形成的新生物，常形成肿块。 特性：1.获得不断增殖的能力相对无限制性自主性生长；2.失去正常分化成熟的能力异常的形态、代谢和功能。肿瘤的概念淋巴造血系统肿瘤？淋巴造血系统肿瘤？我国死亡率前十位恶性肿瘤造血系统/组织 胚胎期（中胚叶造血期）：卵黄囊、肝、脾 胎儿期（肝脾造血期）：肝、脾、骨髓、胸腺、淋巴结 出生后（骨髓造血期）：骨髓、淋巴结生成淋巴细胞和浆细胞血细胞的发育与成熟 造血细胞的生长发育是一个连续不断的复杂过程，造血器官内的各种

2、造血细胞，按一定的规律发育成为各种成熟的血细胞，然后释放入血循环中。 增殖分化成熟 释放 造血干细胞的分化淋巴造血系统肿瘤 骨髓增生异常综合征（MDS） 白血病（AML、ALL、CML、CLL） 淋巴瘤 (HL、NHL) 多发性骨髓瘤（MM） 骨髓增生性疾病（MPN）(CML、ET、PV、PMF)骨髓增生异常综合征（MDS） 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS)是起源于造血干细胞的一组异质性髓系克隆性疾病，特点是髓系细胞分化及发育异常，表现为无效造血、难治性血细胞减少、造血功能衰竭，高风险向急性髓系白血病（AML）转化。骨髓增生异常综合征（MDS）

3、白血病 白血病是一类造血干细胞恶性克隆性恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官，同时正常造血受抑制正常造血受抑制。 按白血病细胞的分化成熟程度及自然病程，可分为急、慢性白血病。 按病变细胞系列分类，包括髓系的粒、单、红、巨核系和淋巴系的T和B细胞系。 临床上常将白血病分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓细胞白血病（AML）、慢性粒细胞白血病（CML）、慢性淋巴细胞白血病等（CLL）。白血病（leukemia）急性白急性白血病血病A慢性白慢性白血病血病 C 淋淋巴巴系系L髓髓系系MAMLALLCLLCML

4、淋巴瘤 淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴结和淋巴组织，其发生大多与免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关，是免疫系统的恶性肿瘤。 临床上常按组织病理学改变将其分为非霍奇金淋巴瘤（NHL）和 霍奇金淋巴瘤（HL）两类淋巴瘤多发性骨髓瘤 多发性骨髓瘤（MM）是浆细胞恶性增殖的结果。 其特征为骨髓浆细胞异常增生伴有单克隆免疫球蛋白（M蛋白）过度生成，极少数患者可以是不产生M蛋白的未分泌型MM。浆细胞病（多发性骨髓瘤）骨髓增生性疾病 骨髓增生性疾病指分化相对成熟的一系或多系骨髓细胞不断地克隆性增殖所致的一组肿瘤性疾病，也称骨髓增殖性肿瘤（MPNs）。 MPN可分为慢性粒细胞白血病

5、（CML），真性红细胞增多症（PV），原发性血小板增多症（ET），原发性骨髓纤维化（PMF）。（是造血干细胞异常克隆而引起的成纤维细胞反应性增生）骨髓增生性疾病骨髓增生异常综合征MDS白血病AML急性髓细胞白血病ALL急性淋巴细胞白血病CML慢性髓细胞白血病CLL慢性淋巴细胞白血病淋巴瘤HL霍奇金淋巴瘤NHL非霍奇金淋巴瘤多发性骨髓瘤MM骨髓增殖性肿瘤（MPN/MPD）CML慢性髓细胞白血病ET原发性血小板增多症PV真性红细胞增多症PMF原发性骨髓纤维化急性白血病急性白血病(AML、ALL)骨髓增生异常综合征骨髓增生异常综合征(MDS)慢性白血病慢性白血病(CML、CLL)淋巴瘤淋巴瘤(HL、

6、NHL)多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤(MM)骨髓增生性疾病骨髓增生性疾病(CML、PV、ET、PMF)淋巴造血系统肿瘤的检测 淋巴造血系统肿瘤精确的诊断分型是正确选用化疗方案的前提。目前国际上通用的是MICM分型。 细胞形态学(Morphology)：骨髓穿刺、骨髓活检 免疫学(Immunology): 流式细胞术 细胞遗传学(Cytogenetics)：染色体核型分析 分子生物学(Molecular) :FISH、突变分析（PCR、片段分析、基因测序）细胞形态学(Morphology)通过骨髓细胞学可以了解骨髓中各种细胞数量、细胞形态、有无通过骨髓细胞学可以了解骨髓中各种细胞数量、细胞形态、有无

7、异常细胞等，从而协助诊断疾病、疗效观察、判断预后异常细胞等，从而协助诊断疾病、疗效观察、判断预后。骨髓穿刺：采取骨髓液骨髓穿刺：采取骨髓液骨髓活检：特制的穿刺针取一小块骨髓组织骨髓活检：特制的穿刺针取一小块骨髓组织免疫学(Immunology) 根据不同种类的细胞以及细胞在不同分化阶段表达的抗原差异，通过免疫学方法识别抗原从而检测细胞类型及数量。粒细胞成熟过程。流式细胞术利用细胞特异抗原，通过流式细胞仪对血细胞种类、数量等特征进利用细胞特异抗原，通过流式细胞仪对血细胞种类、数量等特征进行分析，从而协助诊断疾病。行分析，从而协助诊断疾病。细胞遗传学(Cytogenetics)：染色体核型分析t(

8、9;22)(q32;q23.2) in CMLt(9;22)(q32;q23.2) in CML分子生物学(Molecular)1R1G2F阳性细胞阳性细胞FISH（荧光原位杂交技术）, 是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，检测基因变异情况。BCR/ABL融合，典型的阳性细胞信号模式为1R1G2F，由于断裂点位置不同,以及基因缺失，还可能出现其它阳性信号模式。分子生物学(Molecular) 检测方法： RQ-PCR, Sanger测序、二代基因测序、片段分析 检测项目： 融合基因筛查、基因表达检测、基因序列突变检测 定性分析 做什么？1.融合基因筛查 怎么

9、做？Blood Blood S SampleampleRNARNAcDNAcDNARNA ExtractionRNA ExtractionRTRTQRT- PCRQRT- PCR 定量分析 做什么？1.融合基因2.基因表达 怎么做？Blood Blood S SampleampleRNARNAcDNAcDNARNA ExtractionRNA ExtractionRTRTQRT- PCRQRT- PCR扩增曲线图：扩增曲线图：横坐标：横坐标：扩增循环数（扩增循环数（CycleCycle）；纵坐标纵坐标：荧光强度每个循环进行一次荧荧光强度每个循环进行一次荧光信号的收集光信号的收集荧光基团荧光基团

10、荧光检测元件荧光检测元件 突变分析基因突变点突变置换插入缺失多点突变重排 插入 缺失 SangerSanger测序、测序、SNESNE片段分析片段分析 Sanger测序确定一条染色体片断上的碱基顺序。确定一条染色体片断上的碱基顺序。SangerSanger法：法： 在在PCRPCR时加入荧光标记的复制终止剂，比如时加入荧光标记的复制终止剂，比如ddA,ddT,ddC,ddGddA,ddT,ddC,ddG（相应于（相应于4 4种碱基）种碱基） ddXddX的两个作用：的两个作用： 可以当作正常碱基参与复制可以当作正常碱基参与复制 一旦链入一旦链入DNADNA中，其后就不能再继续连接中，其后就不能再继续连接 它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上酸上 谁终止，碱基就是谁谁终止，碱基就是谁 SNE (TPMT分型) 片段分析技术基础：荧光标记的引物片段分析=分离荧光标