细胞及细胞工程

1、2014细胞及细胞工程大实验授课对象：生物工程周周次次日期日期讲授的简要内容（大纲章节名称、教学重点）讲授的简要内容（大纲章节名称、教学重点）学学时时测验测验及作及作业数业数49 9.1818-9.249.24实验实验1 细胞的凝集反应细胞的凝集反应31次次59 9.2525-9.309.30实验实验2 植物组织培养植物组织培养I（培养基配制、外植体的处理与愈伤（培养基配制、外植体的处理与愈伤组织的诱导）（设计、开放性实验）组织的诱导）（设计、开放性实验）31次次71010.9-10.1510.15实验实验3 细胞膜的渗透性细胞膜的渗透性31次次81010.16-10.2210.22实验实验4

2、 动物细胞培养用具的清洗与消毒动物细胞培养用具的清洗与消毒(培养基的配制、消培养基的配制、消毒、玻璃用品和金属材料的清洗与消毒毒、玻璃用品和金属材料的清洗与消毒)31次次91010.23-10.29.29实验实验5 鸡胚细胞的细胞原代培养（取材、材料和处理、接鸡胚细胞的细胞原代培养（取材、材料和处理、接种、培养）（设计、开放性实验）种、培养）（设计、开放性实验）31次次91010.23-10.29.29实验实验6 鸡胚细胞的细胞传代培养鸡胚细胞的细胞传代培养31次次91010.23-10.29.29实验实验7 鸡胚细胞的冻存与复苏鸡胚细胞的冻存与复苏31次次101010.23-10.29.29

3、实验实验8、9 玉米成熟胚培养玉米成熟胚培养61次次111010.30-11.511.5实验实验10 细胞骨架的观察细胞骨架的观察31次次121111.6-11.1211.12实验实验11植物液泡系的超活观察与染色植物液泡系的超活观察与染色31次次131111.13-11.1911.19实验实验12 叶绿体的分离和荧光观察叶绿体的分离和荧光观察31次次实验顺序可能因实验顺序可能因为实验材料或药为实验材料或药品等原因有所调品等原因有所调整，需要准备的整，需要准备的实验如有调整，实验如有调整，将临时通知。将临时通知。植物组织培养实植物组织培养实验验和和动物细胞培养用动物细胞培养用具的清洗与消毒具的

4、清洗与消毒均需均需要提前一天准备，要提前一天准备，请相关实验值日请相关实验值日学生及时做好准学生及时做好准备。备。实验报告的基本要求实验报告的基本要求1、实验报告的六-七个部分七个部分：实验目的、实验原理、实验用品、实验方法、实验结果、实验分析、思考题及答案。2、实验的结果实验的结果要求真实、详细（在报告的右边留2-3厘米（对折），用于记录实验过程中观察到的现象）。3、实验结果中，凡是有显微图片的，需要在图片下标明“图图N *的显微观察结果（物镜放大倍数的显微观察结果（物镜放大倍数X目镜放大倍数目镜放大倍数X ）”。4、实验分析实验分析应该紧扣实验结果和原理，不能凭空分析，也不要漏掉重要的现象

5、没有分析。5、认真预习认真预习，在实验前对可能得到的实验结果有个明确的预测，实验过程中出现预料之外的现象时，条件许可时，应该重复实验。6、注意事项注意事项等内容，可以记在笔记本或实验指导书上，不要写在实验报告上，避免报告中出现检讨式的结果或分析检讨式的结果或分析。实验一实验一 细胞的凝集反应细胞的凝集反应细胞工程实验课件细胞工程实验课件一、实验目的一、实验目的了解细胞膜的表面结构；了解细胞膜的表面结构；二、实验原理二、实验原理 凝集素凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。三、实验用品三、实验用品 1 器材器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧

6、杯、10ml移液管、试管、试管架 2 材料材料: 土豆块茎、 2 鸡血红细胞 3 试剂试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。 四、实验步骤 1 鸡血红细胞悬液制备 取己加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心 min，重复4次，按红细胞压积用生理盐水配成鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备 土豆克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h3 细

7、胞凝集反应制备不同浓度梯度的红细胞液：制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的兔血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5；再去一只试管

8、，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0；土豆凝集素滴、鸡血红细胞液滴载玻片上混匀，静置min，参考结果思考题：思考题：如果你在显微观察时，看到很多碎片状小块发生凝集，而不如果你在显微观察时，看到很多碎片状小块发生凝集，而不是圆形的细胞，请分析可能导致这种现象的原因。是圆形的细胞，请分析可能导致这种现象的原因。实验二实验二 植物组织培养（培养基的配植物组织培养（培养基的配制、外植体的处理与愈伤组织的诱制、外植体的处理与愈伤组织的诱导）导）一、实验目的一、实验目的 了解植物组织培养的基本原理，掌握培养基配制和消毒、植物材料的处理、了解植物组织培养的基本原理，掌握培养基配制和消毒、植物材料的处理、接种

9、等基本技术。接种等基本技术。二、实验原理二、实验原理植物细胞的全能性植物细胞的全能性二、实验用品二、实验用品 超净工作台、培养架、镊子、解剖刀、酒精灯、脱脂棉、烧杯、广口瓶、培超净工作台、培养架、镊子、解剖刀、酒精灯、脱脂棉、烧杯、广口瓶、培养皿。养皿。 20%次氯酸钠、次氯酸钠、70%酒精、无菌水、培养基母液。酒精、无菌水、培养基母液。金盏菊的茎段与叶片金盏菊的茎段与叶片四、实验步骤四、实验步骤1、培养基配置：、培养基配置： 诱导愈伤组织的培养基为：诱导愈伤组织的培养基为：MS+2，4-D 0.5mg/L+NAA 1mg/L+6-BA 2mg/L 3%蔗糖蔗糖+1.3%琼脂琼脂,pH 5.8

10、。2、叶片的消毒：、叶片的消毒： 取幼嫩叶片用自来水充分洗净后，经取幼嫩叶片用自来水充分洗净后，经75%酒精消酒精消毒毒30s, 20%次氯酸钠溶液浸泡次氯酸钠溶液浸泡8min，无菌水冲洗，无菌水冲洗3-4次后，去掉主次后，去掉主叶脉和大的侧叶脉，将叶片切成叶脉和大的侧叶脉，将叶片切成1.0-1.5cm2的小方块，的小方块，3、接种：、接种：用用75%酒精擦洗接种台表面，解除三角瓶上捆扎的线绳，酒精擦洗接种台表面，解除三角瓶上捆扎的线绳，有必要的话可以用沾有有必要的话可以用沾有75%的酒精的棉球把三角瓶表面擦一下，把的酒精的棉球把三角瓶表面擦一下，把三角瓶按培养基处理整齐排列在接种台左侧，然后

11、。三角瓶按培养基处理整齐排列在接种台左侧，然后。4、注意事项：、注意事项：消毒以后的所有操作过程，都应在超净工作台上进消毒以后的所有操作过程，都应在超净工作台上进行，操作所用的镊子、解剖刀和剪刀使用前插入行，操作所用的镊子、解剖刀和剪刀使用前插入75%乙醇溶液中，乙醇溶液中，使用时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后再切割。轻轻打开封口膜，使用时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后再切割。轻轻打开封口膜，将三角瓶口在火焰上方灼热灭菌，同时把长镊子也放在火焰上方灼将三角瓶口在火焰上方灼热灭菌，同时把长镊子也放在火焰上方灼烧，将烧过的镊子触动培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的烧，将烧过的镊子触动培养基部分

12、，使其冷却，以免烧死被接种的外植体，然后将培养皿打开一小缝，用镊子取出处理好的叶片，背外植体，然后将培养皿打开一小缝，用镊子取出处理好的叶片，背面朝下放到培养基表面。在酒精灯火焰上转动三角瓶一圈使瓶口灼面朝下放到培养基表面。在酒精灯火焰上转动三角瓶一圈使瓶口灼热灭菌。然后用封口膜封口，待所有人完成实验后，将其放入培养热灭菌。然后用封口膜封口，待所有人完成实验后，将其放入培养箱内进行培养，在培养箱内，分班做好标记（标记内容包括：班级箱内进行培养，在培养箱内，分班做好标记（标记内容包括：班级名称、接种日期、接种数量、培养基类型等）。名称、接种日期、接种数量、培养基类型等）。 注意：注意：（1）从室

13、外取得材料，要用自来水冲洗数分钟，对表面不）从室外取得材料，要用自来水冲洗数分钟，对表面不光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料，冲洗时间要光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料，冲洗时间要长，必要时要用毛刷刷洗。长，必要时要用毛刷刷洗。（2）外植体要选用两种消毒剂交替浸泡，初次实验灭菌时）外植体要选用两种消毒剂交替浸泡，初次实验灭菌时间要设置一定的时间梯度来确定最佳的灭菌时间。常用间要设置一定的时间梯度来确定最佳的灭菌时间。常用的消毒剂的见表的消毒剂的见表1。（3）工作台接种时，应尽量避免做明显扰乱气流的动作）工作台接种时，应尽量避免做明显扰乱气流的动作（比如说、笑、打喷嚏），以免影响气流，造成

14、污染。（比如说、笑、打喷嚏），以免影响气流，造成污染。且操作过程中要不时用且操作过程中要不时用75%的酒精擦拭双手。的酒精擦拭双手。（4）接种前培养基出现大量污染现象要区分原因。）接种前培养基出现大量污染现象要区分原因。（5）接种后培养基出现大面积污染、菌落分布不匀，主要是接种过）接种后培养基出现大面积污染、菌落分布不匀，主要是接种过程中发生的污染所致。可能是接种室不洁净、菌类孢子过多、镊子程中发生的污染所致。可能是接种室不洁净、菌类孢子过多、镊子带菌、操作人员手未彻底消毒、操作人员呼吸及超净工作台出现故带菌、操作人员手未彻底消毒、操作人员呼吸及超净工作台出现故障等原因引起。应保持无菌接种室洁

15、净，并定期用甲醛等熏蒸灭菌；障等原因引起。应保持无菌接种室洁净，并定期用甲醛等熏蒸灭菌；在接种前无菌室用紫外灯灭菌时间不低于在接种前无菌室用紫外灯灭菌时间不低于20-30 min；用；用75%酒精酒精喷雾杀菌降尘，超净台开启喷雾杀菌降尘，超净台开启15-20 min后方可使用；镊子等接种工后方可使用；镊子等接种工具严格彻底灭菌，且接种时使用具严格彻底灭菌，且接种时使用1次灭菌次灭菌1次；操作过程中经常用次；操作过程中经常用75%酒精等消毒剂擦洗手部等措施。酒精等消毒剂擦洗手部等措施。（6）接种后外植体周围发生菌类污染可能因外植体表面灭菌不彻底）接种后外植体周围发生菌类污染可能因外植体表面灭菌不

16、彻底所致。解决方法是所致。解决方法是:外植体用饱和洗涤剂浸泡外植体用饱和洗涤剂浸泡10-1 5 min，自来水，自来水冲洗冲洗0 .5-2h后，再选择适宜的灭菌剂消毒，一般用后，再选择适宜的灭菌剂消毒，一般用0.1-0.2%升汞升汞灭菌最好。对于一些凹凸不平或有茸毛的外植体采用灭菌剂中加灭菌最好。对于一些凹凸不平或有茸毛的外植体采用灭菌剂中加“吐温一吐温一80”等湿润剂的办法，增加其渗透性，以提高杀菌效果。等湿润剂的办法，增加其渗透性，以提高杀菌效果。消毒剂名称消毒剂名称使用浓度（使用浓度（%）去残留难去残留难易易灭菌时间（灭菌时间（min）消毒效果消毒效果乙醇7075易0.13好氯化汞0.1

17、0.2较难215最好漂白粉饱和溶液易530很好次氯酸钙910易530很好次氯酸钠2易530很好过氧化氢1012最易515好表表1 植物组织培养中常用的消毒剂植物组织培养中常用的消毒剂思考题思考题1 1、接种后污染调查、接种后污染调查观察接种后第天的污染情况，填入下表：观察接种后第天的污染情况，填入下表：接种日期培养基种类接种数污染率生长情况注：注：污染率（%）=（污染的外植体数/总接种外植体数）1002、外植体用消毒剂消毒后，为什么要用无菌水漂洗？有时候会在消毒溶、外植体用消毒剂消毒后，为什么要用无菌水漂洗？有时候会在消毒溶液中加入液中加入12滴的表面活性物质，例如吐温滴的表面活性物质，例如吐

18、温80或吐温或吐温20，为什么？，为什么？3、在接种过程中，通过哪些措施防止细菌对接种工具、在接种过程中，通过哪些措施防止细菌对接种工具接种材料的污染？接种材料的污染？实验三实验三 细胞膜的渗透性细胞膜的渗透性 细胞膜具有选择通透性，使细细胞膜具有选择通透性，使细胞能够在不同的外界环境下保持自身胞能够在不同的外界环境下保持自身的稳恒状态，这样细胞才能够生存的稳恒状态，这样细胞才能够生存。细胞生物学实验课件细胞生物学实验课件实验目的实验目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度的速度。实验原理实验原理 溶血现象可作为物质是否进入红细胞及测溶血现象可作为物

19、质是否进入红细胞及测量物质进入红细胞速度的指标。量物质进入红细胞速度的指标。实验原理实验原理 红细胞置于等渗溶液中，溶质分子进入细胞，使红细胞置于等渗溶液中，溶质分子进入细胞，使细胞内渗透活性分子的浓度改变，继而导致水的细胞内渗透活性分子的浓度改变，继而导致水的摄入，使细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。摄入，使细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。 不同溶质分子进入细胞膜的速度不同，发生溶血不同溶质分子进入细胞膜的速度不同，发生溶血所需的时间也不同。所需的时间也不同。 红细胞的溶血时间与溶质分子的极性、分子大小红细胞的溶血时间与溶质分子的极性、分子大小有关；同时细胞膜对进入细胞分子的选择性也对有关；同

20、时细胞膜对进入细胞分子的选择性也对溶血现象的发生起重要作用。溶血现象的发生起重要作用。实验用品 抗凝鸡血抗凝鸡血 小烧杯、试管及试管架、移液管小烧杯、试管及试管架、移液管 0.17 mol/L氯化钠氯化钠 0.17mol/L氯化铵氯化铵 0.17 mol/L醋酸氨醋酸氨 0.17 mol/L硝酸钠硝酸钠 0.12 mol/L硫酸钠硫酸钠 0.12 mol/L草酸铵草酸铵 0.32 mol/L葡萄糖葡萄糖 0.32 mol/L甘油甘油 0.32 mol/L乙醇乙醇 0.32 mol/L丙酮丙酮 蒸馏水蒸馏水实验方法实验方法 血细胞悬液的制备血细胞悬液的制备 取取1mL抗凝全血于抗凝全血于50mL

21、小烧杯中，再加入小烧杯中，再加入9mL 0.17 mol/L氯化钠，配置好稀释的血细胞悬液。氯化钠，配置好稀释的血细胞悬液。 溶血现象观察溶血现象观察-对照对照 取试管取试管1支，加入支，加入mL蒸馏水，然后再加入蒸馏水，然后再加入. mL稀释的鸡血，注意观察溶液的颜色变化，溶液由不透稀释的鸡血，注意观察溶液的颜色变化，溶液由不透明的红色变为红色透明，红细胞发生破裂，造成所有明的红色变为红色透明，红细胞发生破裂，造成所有红细胞溶血，使光线容易通过。显微镜下观察溶血前红细胞溶血，使光线容易通过。显微镜下观察溶血前后红细胞的形态。后红细胞的形态。 观察红细胞对各类物质的渗透性观察红细胞对各类物质的

22、渗透性: 取试管取试管10支，分别加入上述支，分别加入上述10种溶液各种溶液各5 mL，再，再 加入加入0.5mL稀释的鸡血，记下时间，稀释的鸡血，记下时间，轻轻摇动使混匀，注意是否发生溶血；若轻轻摇动使混匀，注意是否发生溶血；若发生溶血，记录溶血过程所需的时间发生溶血，记录溶血过程所需的时间。思考题思考题 1.推断下列溶液的溶血反应会如何，并做实验证推断下列溶液的溶血反应会如何，并做实验证实。实。 0.17 mol/L氯化钾、氯化钾、0.17 molL硝酸钾硝酸钾 0.12molL氯化镁、氯化镁、0.12 molL氯化钙、氯化钙、0.10 molL硫酸钾、硫酸钾、0.10molL醋酸钾、醋酸

23、钾、0.10mol/L 柠檬酸柠檬酸钠、钠、0.32 molL，甘露醇、，甘露醇、0.32mol/L 蔗糖。蔗糖。 2.溶液的渗透压主要与哪些因素有关溶液的渗透压主要与哪些因素有关?对简单盐对简单盐 溶液如何粗略计算出其渗透压溶液如何粗略计算出其渗透压?渗透压只与溶液中溶质的粒子数有关，与溶质本性无关，这些溶液都含有大致相同数量的可自由移动的粒子，所以渗透压相同。同浓度溶液中电解质（如氯化钠、氯化铵）溶液的渗透压大于非电解质（如葡萄糖、甘油）是由于电解质可以解离成离子，粒子数变多。但强电解质由于正负离子之间的吸引力比较大，有效可移动粒子数比实际粒子数略少，譬如0.17mol/L的NaCl溶液并

24、不意味着存在0.34摩尔的有效可移动粒子，而是相当于0.32mol/L的非电解质溶液。实验四实验四 植物组织培养（植物组织培养（II） 芽的诱导芽的诱导细胞生物学实验课件细胞生物学实验课件实验目的实验目的：熟练组织培养的原理，掌握芽诱：熟练组织培养的原理，掌握芽诱导的原理与方法导的原理与方法实验原理实验原理：较低比例的生长素：较低比例的生长素/细胞分裂素是细胞分裂素是诱导芽形成的必要条件，在无菌的环境下，诱导芽形成的必要条件，在无菌的环境下，对我们诱导得到的愈伤组织进行诱导，能够对我们诱导得到的愈伤组织进行诱导，能够得到芽。得到芽。实验用品实验用品:超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培超

25、净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿、解剖刀养皿、解剖刀MS培养基母液、多种激素、蔗糖、琼脂、酒精培养基母液、多种激素、蔗糖、琼脂、酒精诱导分化得到的愈伤组织诱导分化得到的愈伤组织实验方法实验方法:1.按实验一的步骤按实验一的步骤配制培养基配制培养基并灭菌，同时对接种用并灭菌，同时对接种用工作台工作台处理处理2.将培养瓶用蘸有将培养瓶用蘸有70酒精的脱脂棉擦拭干净酒精的脱脂棉擦拭干净3.将诱导得到的愈伤组织转移到分化培养基上诱导分化将诱导得到的愈伤组织转移到分化培养基上诱导分化.转移转移前去除老化的组织，发黄及变褐的组织。前去除老化的组织，发黄及变褐的组织。附附:诱导愈伤组织分化时则附

26、加6BA2mg/l、NAA0.5mg/l。诱导根生成时,附加IBA2mg/l。所有培养基的蔗糖浓度均为3,pH5.86.0。实验结果统计：实验结果统计：接种日期与瓶数第一次检查结果第二次检查结果生根瓶数(%)日期污染情况生长情况日期污染情况生长情况参考实验结果参考实验结果实验分析：实验分析：1.培养基组成培养基组成2.培养条件（温度、培养条件（温度、pH值、琼脂）值、琼脂）3.生长速度与生长情况生长速度与生长情况细胞生物学实验课件细胞生物学实验课件实验五实验五 动物细胞原代培养动物细胞原代培养细胞生物学实验课件细胞生物学实验课件取出肝取出肝脏脏消化数分钟消化数分钟中止消化、吹散细胞中止消化、吹

27、散细胞收集细胞、离收集细胞、离心心计数计数细胞传细胞传代代37、5CO2培养培养 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内（in vivo）的功能活动是十分困难的。 如果把活细胞拿到体外（in vitro）培养进行观察和研究，则要方便得多。 高等动植物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不适就要死亡。所以细胞培养技术（cell culture）就是选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 一、实验目的一、实验目的原代培养 （primary culture）：从动物机体取出的进行培养的细胞群。原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停

28、止生长，需要重新更换培养基。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养（Passage）。 二、实验原理二、实验原理三、实验用品 倒置显微镜、倒置显微镜、镊子、剪刀、烧杯、镊子、剪刀、烧杯、培养皿、培养皿、 锥瓶、培养瓶、锥瓶、培养瓶、胶塞、移移液管、液管、EP管管 1640培养基、培养基、hanks液、胰酶、液、胰酶、双抗双抗 胎胎鼠 1.超净工作台内： 污物缸1个、酒精灯2个、 酒精棉球1瓶、大镊子1把、打火机1个、 5毫升移液器, 1640培养基30毫升(方瓶，2人共用） 、 Hanks液20毫升（圆瓶，2人共用）； 2.饭盒1个,枪头4支,抗抗 菌菌 素素 的的 使使

29、用用抗生素的作用：在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。抗生素的使用量：通常是青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。庆大霉素：每毫升100单位方便、广谱、稳定完全培养基的组成完全培养基的组成 1640基础培养基 95 血清 5 碳酸氢钠 2.0 g/L 青、链霉素 各100单位毫升四、实验步骤四、实验步骤照egg,画气室线. egg消毒,台面消毒;戴无菌袖套.点燃酒精灯，手部消毒。将egg置于蛋座（气室朝上），外表再次消毒。中镊敲碎蛋壳，沿气室线剥开。Hanks液培养皿A，B。(大镊子夹瓶塞，用吸管吸取)小镊撕内膜，挑出鸡胚

30、 A清洗,剪去头,肝,腿,翅等。6. 将材料转入B再次清洗;A换Hanks，材料再于A中漂洗;8. 剪取1/51/3的组织,转入小烧杯(10ml) ，剪成0.51mm3碎块。将碎块倒入三角锥瓶,用1ml胰酶清洗小烧杯,合入锥瓶,迅速摇匀;10. 锥瓶加塞,覆口,拿出工作台,于37 水浴锅中消化57分钟(严格)!,中间摇动23次;于超净工作台中加入45ml培养基,终止消化.用吸管充分吹打78次;7.将细胞悬液用纱布过滤,进入20ml烧杯(凹面!)用培养基清洗纱布2次,每次34ml;分别取2ml ,2ml和3ml细胞悬液接种至三只培养瓶中(3ml在塑料瓶),补加培养液至总体积5ml;培养瓶加塞,

31、侧面标记。 37 培养.后天上午来观察细胞,并进行细胞传代.生长面生长面含鸡胚鸡蛋示意图标记气室示意图培养中的成纤维细胞肉眼观察显微镜观察污染细菌黄、混大量小粒、杆霉菌霉斑大量菌丝未污染未生长红、清组织边缘无迁移生长黄、清、生长晕、连片铺瓶组织边缘细胞迁移、细胞长梭形、连片 霉菌一般红、清，初期只有菌丝，没有霉斑。 放线菌、酵母菌污染。 细胞初期呈三角形，后呈长梭形。 胞体大而透明，说明生长情况良好，反之，则说明培养条件不佳或细胞已经衰老。 黄、清。细胞生物学实验课件细胞生物学实验课件实验六实验六线粒体的分离与观察线粒体的分离与观察 一一.实验目的实验目的 用差速离心法分离动、植物细胞线粒体。

32、二二. 实验原理实验原理线粒体（mitochondria）是真核细胞特有的，司能量转换的重要细胞器。细胞中的能源物质脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过藕联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。制备线粒体采用组织匀浆悬液介质中进行差速离心的方法。在一给定的离心场中（对于所使用的离心机，就是选用一定的转速），球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在一均匀悬浮介质中离心一定时间内，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉

33、降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次在分离。悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意使样品保持4，避免酶失活。线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法。詹纳斯绿B（Janus green B）是对线粒体专一的活细胞染料，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。三三 实验用品实验用品

34、(一)、材料玉米黄化幼苗(水稻、高粱等幼苗均可)。(二)、试剂1分离介质；0.25 mol/L蔗糖，50mmol/L的Tris盐酸缓冲液(pH74)，3 mmo/L EDTA，0.75mg/ml牛血清白蛋白(BSA)。50mmol/L的TrisHcl缓冲液(pH74)配法： 50ml 0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与42ml 0.1 mol/L盐酸混匀后，加水稀释至100ml。2保存液：0.3mol/L甘露醇(pH74)320次氯酸钠(NaClO)溶液。41詹纳斯绿B染液，用生理盐水配制。(三)、器材温箱、冰箱、纱布、瓷研钵、冷冻控温高速离心机。四四 实验方法实验方法从植物

35、细胞分离线粒体，除了作线粒体功能测定外，在植物细胞遗传工程中，常用于分离核外基因线粒体DNA等目的。分离线粒体的方法仍采用均匀介质中的差速离心。介质中0.25 mol/L蔗糖也可以用 0.3mol/L甘露醇代替。EDTA整合二价阳离子，Ca2除去后细胞间粘着解体，促使组织分散成单个细胞。牛血清白蛋白(BSA)能包在细胞外面，并作为竞争性底物削弱蛋白酶的作用。1玉米种子用20次氯酸钠溶液浸泡10min消毒，清水冲洗30min，再浸泡清水15h。将种子平铺在放有湿纱布的盘内，保持湿度，置温箱28于暗处培肓23d。待芽长到12cm长时剪下约15g，放041h。2加3倍体积分离介质，在瓷研钵内快速研磨

36、成匀浆。3，用多层纱布过滤，滤液经700rpm离心10min。除去核和杂质沉淀。4，取上清液4 000rpm离心10min，沉淀为线粒体。再同上离心洗涤一次。5沉淀为线粒体，可存于0.3mol/L甘露醇中。注意以上匀浆化及离心均控制在04进行。6线粒体的观察：取线粒体沉淀涂在清洁的载玻片上，不待干立即滴加1詹纳斯绿B染色20min，放上盖玻片，用显微镜观察，线粒体是蓝绿色圆形颗粒。实验七、 细胞中酸性磷酸酶的定位 一、实验目的 1.了解并掌握酸性磷酸酶定位的原理及操作步骤。 2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布。 二、实验原理 酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的特征性酶，主要存在于巨噬细胞,定位于溶酶

37、体内。正常条件下,巨噬细胞处于休止状态,酶活性很低。但在合适的pH条件下，经过活化，其形态、代谢和功能上表现出一系列显著的变化， 如膜活性增高和酸性磷酸酶活性增强，从而改变其渗透性底物可以渗入,酶活力被显示。反应如下： -甘油磷酸钠- 甘油 +PO4 3- PO43-+Pb(NO3)2 -Pb3(PO4)2（沉淀） Pb3(PO4)2 +(NH4)2S-PbS (棕黑色) 三、实验材料、试剂和仪器 1.材料 小白鼠 2.试剂1)甲醛钙固定液：甲醛10ml,10%氯化钙 10ml,蒸馏水80毫升。2)酸性磷酸酶作用液:称取硝酸铅25mg,加0.05mol/L 乙酸缓冲液22.5ml,搅动使之全部

38、溶解后,再缓慢地滴加3% -甘油磷酸钠液2.5ml,边加边搅动防止产生沉淀,总量25ml.(现配制,不能储存) 。 3)2硫化铵溶液：硫酸铵2毫升98毫升水。4)0.05molL乙酸缓冲液。A液（0.2mol/L乙酸液）：冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml B液（0.2mol/L乙酸钠液）：NaAc.3H2O2.72g加蒸馏水至00毫升取A液毫升B液70毫升蒸馏水300毫升00ml，煮沸灭菌，保存，使用时热水浴融化 3.仪器 用具：注射器 恒温水箱 显微镜 擦镜纸解剖盘四、实验方法与步骤 .前处理 （）小白鼠每日腹腔注射淀粉肉汤ml，连续注射天 （）在第天,再向腹腔注射ml生理盐水，过min用

39、颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，把内脏推向一侧，用不带针头的注射器或吸管吸取腹腔液.制片 1.将腹腔液滴一滴于冰冻的干净载玻片上，涂开，自然干燥。 2.放入作用液中，37 保温30min 。 3.蒸馏水漂洗片刻。 4.放入甲醛钙固定液中固定5min 。 5.蒸馏水漂洗片刻。 6.放入2%硫化铵液3-5min 。 7.蒸馏水漂洗,镜检。3.对照实验:标本放入作用液前先用高温（50）处理30min,使酶失去活性，做好标记，其它步骤同上3-7步。五、实验中的注意事项 1.铅离子的浓度，作用时间 作用液中铅离子的浓度是至关重要的，必须现配现用，当铅离子浓度过低时产生的磷酸离子不能被捕捉而引起弥散，并可进

40、入细胞核内造成细胞核染色的假阳性，孵育时间过长也可发生酶扩散和核染色的现象 。 皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液 不流入腹腔。腹腔内的冲洗液要全部吸干。六、实验结果与分析 巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，酸性磷酸酶极为丰富。整个细胞质区域都有黑色沉淀。中性粒细胞呈现阴性反应。七、相关理论知识 巨噬细胞（M）发育：骨髓多能干细胞定向干细胞（髓样干细胞）单核母细胞前体单核细胞单核细胞血液组织（分化为巨噬细胞） M分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎存在于所有表皮和黏膜下组织。 M形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。 M分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨

41、噬细胞，可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为巨噬细胞，如果给小鼠腹腔注射某种刺激物，可使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。 在高等动物中存在大小两类吞噬细胞（巨噬细胞和嗜中性粒细胞），专司吞噬作用，在细胞的非特异免疫功能中发挥重要作用。1.单核细胞 单核细胞来自骨髓的前单核细胞，发育成熟后释放到血液中。血液中单核细胞已向全身各组织并进一步分化成各种组织的巨噬细胞。血液中单核细胞为圆形或椭圆形，直径14-20微米，在形态上很难和其他独核细胞相区分。胞质中含有嗜天青颗粒，它是一种溶酶体，其中含有过氧化物酶，酸性磷酸酶，非特异性酯酶和溶菌酶等

42、，这些酶与单核细胞的杀伤和消化功能有关。单核吞噬细胞在血液中约占白细胞的1%-3%，其在血液中的半衰期约为8-10个小时，一旦进入组织分化为巨噬细胞后，其生命周期可长达数月至数年。2.巨噬细胞的特性组织中的巨噬细胞则呈显著的多形性，在培养条件下对塑料或玻璃表面具有极强的粘附性，一次可利用这一特性分离巨噬细胞并与非粘附性细胞分开，但其作用机制不详。巨噬细胞在体内可借其表面粘附分子与其它细胞或细胞外基质黏附在一起。巨噬细胞的另一特性是对异物通过不同机制具有吞噬作用（phagocytosis）,吞饮（endocytosis）或胞饮作用（pinocytosis）。可将异物吞入胞内，并借其胞浆内的大量液

43、泡及颗粒中的内含物和代谢产物将吞入的异物降解，消化和清除。七、实验报告及思考题 简图表示所观察到的酸性磷酸酶显示结果和分布。思考题 在制片的过程中为什么要采用冷冻涂片？ 简述巨噬细胞（M）发育及M分布？实验八实验八 巨噬细胞的吞噬现象观察巨噬细胞的吞噬现象观察一一.实验目的实验目的1 观察小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象观察小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象和过程，理解巨噬细胞的作用及其对生物和过程，理解巨噬细胞的作用及其对生物体的意义。体的意义。2 掌握小白鼠的固定和腹腔注射技术，以掌握小白鼠的固定和腹腔注射技术，以及小白鼠脱臼处死的方法。及小白鼠脱臼处死的方法。二、原理二、原理 吞噬作用是机体内

44、普遍存在的一种非特异吞噬作用是机体内普遍存在的一种非特异性免疫机制。高等动物具有大小两类吞噬性免疫机制。高等动物具有大小两类吞噬细胞细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞，专司吞噬作用，为非持异免疫功能的重要组成部噬作用，为非持异免疫功能的重要组成部分。分。 外源蛋白或异物可激发机体巨噬细胞的趋外源蛋白或异物可激发机体巨噬细胞的趋化作用，继而产生变形运动，吞噬异物，化作用，继而产生变形运动，吞噬异物，在溶酶体的作用下破坏分解异源蛋白。在溶酶体的作用下破坏分解异源蛋白。三、实验用品三、实验用品1.器材：器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2.

45、试剂：试剂：0.85%生理盐水； Alsever溶液：（葡萄糖：2.05克，柠檬酸钠：0.8克，柠檬酸0.055克，氯化钠：0.42克，加蒸馏水到100mL，加热溶解后调pH值至6.1，高压灭菌后4保存）；6%淀粉肉汤（牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g以及氯化钠0.5g溶解于蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g、0.3g台盼蓝，溶解后高压灭菌，4保存）。3材料：材料：(1) 小白鼠(2) 1%鸡红细胞悬液鸡血1ml4mlAlsever 溶液4保存，用前加510倍体积0.85生理盐水混匀离心（1500rpm,10min）洗涤2次，用0.85生理盐水配成1悬液。四实验步骤四实验步骤1提前一天（

46、提前一天（12-24h）给小白鼠腹腔注射）给小白鼠腹腔注射1ml含台含台盼蓝的盼蓝的6淀粉肉汤。注意注射时勿伤及小鼠肝、淀粉肉汤。注意注射时勿伤及小鼠肝、脾、血管，勿注入肠内。脾、血管，勿注入肠内。2实验时，将注射了淀粉肉汤的小鼠固定，并给实验时，将注射了淀粉肉汤的小鼠固定，并给其腹腔注射其腹腔注射1鸡红细胞液鸡红细胞液1ml（注射时进针要果（注射时进针要果断，进针位置不能太深，拔针要轻缓），稍过片断，进针位置不能太深，拔针要轻缓），稍过片刻，轻按揉小鼠腹部，使红细胞分散于腹腔。刻，轻按揉小鼠腹部，使红细胞分散于腹腔。320min后，拉断颈椎处死小白鼠；剖开腹腔，用后，拉断颈椎处死小白鼠；剖开

47、腹腔，用不装针头的注射器（或吸管）吸取腹腔液（大约不装针头的注射器（或吸管）吸取腹腔液（大约0.31ml），滴一滴在载片上，盖片观察。），滴一滴在载片上，盖片观察。五结果五结果1结果：结果：计算吞噬百分比：每计算吞噬百分比：每100个巨噬细胞中吞噬红个巨噬细胞中吞噬红细胞的巨噬细胞数量。细胞的巨噬细胞数量。观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程和现象，观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程和现象，并将各个阶段的吞噬细胞绘图。并将各个阶段的吞噬细胞绘图。2思考题：思考题：(1)实验前注射淀粉肉汤的作用？实验前注射淀粉肉汤的作用？(2)为何巨噬细胞不吞噬小鼠红细胞？为何巨噬细胞不吞噬小鼠红细胞？注射方法：1.抓注

48、射参考结果实验九实验九 玉米成熟胚培养玉米成熟胚培养 一、实验目的与意义一、实验目的与意义学习掌握成熟胚培养方法。玉米的组织培养，特别是胚性细胞系的建立，作为遗传转化操作的主要技术基础，一直受到广泛关注。前人已采用过玉米的多个部分如根、茎、叶、幼穗、幼胚和成熟胚等为外植体，研究了其愈伤组织细胞的分化再生情况，发现幼穗和幼胚愈伤组织具有较高的再分化能力。但幼穗，幼胚的采用受季节限制，而种子保存期长，易获得，可用于较长时间的研究。只是成熟胚脱分化能力较弱，愈伤组织再分化能力差，但如果能改变种子的生理状态，提高其胚性愈伤组织的形成能力，无疑将大大促进小麦胚性细胞系的建立。低温处理具有促进种子从体眠状

49、态转向萌发状态的效应。低温处理对玉米成熟胚愈伤组织的形成也有一定影响，可以提高其愈伤形成和分化能力。二、实验器材二、实验器材超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、烧杯、广口瓶。三、实验药品三、实验药品MS培养基母液、2,4-D、6-BA、KT、吲哚乙酸(IAA)、腺嘌呤、天冬氨酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂。四、实验步骤四、实验步骤1、培养基的制备诱导培养基：MS+ 2 ,4-D2 mg/ L + KT0.5 mg/ L+水解酪蛋白500 mg/ L +蔗糖3%+琼脂0.8%，pH5.8。继代培养基：MS+ 2 ,4-D1 mg/ L + KT0.5 mg/ L+水解酪蛋白300 mg/ L

50、+蔗糖3%+琼脂0.8%，pH5.8。分化培养基：MS+6-BA 2m g/l+水解酪蛋白500 mg/ L +蔗糖3%+琼脂0.8%，pH5.8。小苗培养基:MS +NAA0.2m g/1+腺嘌呤40m g/l+蔗糖3%+琼脂0.8%，pH5.8。生根壮苗培养基：1/2 MS +NAA0.5m g/1 +蔗糖3%+琼脂0.8%，pH5.8。2、无菌材料的获得将玉米种子在4冰箱中充分吸水，用0.1% HgCl2灭菌20min，无菌水冲洗3次。在超净工作台上用75%乙醇浸泡1 min，0.1% HgCl2浸泡5 min，无菌水冲洗2次；再用0.1%HgCl2浸泡810min,无菌水冲洗3次，放入

51、培养皿备用。3、接种用解剖刀将种胚切下，并将胚用镊子轻轻夹破，盾片朝上，分别接种在不同类型的培养基上培养。或直接用手拿种子，用镊子剥取成熟胚接种到培养基，然后用长镊子将盾片朝上。每瓶接种十个左右成熟胚。4、培养培养温度251，每天光照12h。愈伤组织诱导用散射光。2周后统计出愈率：出愈率=产生愈伤数/接种成熟胚总数100%5、继代将胚性愈伤组织转移到继代培养基上继代培养。6、分化 将愈伤组织转移到分化培养基，愈伤组织分化光照强度15002000lx，统计分化率：分化率=产生绿色芽点愈伤数/接种愈伤数100%7、小苗培养将有绿芽的愈伤组织转接到小苗培养基上进行芽苗诱导和伸长。8、壮苗培养在无菌条

52、件下取出绿苗，转入壮苗培养基中培养。9、炼苗打开瓶口，在培养间炼苗23d，转到自然条件下炼苗23d。10、移栽洗去小苗表面的培养基，移栽到小盆里。成活后移栽到大田。五、思考题五、思考题根据所学知识，查阅相关文献，利用成熟胚培养筛选耐盐突变体的实验方案。实验十实验十 细胞骨架的观察细胞骨架的观察 【目的目的】 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。【原理原理】 植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。 考马斯亮蓝 R250(Coomassiebrilliant blue R250)是一种蛋

53、白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。【材料材料】 洋葱鳞叶。【实验用品实验用品】 1试剂： (1) 2考马斯亮蓝R250染色液：称考马斯亮蓝R250 lg，溶于250 mL无水乙醇中，加冰醋酸35 mL，再加蒸馏水至500 mL。 (2) 磷酸缓冲液(pH 6.8)：6.8 mmolL磷酸缓冲液，调至pH 6.8。(3) M缓冲液(pH 7.2)：50 mmolL咪唑、50 mmolL氯化钾、0.5 mmolL氯化镁、l mmolL乙二醇双乙胺醚、0.1mmolL乙二胺四乙酸、1 mmolL巯基乙醇，调至pH 7.2。(4

54、) 1Triton X-100：用M缓冲液配制。(5) 3戊二醛：用M缓冲液配制。2器具： 显微镜，烧杯，玻璃滴管，载玻片，盖玻片，镊子。 【实验步骤实验步骤】1用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约l cm2大小若干片)，置于50 mL烧杯中，加入pH 6.8磷酸缓冲液，使其下沉。2吸去磷酸缓冲液，用1Triton X-100处理20 min。3吸去Triton X-100，用M缓冲液洗3次，每次5 min。4用3戊二醛固定30 min。5磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次，每次5 min。60.2考马斯亮蓝R250染色10 min。7蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学

55、显微镜下观察。8如果染色效果好，则可依次用50乙醇、70乙醇、95乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品，各5 min。然后将样品平展于载玻片上，加1滴中生树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。【实验报告实验报告】 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。实验十一实验十一 植物液泡系的超活观察与染色植物液泡系的超活观察与染色 一、实验目的一、实验目的 1 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布； 2 了解细胞和细胞器的超活染色技术 二、实验原理二、实验原理 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，具形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态面发生变化。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染性，可专一性地对线

56、粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色：而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 三、实验用品三、实验用品 1 器材： 显微镜、恒温水浴锅、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2 试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿、1/3000中性红 3 材料：人口腔上皮细胞、蚕豆幼根根尖四、实验步骤四、实验步骤 （一）线粒体的超活染色与观察（

57、一）线粒体的超活染色与观察 1 口腔上皮细胞线粒体的超活染色 （1）取清洁载玻片放在37恒温水溶锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。 （2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15min(注意染液不可干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 （3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 （二）蚕豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察（二）蚕豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察（

58、1）实验前，把蚕豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使具发芽，胚根伸长到lcm以上（2）用双面刀得把初生的蚕豆幼苗根尖(1-2cm)小心切一纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色5一10min。（3）吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。（4）在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成热区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核

59、挤到细胞一侧贴近细胞壁处。活体染色活体染色是指对生活有机体的细胞或组织是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害能着色但又无害毒毒的一种染色方法。它的目的是的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结显示生活细胞内的某些结构构。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态细胞形态结构和生理病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通过把活体根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通过把活体染色分为染色分为体内活染体内活染与与体外活染体外活染两类。体内活染是以胶体状两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某织小块，以染料溶